江苏省自然科学基金(BK2012788)
- 作品数：5 被引量：46H指数：4
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- 相关机构：江苏省农业科学院南京师范大学南京农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学轻工技术与工程生物学更多>>
- 一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析被引量：5
- 2014年
- 裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。
- 周艳包红朵张辉张莉莉王冉
- 关键词：禽致病性大肠杆菌产肠毒素大肠杆菌进化分析
- 大肠杆菌K88噬菌体的分离鉴定及其生物学特性被引量：17
- 2012年
- 分离鉴定裂解性产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)K88噬菌体,并研究其生物学特性及裂菌效力。用双层平板法从猪场污水中分离噬菌体,通过透射电镜和酶切基因组对获得的噬菌体进行鉴定;同时测定了噬菌体最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱稳定性、热稳定性等噬菌体的生物学特性及其体外裂菌效力。结果表明分离获得了一株产肠毒素性大肠杆菌K88强裂解性噬菌体,命名为PK88-4;其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环;电镜显示:其头部呈正多面体对称,有可伸缩性尾部;核酸类型为双链DNA(基因组大小约60 kb);该噬菌体能耐受60℃左右高温、在pH值为5～10内效价稳定;最佳感染复数为0.01;潜伏期为10 min,暴发期为40 min,裂解量为40;在5 h内对培养液中的大肠杆菌杀灭率将近100%。PK88-4是一株强裂解性肌尾科大肠杆菌K88噬菌体,具有裂解周期短、杀菌能力强等特点,为畜牧业防治产肠毒素性大肠杆菌K88感染提供了新的思路。
- 王冉韩晗张辉包红朵王恬
- 关键词：生物学特性
- 沙门氏菌裂解性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性被引量：22
- 2015年
- 从家禽屠宰场污水中,以肠炎沙门氏菌ATCC13076和禽沙门氏菌CVCC2184为宿主菌,分离到两株裂解性沙门氏菌噬菌体,分别命名为v B_Sen M-PA13076(简称PA13076)和v B_Sen M-PC2184(简称PC2184)。同时对这两株噬菌体进行了噬菌斑、噬菌谱系(含耐药菌)、形态学(透射电镜)、遗传物质、酸碱及热稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性研究。结果表明:两株噬菌体的裂解空斑均透亮清晰;除对本身宿主菌产生强裂解作用,还裂解其他沙门氏菌,为宽噬菌谱,其中PA13076能强裂解一株耐氨苄青霉素ATCC13076转化菌株(A+13076),PC2184则能裂解另一株耐氨苄青霉素CVCC2184转化菌株(A+2184);电镜观察这两株噬菌体均为肌尾病毒科;遗传物质为ds DNA;p H值和温度耐受能力较好;PA13076、PC2184最佳感染复数分别为0.01、10,潜伏期分别为20、30 min,爆发期分别为70、60 min,平均爆发量分别为21、23。
- 包红朵张鹏禹周艳张莉莉张辉陶明煊王冉
- 关键词：肠炎沙门氏菌生物学特性耐药性
- 禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶的表达及其活性分析被引量：4
- 2014年
- 为研究禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09编码的裂解酶对宿主大肠杆菌的裂解作用,克隆表达了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09的裂解酶,并检测了裂解酶的菌体内外裂解活性。利用PCR扩增了禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoM_JS09裂解酶基因(Lysin基因),构建了重组表达质粒pET-32a(+)-LysJS09,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。在37℃IPTG浓度为1.0mmol/L诱导4h表达效果最好。重组融合蛋白LysJS09在BL21(DE3)中获得了高表达,在N端具有His标签,其分子质量约为38.9ku。重组融合蛋白以分泌型方式表达,经His-trap HP(GE)亲和层析柱纯化后获得的重组蛋白LysJS09的纯度为97%。裂解活性试验表明,该裂解酶单独使用和加入EDTA(0.1mol/L)均无体外酶活性;但菌体内裂解试验表明,表达的裂解酶对宿主菌具有一定的裂解作用。
- 周艳包红朵张辉张莉莉王冉
- 关键词：革兰阴性菌
- 多种噬菌体单独及混合使用的喷雾灭菌研究被引量：1
- 2013年
- 以大肠杆菌噬菌体EK99-C为例分析噬菌体EK99-C在空间的喷雾灭菌效率,5mL、1×104CFU/mL的大肠杆菌K99进行人工喷洒污染,5min后喷洒1×109PFU/mL的噬菌体5mL,并且在喷洒后0.5、1、2h分别检测残存的大肠杆菌K99数量。然后,以与大肠杆菌噬菌体喷雾灭菌实验中所用的相同剂量的细菌和噬菌体数量对其他5株食源性致病菌(其中涉及大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和李斯特菌)的噬菌体进行喷雾灭菌实验,并只在喷洒后2h检测残存的细菌数量。结果表明:喷洒噬菌体EK99-C后,在0.5、1、2h时平板上的残存的细菌数均接近于0CFU,其中2h时噬菌体EK99-C灭菌更彻底;噬菌体单独作用组和按体积比等比例混合作用组,均能有效杀灭宿主菌,其中,噬菌体PSA-116喷雾灭菌效果最好,能杀灭100%的宿主菌,噬菌体EK88-4、EK99-C和FWLLm3的杀灭效率约为99%左右。而噬菌体SS-92和PSA-6以喷雾灭菌的方式可杀灭约80%的宿主菌。6种噬菌体按体积比等比例混合作用后2h时的细菌残存个数少于18.50CFU,杀菌效率大于98.7%。
- 包红朵张辉李国峰周艳王冉
- 关键词：噬菌体
