国家自然科学基金(30830102)
- 作品数：21 被引量：17H指数：2
- 相关作者：郭树忠杨阳苏映军夏炜陈建武更多>>
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- 局部转染CTLA-4Ig抑制大鼠异体复合组织移植急性排斥反应的研究
- 2010年
- 目的:观察腺病毒介导融合基因细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T-lymphocyte associated antigen-4,CTLA-4Ig)局部转染大鼠同种异体移植的复合组织对急性排斥反应的抑制作用。方法:以近交系Brown Norway大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,采用腹部游离皮瓣作为异体复合组织移植(composite tissue allotransplantation,CTA)模型。将受者分为3组,A组(空白对照组):异体皮瓣离体保存时不感染腺病毒,只灌注PBS溶液;B组(阴性对照组):异体皮瓣离体保存时灌注携带增强型绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-EGFP);C组(基因治疗组):异体皮瓣离体保存时灌注AdCTLA-4Ig。术后观察各组移植皮瓣的排斥情况及存活天数,进行组织病理学检查,并观察CTLA-4Ig在移植组织中的表达情况及对急性排斥反应的抑制作用。结果:①A组、B组皮瓣移植物平均生存时间分别为(7.8±1.5)天和(7.1±1.6)天,C组移植皮瓣平均存活时间为(10.4±2.3)天,C组存活期长于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01);②移植皮瓣病理学检查:术后第7天,A组与B组移植皮瓣均发生严重急性排斥反应,而C组排斥反应较A组和B组轻微,但C组术后第11天也表现出严重急性排斥反应;③移植前后血清白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)水平:各组移植术后早期发生急性排斥反应时,IL-2均有明显升高,但实验组血清IL-2水平在第3天、第7天时均明显低于两对照组(P<0.01)。结论:建立了一种新的异体复合组织移植局部基因转染模型,皮瓣灌注AdCTLA-4Ig能获得融合基因在移植复合组织中的表达,局部产生的CTLA-4Ig能抑制急性排斥反应的发生,延长移植物存活时间。
- 赵克锋潘华肖博李扬郭树忠
- 关键词：同种异体复合组织移植CTLA-4IG基因治疗急性排斥反应
- 调节性CD4＋CD25＋T细胞的分离纯化及免疫功能研究被引量：7
- 2009年
- 目的制备调节性CD4＋CD25＋T细胞（Treg）分析其免疫功能，诱导局部免疫耐受防治同种异体复合组织移植（CTA）排斥反应。方法采用免疫磁珠法（MACS）从雄性大鼠脾脏细胞分离CD4＋CD25＋Treg（1×10^6），2％锥虫蓝染色检测活性、流式细胞术分析其纯度，在5mg／L抗CD3的刺激下观察其反应性、增殖及其与200U／ml白细胞介素（IL）-2的关系。结果从8只雄性大鼠脾脏分选出的CD4＋CD25＋Treg活性平均为（97．90±0．36）％及纯度为（96．05±0．41）％，CD3刺激呈低反应，按比例培养抑制率为89％，IL-2可使CD4＋CD25-抑制逆转。结论MACS能快速分选出较高纯度的CD4＋CD25＋Treg，并且活性良好在体外具有免疫无能及免疫抑制作用，能满足动物CTA排斥反应研究的需要。
- 杨阳韩岩杨麦贵夏炜庄然郭树忠
- 关键词：免疫耐受调节性T细胞免疫调节纯化
- 部分股骨移植:一个新的带血管的骨髓移植模型
- 2013年
- 目的:大鼠后肢移植是带血管的骨髓移植的主要模型,同时含有骨髓和骨髓微环境,有利于免疫耐受的诱导。但其成分复杂,为研究其中骨髓的作用,构建一个成分相对单一的带血管的骨髓移植模型。方法:以MHC不相符的近交系Lewis和BN大鼠分别作为供体或受体,将含血管蒂的供体2/3股骨移植到受体腹股沟区,显微吻合供受体间的股动静脉。实验分为3组:同基因移植组Lewis→Lewis;排斥组Lewis→BN;免疫抑制组Lewis→BN,术后给予环孢素A。通过大体和病理学检查观察各组移植物存活情况,外周血流式监测排斥组和免疫抑制组的嵌合水平。结果:术后7 d,排斥组排斥反应显著,骨髓细胞明显减少、坏死,外周血嵌合水平几乎为0,而同基因移植组股骨存活良好,骨髓HE染色大致正常,可见髓腔内有大量的嗜碱性骨髓细胞;术后60 d,同系移植组和免疫抑制组的大体观察及组织病理学大致相同,均证实移植物存活良好,同时流式可见免疫抑制组术后7、28、60 d外周血中存在供体特异性的嵌合。结论:带血管蒂的部分股骨移植物是一个简便可靠的带血管的骨髓移植模型,嵌合分析表明其具有诱导耐受的潜能,有利于阐明异体复合组织中骨髓对免疫耐受诱导的作用和机制。
- 陈建武陈晨苏映军王师平杨阳郭树忠
- 关键词：嵌合免疫耐受
- 同种异体复合组织移植的优势与风险被引量：1
- 2009年
- 目的综述同种异体复合组织移植的研究进展,分析其优势及不足,展望可能的发展方向。方法广泛查阅同种异体复合组织移植相关文献,从常规修复重建外科治疗的局限性、同种异体复合组织移植的定义、潜在优势及治疗风险等方面进行综述。结果国内外同种异体复合组织移植的临床实践表明其疗效优于常规修复重建方法,但免疫抑制疗法带来的风险仍然是同种异体复合组织移植推广于临床的主要制约因素。结论免疫抑制治疗的发展为同种异体复合组织移植开拓了巨大发展前景,如何降低免疫抑制治疗风险将是今后同种异体复合组织移植领域的主要研究方向。
- 杨阳卢丙仑张辉夏炜易成刚郭树忠
- 关键词：同种异体复合组织移植免疫抑制
- 一种大鼠带血管的骨髓移植模型被引量：1
- 2013年
- 目的构建一种简单可靠的带血管的骨髓移植模型。方法将供体带血管蒂的股骨通过显微血管吻合的方式移植到受体腹股沟区，20只Lewis近交系大鼠随机分3组：同基因移植组Lewis→Lewis；排斥组Lewis→BN；免疫抑制组Lewis→BN，术后给予环孢素A。通过大体和病理学检查观察各组移植物存活情况，流式细胞计数监测外周血嵌合水平。结果术后30d，同基因移植组股骨存活良好，骨髓苏木素．伊红（HE）染色与正常骨髓无异，而排斥组第7天即发生显著的排斥反应，骨髓细胞明显减少、坏死，外周血嵌合水平几乎为0；和同系移植组一样，免疫抑制组术后30d移植物存活良好，术后1、2、3、4周外周血中可检测到供体特异性嵌合，嵌合水平分别为（4．7±2．0）％、（2．2±1．2）％、（1．8±0．9）％、（1．5±0．3）％。结论带血管蒂的股骨移植是一种简便可靠的骨髓移植模型，可作为一种新的骨髓移植方法诱导免疫耐受。
- 陈建武陈晨苏映军王师平杨阳郭树忠
- 关键词：嵌合免疫耐受
- CD4＋CD25＋调节性T细胞诱导同种异体复合组织移植免疫耐受功能的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨供体抗原特异性CD4＋CD25＋调节性T细胞（Treg），对同种异体复合组织移植（CTA）受体大鼠细胞免疫耐受功能的影响。方法采用免疫磁珠法分选CD4＋CD25＋Treg，将数量1×10^6的CD4＋CD25＋Treg输注入CTA受体的大鼠，术后30d采取外周血，尼龙毛柱分离T、B细胞，检测在IgM抗体刺激下的增殖放射强度的液体闪烁测定（CPM）值及血清IgG和IgA水平，判断CD4＋CD25＋Treg对T、B细胞功能的影响及CTA的存活情况，并进行统计学分析。结果分选的CIM＋CD25＋Treg纯度为95．6％。T、B细胞CPM值：正常对照组分别为2436±358、2418±348，Treg局部干预组为2273±136、2252±127，Treg全身干预组分别为2338±228、2315±218，Treg未干预组分别为3749±245、3720±224；Treg未干预组与其三组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。血清IgG、IgA水平：Treg局部和全身干预组分别为（12．56±1．30）g/L、（2．38±0．21）g/L和（13．48±1．23）g/L、（2．86±0．24）g/L，与正常对照组（12．35±1．28）g/L、（2．36±0．12）g/L比较差异无统计学意义（P〉0．05），三组与Treg未干预组（16．58±1．12）g/L、（3．75±0．37）g/L比较差异有统计学意义（P〈0．01）。Treg局部和全身干预组CTA存活时间分别为（97±13）和（63±10）d，显著长于Treg未干预组的（22±8）d（P〈0．01）。结论供体抗原特异性C1M＋CD25＋Treg对T、B细胞功能有明显的抑制作用，能诱导CTA免疫耐受，延长其存活时间，且局部应用效果优于全身。
- 杨阳李媛韩岩鲁开化庄然夏炜易成刚樊星郭树忠
- 关键词：T淋巴细胞调节性外科皮瓣
- 雷帕霉素阶梯用药方案在异基因大鼠皮瓣移植模型中的疗效观察
- 2010年
- 目的探讨异基因大鼠皮瓣移植模型中雷帕霉素阶梯用药方案的疗效。方法建立近交系大鼠下腹部皮瓣移植模型。Ⅰ组(n=5)不予免疫抑制剂;Ⅱ组(n=5)给予雷帕霉素2mg·kg-1·d-1;Ⅲ组(n=5)给予雷帕霉素4mg·kg-1·d-1;Ⅳ组(n=8)术后第1～2周给予雷帕霉素4mg·kg-1·d-1,第3周改为2mg·kg-1·d-1,第4周后减量至1mg·kg-1·d-1。3组给药时间持续至术后60d或移植皮瓣死亡为止。大体观察各组移植皮瓣排斥反应发生的时间。分别于术后7、15、30d取移植皮瓣皮肤组织(每个时间点每组3只)行HE染色,观察病理学变化。结果Ⅲ组5例全部存活至术后60d,Ⅳ组7例存活至术后60d,而Ⅱ组移植皮瓣在术后60d前全部发生排斥反应,Ⅳ组与Ⅱ组比较移植皮瓣存活率差异有统计学意义(P<0.05),与Ⅲ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。根据Banff07标准评分,术后7d时Ⅰ组为3级,其余各组为0级;术后15d时Ⅱ组为2级,Ⅲ、Ⅳ组为0级;术后30d时Ⅳ组中1例为4级,其余存活移植皮瓣为0级。结论本实验证实雷帕霉素阶梯用药与大剂量持续给药有相同的抑制排斥反应效果。
- 肖博李扬付苏刘蓓郭树忠
- 关键词：同种异体复合组织移植雷帕霉素免疫抑制皮瓣
- 大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因
- 2010年
- 目的 探讨大鼠异体皮瓣移植后不用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.方法 实验分为3组,每组受者均为8只,以股动、静脉为蒂进行下腹部皮瓣移植.A组：以BrownNorway（BN）大鼠为供者,Lewis（LEW）大鼠为受者,移植术后2周内使用免疫抑制剂西罗莫司4mg·kg-1·d-1腹腔注射;B组：以BN大鼠为供者,LEW大鼠为受者,移植后不使用任何药物;C组：为LEW大鼠自体移植对照组,术后不使用任何药物.术后观察各组移植物的大体变化,并取移植物进行病理学检查,比较各组的病理学变化.结果 A组自术后17 d起,陆续出现皮瓣红斑,表皮脱落,真皮及皮下组织则最后坏死;B组受者排斥反应进展迅速,表皮不出现脱落现象,皮瓣直接完全发黑、坏死.C组移植物长期存活,未见排斥反应征象.A、B两组从出现排斥反应迹象到组织完全坏死的时间分别为（16.7±3.0）d和（5.4±1.1）d.病理检查显示：A组表皮组织首先被排斥,真皮和皮下组织由于大量淋巴细胞浸润而坏死.B组则为移植皮瓣真皮下血管网内皮细胞坏死,血管栓塞,皮肤内细胞缺血而坏死.结论 微血管栓塞是大鼠异体皮瓣移植后不应用免疫抑制剂情况下移植物坏死的主要原因.
- 肖博张金刘蓓郭树忠
- 关键词：皮肤移植免疫抑制剂移植物排斥血管栓塞
- OX40-IgG1融合基因重组表达载体的构建及鉴定
- 2009年
- 目的:构建含人OX40-IgG1融合基因的真核表达载体pDC315-OX40Ig,表达具有生物学活性的OX40Ig融合蛋白,为诱导异体复合组织移植免疫耐受的基因治疗作准备。方法:全基因合成目的基因OX40Ig,即人OX40胞外段序列及人IgG1 Fc段序列,将该片段插入到pUC57(+)载体后,亚克隆至真核表达载体pDC315(+),构建pDC315-OX40Ig重组质粒。构建的重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定后,用脂质体法转染于NI H/3T3细胞。以SDS-PAGE与Western Blotting检测细胞培养上清中OX40I g融合蛋白的表达情况;MTT法观察OX40Ig对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。结果:合成的目的基因全长1320bp,构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确。SDS-PAGE与West ern Blotting证实OX40Ig融合蛋白在3T3细胞中实现表达,表达产物相对分子量为48000左右,与理论预期值相符。体外实验证实OX40Ig蛋白能够抑制异基因淋巴细胞的MLR。结论:成功构建了人OX40-IgG1融合基因真核表达载体pDC315-OX40Ig,体外实验证实表达的OX40Ig蛋白可抑制淋巴细胞增殖,为干预同种异体复合组织移植排斥反应奠定了基础。
- 付苏郭树忠李立文夏炜易成刚郝晓艳刘蓓
- 关键词：融合基因真核表达载体
- 肝脏作为免疫器官在移植免疫耐受中的作用被引量：2
- 2015年
- 肝脏作为一个免疫器官,在诱导免疫耐受方面体现了独特功能。一方面,抗原通过门静脉输注能诱导抗原特异性耐受而不引起致敏;另一方面,临床肝移植相比其他实体器官移植更容易诱导临床可操作性耐受。肝窦内皮细胞、枯否细胞、肝星状细胞、树突状细胞和调节性T细胞等肝脏非实质细胞共同构成了这种利于耐受诱导的免疫环境。本文简要介绍了肝脏诱导耐受相关的细胞和分子机制、经门静脉输注异体细胞诱导移植耐受进展和临床诱导肝移植免疫耐受进展。
- 丁健科张栋梁肖博苏映军郭树忠
- 关键词：肝脏免疫耐受器官移植
