哈尔滨市科技攻关计划项目(2006AA3AS040)
- 作品数：13 被引量：19H指数：3
- 相关作者：周建华姜成刚赵立平相文华林跃智更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所东北农业大学内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技攻关计划项目国家自然科学基金黑龙江省发展高新技术产业专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 中国株EIAV S2基因逆向突变感染性克隆的构建及体外感染性评价被引量：3
- 2009年
- 以中国株EIAV的驴强毒株EIAVDV115与疫苗株EIAVFDDV15的S2基因变化规律为依据,利用反向遗传技术对EIAV弱毒疫苗株全基因组感染性克隆pFDDV3-8的S2基因区进行逆向突变,构建了含有强毒株EIAVDV115S2基因区内4个稳定点突变的克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5,将该质粒转染FDD后进行体外继代盲传,经RT-PCR、逆转录酶活性、间接免疫荧光等检测后,显示经EIAV克隆质粒pFDDVS2r1-3-4-5转染的FDD盲传3代后,可在转染的FDD细胞培养物的上清液中检测到EIAV逆转录酶活性;该细胞培养物经RT-PCR和间接免疫荧光检测均呈EIAV阳性;在电镜下可观察到典型EIAV粒子。证明已成功拯救经EIAVS2基因逆向突变后的衍生病毒vpFDDVS2r1-3-4-5。比较vpFDDVS2r1-3-4-5衍生病毒与亲本克隆衍生病毒的复制动力学,表明前者的复制比后者略滞后。以上结果提示,对疫苗株S2基因的突变未明显影响EIAV的体外复制。
- 高旭姜成刚韩秀娥赵立平沈荣显相文华周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒S2基因感染性克隆
- 免疫抑制对EIAV弱毒疫苗免疫马体内疫苗弱毒株载量的影响被引量：4
- 2008年
- 为了研究马传染性贫血弱毒疫苗EIAVFDDV在体内的生物学特性,特别是在免疫马血浆中低拷贝存在状态的形成原因,使用连续给予地塞米松的方法,对EIAVFDDV免疫马匹进行了免疫功能抑制.连续给药10天后,以植物血凝素(PHA)作为刺激原的淋巴细胞非特异性增殖实验表明,实验马匹的免疫系统功能受到了明显抑制.使用实时RT-PCR对免疫抑制前后实验马匹体内EIAVFDDV的载量进行了定量检测.结果显示,EIAVFDDV免疫马匹体内的病毒载量在2匹马中未见升高,1匹马体内略有增高,但仍处于EIAVFDDV在免疫马匹体内载量的正常范围.作为对照,强毒株隐性携带马的病毒载量提高了约25000倍,并出现了典型的临床症状.实验结果提示,致弱后病毒特有的生物学特性,而非免疫压力,是EIAV疫苗株在宿主血浆中低拷贝存在的主要原因.同时,在免疫系统功能受抑制状态下,疫苗株在免疫马体内仍然表现出了相对稳定的低拷贝复制状态,进一步显示了EIAVFDDV在应用中的安全性.
- 马建姜成刚林跃智郭亮郭巍孔宪刚沈荣显邵一鸣张哓燕周建华
- 关键词：减毒疫苗免疫抑制病毒载量
- 马传染性贫血病毒受体插入型基因的原核表达
- 2009年
- 采用PCR方法扩增出马传染性贫血病毒受体(EIAVR1)插入型(INR)的基因,将INR基因分别亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-30a中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,构建其并将其转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。结果显示,在pET-30a-INR的表达量高于pGEX-INR,且经过优化表达条件,只在pET-30a-INR以部分可溶蛋白的形式表达,而pGEX-INR仍以包涵体形式表达;经Western blot检测,不同载体表达的蛋白均可被相应的小鼠单克隆抗体特异性识别,具有良好的抗原性。
- 杨旭艳张淑琴王雪峰曹贵方周建华
- 关键词：马传染性贫血病毒原核表达
- 猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物...
- 华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华
- 关键词：猴免疫缺陷病毒P27蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 首例慢病毒疫苗-马传染性贫血减毒疫苗免疫机理的探讨
- 慢病毒由于其逆转录酶的转录不精确特性,在复制时会产生高频率的基因组突变,导致病毒抗原的持续漂移,使机体的免疫应答总是被动地跟随免疫原的变异,因而不能清除在机体内不断改变自身,以逃避免疫压力的病毒亚株
- 周建华沈荣显
- 关键词：慢病毒EIAV疫苗
- 文献传递
- T淋巴细胞增殖CFSE测定法的建立及其在马传染性贫血病毒疫苗免疫机理研究中的应用
- 利用荧光染料 CFSE 在细胞分裂时,可平均分配到两个子代细胞中的特性,建立流式细胞法检测马传染性贫血病毒(EIAV)抗原特异性 T 细胞增殖水平的方法。
- 林跃智邓喜林沈楠吕晓玲孟庆来郭巍王宇红周建华
- 关键词：CFSE马传染性贫血病毒
- 文献传递
- 马传染性贫血病毒受体基因的原核表达被引量：1
- 2008年
- 为了构建马传染性贫血病毒受体(ELR1)的原核表达体系,克隆ELR1的编码区基因,将其亚克隆到PET-30a构建重组表达质粒PET-30a-ELR1,经酶切和DNA测序鉴定,将阳性质粒转化E.coliBL21感受态细胞,IPTG诱导,表达产物经SDS-PAGE电泳及Westhern-blot分析鉴定,结果表明:该基因在大肠杆菌中以包涵体形式表达,其表观分子质量约为39.6ku;利用尿素洗涤纯化可以得到具有较高纯度的表达蛋白,是一种理想的免疫原。
- 张淑琴罗军荣刘霄卉杨旭艳马学恩周建华
- 关键词：EIAV原核表达
- 中国马传染性贫血病毒DLV株前病毒gp90基因在马体内的变异分析
- 2008年
- 分别以EIAV辽宁马强毒株(EIAVliao)前病毒DNA和马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株(EIAVDLV)前病毒DNA为模板,从免疫接种后不同时期马血清中利用nested-PCR技术,扩增了约1.4kb的gp90基因。将其克隆后进行了测序,测序结果表明,免疫EIAVDLV后的第1时期至第5时期,与EIAV-liao比较核苷酸序列平均差异率分别为3.2956%、3.1456%、3.36%、3.1856%和3.6456%。EIAVliao有20个N-连接糖基化位点,EIAVDLV平均是17.2个,其中有11个N-连接糖基化位点是高度保守的。
- 杨彬王雪峰周建华王凤龙
- 关键词：GP90基因突变
- 猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 利用PCR技术从质粒pSHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶12800、1∶25600、1∶819200、1∶51200和1∶409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性,为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。
- 华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华
- 关键词：猴免疫缺陷病毒P27蛋白单克隆抗体
- T细胞IFN-γ表达水平检测方法的建立及其在马传染性贫血病毒疫苗免疫机理研究中的应用
- 建立准确、有效地检测马传染性贫血病毒(EIAV)感染马不同 T 细胞亚型表达 IFN-γ水平的方法,是探讨 IFN-γ表达水平与疫苗免疫保护的关系的基础。分离的 EIAV 疫苗株免疫马和强毒株感染马的 PBMC 经体外培...
- 林跃智邓喜林沈楠赵立平马建孟庆来郭巍王君伟周建华
- 关键词：IFN-Γ马传染性贫血病毒流式细胞法
- 文献传递
