国家重点基础研究发展计划(2002CB512804)
- 作品数：11 被引量：48H指数：4
- 相关作者：王洪海张雪莲谢建平乐军曹健更多>>
- 相关机构：复旦大学西南大学上海市肺科医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌膜蛋白的异源表达与纯化研究进展被引量：5
- 2007年
- 膜蛋白是一类与生物膜相互作用、具有重要功能和独特结构的蛋白质。异源表达纯化一直是了解膜蛋白结构和功能的重要瓶颈。结核分枝杆菌作为典型的胞内致病菌,其膜蛋白的研究具有很好的代表性以及重要意义。目前用于表达膜蛋白的有大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞等表达系统,但结核菌膜蛋白的表达宿主还往往局限于大肠杆菌。异源表达需要综合考虑蛋白的来源、疏水性、跨膜区等特性。低温、加入共表达因子以及改变培养条件有助于结核菌膜蛋白的可溶性表达。另外,包涵体复性也是获得结核菌目的膜蛋白的重要途径。随着新的表达系统,新的促可溶表达策略,新的包涵体复性手段,新的纯化方法的应用,将有更多的膜蛋白异源表达纯化成功,为蛋白质功能研究奠定基础。
- 廖丹谢建平王洪海
- 关键词：结核分枝杆菌膜蛋白异源表达纯化
- 结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究被引量：5
- 2005年
- 目的获得具有生物学活性的结核分枝杆菌重组异柠檬酸裂解酶蛋白。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因ic l,克隆入原核表达载体pET-28 a(+)中,通过在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,获得以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白,并对其酶学性质进行测定分析。结果纯化出具有生物学活性的重组结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶。酶学性质测定分析表明,重组异柠檬酸裂解酶ICL的比活力为7.657×102μmol.mg-1.m in-1,反应最适pH值约为7.4。重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得相对分子质量为50 603.347。在5 mmol/L Tris-C l缓冲液、pH值7.8、25℃条件下,重组ICL的二级结构中相对有43.8%的α螺旋、31.9%的β折叠、3.4%β转角、20.9%无规则卷曲。结论本研究成功克隆表达结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,酶学性质鉴定获得了具有生物学活性的重组蛋白,为该酶免疫学研究及新型抗结核药物的筛选奠定了基础。
- 郝方裴秀英张雪莲张顺宝赖煦卉王洪海
- 关键词：基因表达
- 结核分枝杆菌活性减毒突变体——新型抗结核分枝杆菌候选疫苗
- 2006年
- 汪海鹏张雪莲曹健
- 关键词：结核分枝杆菌结核获得性免疫缺陷综合征突变体
- 结核分支杆菌H_(37)Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆、表达及酶学性质的研究被引量：3
- 2004年
- 以结核分支杆菌H3 7Rv基因组为模板 ,扩增了该菌株的莽草酸脱氢酶基因aroE ,通过在大肠杆菌BL2 1(DE3) pLYS中表达 ,纯化出可溶性的重组结核分支杆菌莽草酸脱氢酶 (SD) .对其酶学性质测定分析表明 :在辅酶NADPH作用下该酶可催化还原 3 脱氢莽草酸生成莽草酸 ,最适pH值为 11,最适温度为 6 3℃ ,比活性 8.2 6× 10 4U/mg .Mg2 + ,Ni2 + ,Zn2 + 等金属离子及NP4 0、TritonX 10 0等变性剂对其酶活有一定的促进作用 ,而SDS则强烈抑制该酶活性 .应用圆二色仪初步测定了重组蛋白的二级结构 ,重组SD的二级结构中大约有 2 9.2 %的α螺旋 ,9.3% β折叠 ,32 .7% β转角 ,2 8.8%无规卷曲 .结核分支杆菌H3 7Rv莽草酸脱氢酶基因的克隆 ,为该酶的晶体结构分析、免疫学研究及抗结核药物靶点的筛选奠定基础 .
- 于海东张雪莲王宝林雷建强曹健淳于利娟许云敏王洪海
- 抗结核杆菌药物靶标的发现和验证
- 2009年
- 1成果的重要意义
结核杆菌的耐药是引起世界结核病重新抬头和蔓延的重要原因之一，发现结核杆菌的耐药机制和寻找新型抗结核药物是控制结核病的关键，发现可有效抑制耐药结核杆菌生长的先导化合物的获得，有望为解决当前结核杆菌临床耐药难题提供可能。
- 关键词：结核杆菌药物靶标耐药机制抗结核药物先导化合物结核病
- 结核病疫苗的研究现状与展望
- 2006年
- 世界范围内,结核病疫情急剧恶化,而疫苗可能是根治结核病的最佳甚至唯一途径。但是目前,唯一可用的疫苗卡介苗(BCG)的免疫效果不理想。因此,开发安全、廉价、实用、有效的新型疫苗就成为结核病防治的研究重点。本文综述了目前主要研究的疫苗,包括减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、重组疫苗、营养缺陷体和基因敲除突变体、带有多肽Mtb72F的 BCG疫苗、转基因植物疫苗等,以及它们当前的研究进展。
- 汪海鹏曹健张雪莲于海东
- 关键词：结核病免疫新型疫苗
- 比较基因组学在筛选抗结核药物靶标中的应用
- 2008年
- 近年来结核病发病率与死亡率明显回升，成为影响人群健康的主要传染病之一。其中耐多药结核病的威胁日益严重，是结核病临床治疗的棘手问题。因此研发新型抗结核药物迫在眉睫。大量已完成测序的模式生物基因组以及人类基因组信息，为生物医药研究提供了丰富的生物学信息。比较基因组学（comparative genomics）即在基因组物理图测序和注释基础上，对已知基因和基因组进行比较，
- 施文钧张雪莲王洪海
- 关键词：比较基因组学抗结核药物药物靶标耐多药结核病人类基因组
- 前脑啡肽原和热休克蛋白参与宿主对结核分枝杆菌感染的应答
- 2005年
- 利用双向电泳比较了由临床分离的结核分枝杆菌感染离体巨噬细胞 U937 前后的全细胞蛋白组表达差异,肽指纹鉴定和生物信息学分析2个表达明显上调的斑点, 确定它们分别为热休克蛋白 HSP105β和前脑啡肽原. 比较蛋白质组学和转录组学研究发现, 热休克蛋白表达提高可能源于转录增加. 提出了从神经免疫学角度研究结核分枝杆菌致病和宿主免疫机理的新思路, 为解释吸毒人群中结核病高发病率提供了基础.
- 徐霖乐军乐军刘丽蓉梁莉王洪海
- 关键词：前脑啡肽原热休克蛋白结核分枝杆菌蛋白质组
- 猫爪草提取物对临床分离结核分枝杆菌蛋白质组表达的影响被引量：18
- 2005年
- 猫爪草已经临床治疗耐药结核病,但其作用机理和有效成分尚不清楚。为研究其可能的作用靶标,采用双向电泳技术比较分析猫爪草提取物作用前后结核分枝杆菌临床分离株的全细胞蛋白表达差异。发现22个蛋白质斑点具有明显差异,对其中3个表达明显下调的蛋白质斑点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析,获得了肽质量指纹图谱。数据库检索分析确定这3个点代表的蛋白质分别为硫代硫酸硫转移酶,延长因子Ts和热休克蛋白X,分别参与厌氧硫代谢、蛋白质翻译和蛋白质折叠分泌、转录调控等过程。这有助于深入研究猫爪草对结核分枝杆菌的作用机理,也为发现新的抗结核病治疗药物靶标提供了线索。
- 何颖乐军胡昌华王洪海谢建平唐翠魏秀莉刘雪梅宋洁
- 关键词：猫爪草结核分枝杆菌蛋白质组双向电泳
- 利用双向电泳技术研究异烟肼耐药MTB感染U937引致的差异表达蛋白被引量：4
- 2006年
- 利用双向电泳技术对结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药株和敏感株感染人源巨噬细胞(U937)后的全细胞蛋白表达图谱进行差异比较和分析,发现其中产生差异的有86个蛋白质斑点.利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术对其中8个差异表达蛋白质斑点进行分析鉴定,获得8个明确的肽质量指纹图谱.通过在蛋白质数据库中进行检索分析,确定这8个蛋白质中的2个为在INH耐药株感染的U937中差异表达的干细胞生长因子和主要组织相容性复合物Ⅰ类抗原,6个为在敏感株感染的U937中差异表达的微管蛋白4β、信号转导和转录激活子3、延长因子-2激酶、环指蛋白29、锌指蛋白193和SNARE Vti1a-β蛋白.实验结果显示,INH耐药株和敏感株感染后的U937表达蛋白有差异,这有助于分析解释临床中观察到的受INH耐药株感染的病例出现毒力下降、致病性下降、传染性降低以及潜伏期延长的现象.结果为针对INH耐药株进行的新疫苗的设计提供了探索方向.
- 刘丽蓉乐军王洪海
- 关键词：异烟肼耐药双向电泳
