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肺腺癌细胞总RNA转染树突状细胞诱导特异性CTLs的体内抗肿瘤效应研究: 2012年; 目的探讨人肺腺癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DCs)诱导抗原特异性的细胞毒T细胞(CTLs)对移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 1)从外周血单个核细胞(PBMCs)中诱导DCs,提取人肺癌细胞A549总RNA,用于电转染DCs,转染后的DCs与自体T细胞混合培养,诱导抗原特异性的CTLs;2)实验分为转染RNA的DCs组、转染PBS的DCs组和未转染DCs组,流式细胞术(FCM)鉴定T细胞表型,3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力;3)建立肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输CTLs,比较肿瘤体积,计算抑瘤率,免疫组化法检测移植瘤组织中Bax、Bcl-2、COX-2和VEGF的表达,并用全自动图像分析系统分析其平均光密度值(MOD)。结果 1)转染RNA的DCs和自体T细胞共育诱导的CTLs的CD8+T细胞大幅度上调,表达率(79.29±2.18)%明显高于转染PBS的DCs组CD8+T细胞(26.10±1.76)%和未转染DCs组CD8+T细胞(25.58±2.73)%(P<0.05);2)转染RNA的DCs显著刺激了自体T细胞增殖,3H-TdR渗入所得的cpm值:阳性对照组为17 105±130,转染RNA的DCs组为7 759±493,转染PBS的DCs组为2 611±161,未转染DCs组为2 248±332(P<0.05);3)成功建立肺癌裸鼠移植瘤模型,实验结束时,转染RNA组裸鼠荷瘤体积(540±99)mm3明显小于转染PBS组(1 572±147)mm3和未转染组(2 043±395)mm3(P<0.05);4)转染RNA组和转染PBS组的抑瘤率分别为68.53%和8.62%;5)转染RNA的DCs诱导的CTLs能显著上调Bax的表达(转染RNA组MOD值为335±105),显著下调Bcl-2、COX-2和VEGF的表达(转染RNA组MOD值分别为146±47、122±33和128±58)。结论人肺腺癌细胞总RNA转染DCs诱导的抗原特异性CTLs对肺腺癌裸鼠移植瘤的生长产生抑制作用。; 蔡秋妍王保龙金娟陈家萍叶书来应美爱完晓菊魏静; 关键词：树突状细胞细胞毒T淋巴细胞转染抗肿瘤效应

转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外研究被引量：3: 2010年; 目的探讨人肺腺癌细胞株A549总RNA转染的人树突状细胞(DCs)在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法利用密度梯度离心法从血细胞分离机新鲜采集的外周富集血中分离出单个核细胞(PBMCs),贴壁获得单核细胞,加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素-4(rhIL-4)进一步诱导为树突状细胞(DCs),同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养诱导扩增细胞毒性T淋巴细胞(CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DC组、未转染DC组和转染空脂质体DC组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。结果1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在3组的表达率分别为(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在3组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在3组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在3组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),3组IL-12分别为(543.24±68.33)、(77.11±27.65)和(167.78±31.84)pg/ml;3组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)、(41.06±10.97)和(56.08±15.96)pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm,3组分别为(7437±720)、(3 807±476)和(4 543±719),阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DC组的特异性杀瘤活性(58.54±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.03)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人肺腺癌细胞A549总RNA转染的DC疫苗体外诱导的特异性抗肿瘤免疫能; 完晓菊王保龙上官志敏叶书来陈家萍应美爱梁晓浏金娟王敏; 关键词：转染抗肿瘤疫苗

人肺腺癌细胞总RNA电穿孔法转染的树突状细胞疫苗的体外抗肿瘤效应研究被引量：6: 2011年; 目的探讨人肺腺癌细胞A549总RNA电穿孔法转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)的特征及其特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)从血细胞分离机分离出的外周血采集物中诱导DCs产生,同时从人肺腺癌细胞A549中提取总RNA用以转染DCs,并用转染后的DCs与自体T细胞共同培养,诱导成为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)。实验分未转染DCs组,转染PBS的DCs组,转染RNA的DCs组,以流式细胞术(FCM)鉴定DCs、T细胞表型、RT-PCR证明总RNA转染效率,MTT检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平并比较各组差异。结果 1)RT-PCR证明电穿孔法可成功使A549的总RNA转染入DCs并可使DCs表达肿瘤抗原。2)RNA转染组的DCs表面标志物CD40、CD80、CCR-7、CD83、HLA-DR都呈强阳性表达,表达率明显高于PBS转染组DCs和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);3)流式结果显示RNA转染的DCs刺激后的T细胞表面标志物CD8比例明显上升;4)RNA转染组IL-12、IFN-γ分泌水平明显高于PBS转染组和未转染组(P<0.05);5)RNA转染组DCs可以有效刺激T淋巴细胞增殖,并且诱导肿瘤特异性CTLs产生,对A549细胞产生特异性杀伤作用。而PBS转染组与未转染组则无明显作用(P<0.05)。结论利用电转染法可成功将A549的总RNA转入DCs内并使其表达肿瘤抗原,在体外能诱导肿瘤特异性免疫反应。; 金娟王保龙完晓菊叶书来陈家萍应美爱王敏蔡秋妍; 关键词：人肺腺癌树突状细胞电转染

分泌蛋白质组学在肿瘤标志物研究中的进展被引量：2: 2013年; 肿瘤细胞代谢过程中能够分泌蛋白质,分泌蛋白质组学已成为肿瘤标志物筛选的重要手段。分泌蛋白在肿瘤的早期诊断、进展监测、寻找潜在的肿瘤药物靶点中发挥着重要作用。本文就分泌蛋白质组学相关技术及其在临床中的应用进展做一综述。; 李明邓芳王保龙; 关键词：分泌蛋白质蛋白质组学肿瘤标志物

人γhG—CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞成熟诱导的研究被引量：1: 2013年; 目的探讨优化人γhG-CSF动员的外周血采集物来源的树突状细胞（DC）成熟诱导条件。方法利用密度梯度离心法从重组人粒细胞集落刺激因子（吖hG-CSF）动员的外周血采集物分离出单个核细胞，以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和重组人白细胞介素-4（IL4）体外诱导成不成熟树突状细胞（imDC），分别采用传统细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF—α、PGE2）和改良细胞因子鸡尾酒（IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI：C、CpGODN）刺激成熟。3d后收获成熟DC，观察细胞形态、流式细胞仪检测DC的内吞能力通过异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC—Dextran）、检测DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA—DR、CD86和CCR-7，酶联免疫吸附法（ELISA）检测其IL一12的分泌，M1Tr法检测其刺激淋巴细胞增殖活性。结果两种方法均能诱导DC成熟，以改良细胞因子鸡尾酒效果更佳，FITC—Dextran的内吞能力明显下降；CD83、CD1a的表达率分别是84．44％、87．94％（P〈0．05）；IL-12分泌量明显增高，成熟DC能有效的刺激T淋巴细胞增殖。结论改良细胞因子鸡尾酒法可能是诱导DC成熟的最佳方法。; 魏静蔡秋妍陈家萍潘健应美爱完晓菊周志风王保龙; 关键词：树突状细胞

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安徽省卫生厅医学科研基金(09A082)

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