国家自然科学基金(31101684)
- 作品数：8 被引量：20H指数：3
- 相关作者：陈玉林耿荣庆袁超白丁平杨朝霞更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学盐城师范学院榆林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。
- 何晓琳袁超屈雷陈玉林
- 关键词：陕北白绒山羊PIGGYBAC转座子稳定转染
- 绒山羊和绵羊KAP6.1基因CDS区克隆与分析被引量：1
- 2012年
- 目的:克隆绒山羊、绵羊KAP6.1基因CDS全序列,分析序列特征和蛋白结构。方法:RT-PCR法克隆基因并测序,生物信息学软件分析序列特征和结构。结果:绒山羊、绵羊KAP6.1基因CDS序列全长252 bp,编码83个氨基酸;绒山羊、绵羊KAP6.1蛋白在基本理化特性、二级结构以及空间三维结构上的差异较小。结论:绒山羊与绵羊KAP6.1蛋白结构上的差异将会在一定程度上影响其功能。
- 耿荣庆陈玉林王兰萍杨朝霞袁超白丁平姜维曹春娜
- 关键词：绒山羊绵羊
- 山羊绒毛干中线粒体DNA和核DNA的提取与PCR扩增被引量：4
- 2013年
- 本研究以PCR缓冲液、MgCl2溶液和蛋白酶K为裂解提取液,建立了一种从山羊绒毛干中快速提取DNA的方法。结果表明,该方法不仅能从山羊绒毛干中提取出线粒体DNA和核DNA,而且能够有效地进行线粒体基因和核基因组基因的PCR扩增,为拓展羊绒样品在个体识别、遗传资源评价、分子进化和分子标记辅助育种等研究领域中的应用奠定基础。
- 耿荣庆周光现韩旭峰李伟李碧波王小龙陈玉林
- 关键词：山羊绒线粒体DNA核DNADNA提取PCR扩增
- 3个山羊品种角蛋白辅助蛋白7基因的遗传多态性分析被引量：4
- 2013年
- 本研究采用PCR-SSCP方法对陕北白绒山羊、太行黑山羊及南疆绒山羊的角蛋白辅助蛋白(keratin-associated pro-teins,KAP)7基因进行遗传多态性研究。结果显示,KAP7基因在3个山羊品种中有多态性,有AA和AB 2种基因型,AA基因型均为其优势基因型。测序结果发现,KAP7基因在129bp处存在C→G的突变,突变的位置位于5′调控区。
- 彭艺艺杨朝霞耿荣庆陈玉林张富全张西顺
- 关键词：陕北白绒山羊南疆绒山羊
- 陕北白绒山羊Lhx2基因cDNA序列的克隆与原核表达被引量：1
- 2012年
- 根据GenBank中已发表的Lhx2基因序列设计引物,采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织克隆Lhx2基因编码区cDNA,对其进行生物信息学分析,并构建原核表达载体pET-Lhx2,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。最终获得陕北白绒山羊Lhx2基因,长1 221bp;酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-Lhx2构建成功;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组原核表达载体在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。
- 刘敏白丁平耿荣庆方堃陈玉林
- 关键词：陕北白绒山羊克隆原核表达
- 陕北白绒山羊MSX2基因克隆及表达分析被引量：2
- 2012年
- 本研究旨在克隆陕北白绒山羊MSX2基因cDNA全序列,并对其序列特征及其表达规律进行分析。试验以陕北白绒山羊皮肤组织为材料,采用RT-PCR技术,对陕北白绒山羊MSX2基因的cDNA序列进行克隆,并进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR检测并分析MSX2mRNA在陕北白绒山羊毛囊不同发育时期皮肤组织中的表达规律。结果表明,山羊MSX2基因cDNA全长804bp(GenBank登录号:JQ617290),为一个完整的开放阅读框(ORF),编码267个氨基酸,与牛(NM_001079614)、人(NM_002449)、犬(NM_001003098)、黑猩猩(NM_001135625)、大鼠(NM_012982)和小鼠(NM_013601)的相似性分别为96%、90%、89%、88%、87%和85%;MSX2基因在4月和11月的相对表达量出现峰值,与其他月份差异显著(P<0.05)。山羊MSX2基因编码区核苷酸序列高度保守。MSX2基因在陕北白绒山羊皮肤毛囊发育的4月份和11份月高度表达,其余月份均有不同程度的表达,推测MSX2基因对毛囊周期调控具有一定的作用。
- 曹春娜李冉袁超姜维耿荣庆陈玉林
- 关键词：陕北白绒山羊基因克隆
- 从羊皮肤组织中提取总RNA方法的改进被引量：5
- 2012年
- 在借鉴动物组织RNA提取方法的基础上,结合使用RNAlater保存液和Trizol试剂,改进了提取步骤和反应体系。利用改良的总RNA提取方法,从羊皮肤组织中快速、高效地提取了高质量总RNA,提取的总RNA可满足基于RNA分析技术的相关分子生物学试验需要。
- 耿荣庆白丁平袁超陈玉林
- 关键词：皮肤组织RNA提取
- 绒山羊和绵羊KAP1.4基因cDNA序列的克隆及其编码蛋白的结构分析被引量：2
- 2012年
- 对绒山羊和绵羊KAP1.4基因的编码区进行克隆与分析,在此基础上预测了KAP1.4蛋白的分子结构,为研究毛(绒)用性状的分子基础提供资料。结果表明,克隆测序获得绒山羊、绵羊KAP1.4基因编码区序列长度为579bp和549 bp,分别编码192个氨基酸和182个氨基酸。生物信息学分析表明,绒山羊和绵羊KAP1.4蛋白的基本理化特性方面无明显差异,属于非跨膜蛋白,信号肽的长度和裂解点相同,都具有1个蛋白激酶C磷酸化位点、3个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和6个N端酰基化位点;蛋白的二级结构由β折叠、β转角和无规则卷曲构成。三级结构预测显示,绒山羊与绵羊KAP1.4蛋白在空间三维结构上存在显著差异,将会进一步影响其功能的发挥并成为调控产毛(绒)性状的影响因子。
- 耿荣庆陈玉林王兰萍杨朝霞姜维刘敏曹春娜
- 关键词：绒山羊绵羊克隆
