江苏省高校自然科学研究项目(10KJA310053)
- 作品数：7 被引量：4H指数：2
- 相关作者：胡书群周田田邵翠杰苗蓓王德广更多>>
- 相关机构：徐州医学院江苏省南京市金陵中学徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠βB2-晶体蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的表达并纯化βB2-晶体蛋白,制备其多克隆抗体,用以研究βB2-晶体蛋白聚合的机制。方法用RT-PCR的方法扩增了βB2-晶体蛋白的cDNA并克隆到原核表达载体pMON5473中。用萘啶酮酸诱导recA启动子后,蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。表达的蛋白质用DEAE纤维素层析和凝胶过滤纯化,SDS-PAGE显示一条带。与佐剂混合后免疫新西兰大白兔。结果纯化了大鼠βB2-晶体蛋白,成功制备了其多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。
- 胡书群裴冬生陆梁赵惠仁
- 关键词：纯化抗体
- 人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体的构建
- 2014年
- 目的构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体，用于其活性调节机制的研究。方法以野生型pCD—NA3．1-SIRT6-FLAG真核表达重组体为模板，用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体；突变产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定；野生型和突变型重组体转到293H细胞，Westernblot鉴定SIRT6的表达。结果①经PCR法得到了SIRT6的突变重组体；②SIRT6突变重组体测序图谱与预期结果完全一致；③Westernblot检测野生和突变型SIRT6蛋白能表达。结论获得了能真核表达硝基化位点的突变型SIRT6蛋白的重组体。
- 曾凡强王德广
- 关键词：真核表达
- TAT—GluR6—9C与pMON原核表达载体重组体的构建
- 2011年
- 目的表达和纯化TAT—GluR6—9C小肽，用于脑缺血细胞信号转导的研究。方法用化学合成的方法获得TAT—GluR6—9C小肽的cDNA；与原核表达载体pMON用T4DNA连接酶连接；连接产物转化大肠杆菌JMl09进行筛选、序列测定。结果①经化学合成并退火得到了TAT—GluR6—9C的双链cDNA；②酶切鉴定能观察到TAT—GluR6—9C和pMON两条带；③TAT—GluR6—9C测序图谱与GenBank报道完全一致。结论获得了含目的基因TAT—GluR6—9C的pMON原核表达载体重组体。
- 胡书群刘东海张光毅
- 加巴喷丁对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3表达的影响
- 2014年
- 目的：观察加巴喷丁（gabapentin， GBP）对糖尿病神经病理痛大鼠背根神经节磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）表达的影响。方法80只成年健康雄性SD大鼠，随机分为正常组（Control 组）、糖尿病神经病理痛组（ DNP组）、生理盐水＋DNP组（ SC＋DNP组）和加巴喷丁＋DNP组（ GBP＋DNP组），每组20只。采用链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病神经病理痛大鼠模型；SC＋DNP组和GBP＋DNP组于STZ注射15天起分别腹腔注射生理盐水或GBP 50 mg/kg，1次/d，连续7天；采用行为学测试测定STZ注射前1天及注射后3、7、10、14、21、28天大鼠缩足反射机械刺激阈值（PWMT）和缩足反射热辐射潜伏期（PWTL），免疫组化方法检测大鼠背根神经节（DRG）中p-STAT3的表达。结果与Control 组比较， DNP组PWMT〔（3．8±0．84） g〕降低、PWTL〔（5．9±0．94） s〕缩短，DRG中p-STAT3蛋白的表达上调（P＜0．05）；与DNP组比较， SC＋DNP组大鼠在腹腔注射生理盐水后，PWMT〔（4．03±0．5） g〕、PWTL〔（6．2±0．7） s〕和p-STAT3蛋白的表达无明显改变（P＞0．05）；与DNP组和SC＋DNP组比较， GBP＋DNP组PWMT〔（8．4±0．87） g〕升高，PWTL〔（10±1．2） s〕延长， DRG中p-STAT3蛋白的表达下调（P＜0．05）。结论 GBP能减轻大鼠糖尿病神经病理痛，其机制可能与抑制p-STAT3的表达水平有关。
- 苗蓓周田田邵翠杰
- 关键词：加巴喷丁背根神经节P-STAT3
- pTRUF11-GFP—Bip载体的构建及真核表达鉴定
- 2014年
- 目的构建Bip蛋白真核表达重组体用于缺血性脑损伤机制的研究。方法用RT—PCR方法获得Bip的cDNA；与TOPO载体连结，连接产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定；Bip cDNA片段亚克隆到真核表达载体pTRUF11-GFP；重组体pTRUF11-GFP—Bip转到293H细胞，Westernblot鉴定Bip的表达。结果①经RT—PCR法得到了Bip的双链cDNA；②Bip测序图谱与GeneBank报道完全一致；③酶切鉴定能观察到Bip和pTRUF11-GFP两条带；④Western blot检测pTRUF11-GFP—Bip能表达Bip蛋白。结论获得了能真核表达Bip蛋白的重组体。
- 曾凡强程宇涵王德广
- 关键词：真核表达
- 利鲁唑对糖尿病神经病理性疼痛大鼠背根神经节Nav1.7表达的影响被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨镇痛药利鲁唑(riluzole)对糖尿病神经病理性疼痛大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)Nav1.7表达的影响。方法:雄性SD大鼠108只,采用随机数字表法,将其分为4组(n=27):对照组(C组)、模型组(DNP组)、10%溶剂DMSO组(DNP+DMSO组)和利鲁唑组(DNP+riluzole组)。观察STZ注射前1 d及注射后3、7、10、14、21、28 d测定缩足反射机械刺激阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和缩足反射热辐射潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)。10%DMSO组和利鲁唑组于STZ注射15 d起分别腹腔注射10%DMSO或利鲁唑4 mg/kg,1次/日,连续7 d,于21、28 d测定PWMT和PWTL。行为学测试完成后选择21 d大鼠用免疫荧光和Western blot方法检测大鼠DRG中Nav1.7的表达。结果:与C组比较,DNP组大鼠PWMT降低,PWTL缩短,DRG中Nav1.7的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);与DNP组比较,DNP+DMSO组大鼠在腹腔注射10%DMSO后,PWMT、PWTL和Nav 1.7的表达无明显改变,与DNP+DMSO组和DNP组比较,DNP+riluzole组大鼠在腹腔注射利鲁唑后,PWMT明显升高,PWTL明显延长,DRG中Nav 1.7的表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:利鲁唑可通过抑制DNP大鼠DRG中Nav 1.7表达,从而减轻大鼠DNP。
- 苗蓓殷悦周田田邵翠杰曹君利
- 关键词：利鲁唑背根神经节NAV1
- Ad-Wnt3a-GFP的原核重组与真核包装
- 2013年
- 目的对Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体进行原核重组和真核包装。方法将Ad-Wnt3a-GFP穿梭重组体与骨架载体以电穿孔法共转染至原核包装细胞BJ5183；再将原核重组体用脂质体转入真核包装细胞293H进行包装。结果①电泳鉴定得到原核重组体；②得到完整的具感染能力的病毒颗粒；③病毒颗粒能表达标签蛋白。结论获得了具有感染能力的病毒颗粒。
- 赵晶李振宇高红胡书群
- 关键词：WNT3A腺病毒
