国家自然科学基金(39960079)
- 作品数：13 被引量：86H指数：5
- 相关作者：张富春马彩玲马正海王国荃李轶杰更多>>
- 相关机构：新疆大学新疆医科大学第一附属医院新疆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆维吾尔自治区自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HPV16-E7在Pichia pastoris酵母中的分泌表达
- 2003年
- 本研究利用酵母Pichia pastoris真核表达系统表达人乳头瘤病毒16(HPV16)E7蛋白,试图解决新疆维吾尔妇女高发宫颈癌的诊断、疫苗的研究中抗原蛋白需要的问题.依据新疆维吾尔妇女宫颈癌组织克隆获得的HPV16-E7基因序列设计引物,并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点,经PCR扩增后连接到pMD18-T载体上,再将HPV16-E7克隆至穿梭质粒pGAPZαA上,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA-E7经线性化后.采用LiCl法将重组穿梭质粒转入酵母细胞内,Zeocin+筛选阳性克隆,经小瓶发酵后,取上清作SDS-PAGE,并做Western印迹检测表达的蛋白质,结果表明HPV16-E7成功地在酵母真核表达系统获得表达,表达产物的分子量分别是22KDa和88KDa,为深入开展HPV16-E7蛋白功能和应用的研究奠定了理论基础.
- 刘忠渊张富春赵干钟哲王宾
- 关键词：人乳头瘤病毒16SDS-PAGEWESTERN印迹
- 新疆妇女宫颈脱落细胞HPV16E6基因的PCR及荧光定量PCR检测被引量：1
- 2004年
- 目的 了解新疆妇女人乳头瘤病毒 16型 (HPV 16)的感染状况。方法 用PCR及荧光定量PCR(FQ -PCR)方法检测妇科门诊普通患者宫颈脱落细胞及分泌物中人乳头瘤病毒 16型E6基因 (HPV16E6) ,以普通门诊患者宫颈脱落细胞及分泌物DNA作为样本 ,以人乳头瘤病毒 (HPV16E6)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β -actin基因片段作为细胞内参照 ,借助于两对引物 ,两个特异的荧光探针 ,用荧光定量PCR(FQ -PCR)方法对这两个片段进行扩增 ,得到单位细胞HPV16E6的相对含量 ;同时进行定性PCR检测。结果 宫颈脱落细胞标本 15 9例中 ,β -actin阳性 15 4例 ;HPV 16E6阳性共 12例 ,阳性率为 7.8%。PCR与FQ -PCR结果基本一致 ,但FQ -PCR更敏感。结论 建立的FQ -PCR检测宫颈脱落细胞内HPV 16E6基因的方法 ,能反映单位细胞内病毒的复制情况 ,可用于性传播感染 (STI)
- 马彩玲李轶杰张富春帕提古丽.肉孜热西旦.尼格买提韩英开丽曼王国荃郑玉建
- 关键词：宫颈脱落细胞荧光定量PCRPCRHPV16E6
- 新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中乳头瘤病毒16型E6基因的克隆和序列分析被引量：28
- 2001年
- 为了分析新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因结构特点 ,从中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,以宫颈癌活检组织标本DNA为模板进行PCR扩增 ,获得HPV16E6基因 ,将其克隆到pUCm T载体上 ,并对其进行基因全序列分析 .PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16E6阳性率为 82 35 % (14/17) ;测序结果显示 ,新疆株HPV16E6基因全长 45 6bp ,大小与德国标准株一致 .E6基因的第 2 47位碱基发生T→G突变 ,并由此引起所编码的氨基酸亦发生改变 .上述结果表明 ,中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16E6的基因结构与德国标准株HPV16E6基因之间存在差异 .
- 马正海钱东马纪林仁勇闻明钟哲张富春张秋云
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6基因维族妇女
- HPV16E7基因疫苗在鼠肌组织中的免疫应答
- 为观察pCDNA3-HPV16-E7重组质粒经肌肉途径接种后在宿主体内的表达,实验以昆明小白鼠为材料,将实验组鼠经后腿股四头肌注射重组质粒pCDNA3-HPV16-E7,对照组注射pCDNA3,于接种前和接种后的第0、2...
- 孙素荣张富春马纪孟卫卫鲁晓风
- 关键词：人乳头瘤病毒16型基因疫苗肌肉
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒16型(新疆株)E6基因的原核表达
- 2002年
- 根据人乳头瘤病毒 16 (新疆株 ) E6基因编码序列设计引物 ,从含有 HPV16 E6基因的质粒中扩增出含 HPV16 E6基因的 DNA片段 ,该片段全长 4 5 0 bp,将所得片段与 p MD18- T载体连接 ,转化到 JM10 9大肠杆菌中 ,筛选的阳性克隆扩增后 ,提取质粒 DNA,用 Bam H I和 Sal I酶切 ,回收 4 5 0 bp的目的片段 ,定向克隆到 p ET2 8a中 ,转化 JM10 9受体菌 ,从 JM10 9受体菌中提出质粒 ,再转化到 BL2 1(DE3)中 ,筛选出转化体 ,用 IPTG诱导表达 ,在 PAGE上见到所表达的18k D的特异性的 HPV16 (新疆株 ) E6蛋白条带。
- 李慎涛庞海张富春
- 关键词：人乳头瘤病毒16型E6基因原核表达SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳基因表达
- 小鼠卵透明带3(mZP3)质粒DNA体外瞬时表达的研究
- 2003年
- 为探讨小鼠卵透明带 3 (mZP3 )质粒DNA在真核细胞中的表达效率 ,筛选出高效表达mZP3的质粒 DNA ,提高DNA疫苗对小鼠的免疫不育效果 ,本研究采用阳离子多聚糖 纳米颗粒Puchio为转染介质 ,将mZP3质粒DNA转染真核细胞COS 7,用半定量 PCR检测mZP3的特异性mRNA表达。结果显示 :Puchio与pcDNA3 mZP3紧密结合 ,在COS 7细胞中有mZP3基因的特异性mRNA表达 ;Puchio的介导可能提高真核细胞的转染效率 ,有助于通过真核细胞的瞬时表达系统筛选出用于小鼠免疫不育的DNA疫苗 ,为深入开展鼠卵透明带
- 李再新张富春金华利王艳萍任智慧王宾
- 关键词：转染半定量检测
- HPV16(新疆株)E6在Pichia pastoris酵母中的分泌表达被引量：4
- 2003年
- 目的 :利用酵母Pichiapastoris真核蛋白表在系统 ,表达HPV16 (新疆株 )E6 (HPV16XJE6 )蛋白。方法 :根据HPV16XJE6基因序列设计引物 ,并分别在 5′引物和 3′引物中引入了EcoRI和XbaI酶切位点 ,经PCR扩增后与pMD18-T载体相连 ,再将HPV16XJE6从T载体上切下并克隆至穿梭质粒pGAPZαA上 ,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA -E6经线性化后 ,采用LiCl法将重组穿梭质粒转入酵母细胞内 ,Zeocin+筛选鉴定 ,经小瓶发酵后 ,取上清作SDSPAGE检测。结果 :HPV16XJE6成功地在酵母真核表达系统获得表达 ,表达产物的分子量为 2 0kD ,为深入研究HPV16XJE6蛋白功能奠定了理论基础。
- 刘忠渊张富春赵干蔡伦张爱莲
- 关键词：HPV16E6穿梭质粒分泌表达
- 新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型L1基因突变谱分析被引量：22
- 2004年
- 目的 探讨新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒 16型L1基因的变异 ,并预测L1蛋白的功能变化。方法 从 19份中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA ,以此DNA为模板 ,PCR扩增HPV16L1全长基因 ,PCR产物直接测序或克隆后测序 ,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16L1基因多态性及HPV16L1蛋白功能的变化。结果PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16L1阳性率为 84 2 1% (16 / 19) ;测序和序列分析表明L1基因核苷酸多处发生变异 ,并引起编码氨基酸的变异 ,L1基因在核苷酸水平形成上 6种突变模式(XJL1 1～XJL1 6 ) ,各模式与HPV16原型比较 ,同源性在 99 6 9%～ 99 87%之间。XJL1 1发生的 4处变异是所有变异序列所共有的 ,XJL1 2～XJL1 6在XJL1 1变异的基础上增加了不同的变异 ;在氨基酸水平上形成 4种突变模式 ,其中XJL1 1/ 2 / 3突变模式占 76 92 % (8/ 13) ,是突变的主流模式 ;以上突变引起HPV16L1蛋白疏水性和抗原性的改变 ,继而改变了L1蛋白的结构及功能。结论 中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16L1基因发生多位点变异 ,并形成多种突变模式和突变的主流模式 ;这些突变引起HPV16L1蛋白疏水性和抗原性的改变 。
- 马正海张富春梅新娣马彩玲刘开江
- 关键词：维吾尔族妇女宫颈癌癌组织人乳头状瘤病毒16型宫颈肿瘤
- HPV16 L1基因的原核表达及免疫反应性鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的:在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)主要衣壳蛋白L1,并鉴定其免疫反应性。方法:将HPV16L1基因克隆入原核表达载体pThioHisC中,构建重组表达载体。以重组载体分别转化大肠杆菌Top10和DH5α,在IPTG诱导下表达外源基因,用SDSPAGE和Westernblot对表达产物进行鉴定和分析。结果:构建了HPV16L1基因的原核表达质粒pThioHisC/HPV16L1,并在大肠杆菌中表达出相对分子质量(Mr)约为70800的蛋白。表达的蛋白能与抗HPV16L1抗体发生特异性反应。结论:在原核细胞中成功地表达HPV16L1基因,为HPV16L1疫苗的研制提供了必要的基础。
- 郝东风马正海王艳萍热西旦张富春
- 关键词：人乳头状瘤病毒16型原核表达免疫反应性
- 应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因被引量：19
- 2004年
- 目的 建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法 以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β 肌动蛋白基因片段作为内参照 ,借助于设计的目的基因引物 ,两个特异的荧光探针 ,在筛选的FQ PCR优化反应体系中 ,同时对两个基因片段进行扩增 ,得到HPV16E6的相对含量。结果 对 β 肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析 ,新疆妇女宫颈脱落细胞标本 96例中 ,HPV16E6阳性 3例 (3 3% ) ;宫颈癌蜡块组织 5 9例中HPV16E6阳性 4 9例 (83 0 % ) ;宫颈上皮内瘤变 (CIN)蜡块组织 6 5例中 ,HPV16E6阳性 2 8例 (75 7% ) ;宫颈炎蜡块组织 33例 ,HPV16E6阳性 2 8例 (93 3% )。HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势 ,二者呈显著正相关 ,相关系数为 0 83。结论 建立的FQ PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法 ,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况 ,筛查宫颈癌患者 ,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察。
- 马彩玲李轶杰张富春王国荃郑玉建开丽曼热西旦韩英帕提古丽
- 关键词：宫颈肿瘤人乳头瘤病毒16E6基因脱落细胞学检查
