青岛市科技发展计划项目(07-2-1-7-nsh)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 相关作者：葛银林王海燕王晓飞欧阳奇琦王明明更多>>
- 相关机构：青岛大学青岛大学医学院附属医院青岛市市立医院更多>>
- 发文基金：青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- KDR siRNA对乳癌细胞凋亡和NES1与RUNX3基因甲基化影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨体外水平利用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)敲减含激酶插入区受体(KDR)基因治疗乳癌的可行性和特异性。方法采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000TM作为转染试剂,将针对人KDR基因的siRNA转染人乳癌细胞株MCF-7敲减KDR基因的表达。通过Hoechst 33258染色观察MCF-7细胞的凋亡情况;采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测NES1基因和RUNX3基因甲基化状态和mRNA的转录水平。结果靶向KDR的siRNA转染MCF-7细胞后可诱导细胞凋亡,NES1基因和RUNX3基因甲基化程度降低,出现非甲基化条带,同时mRNA表达上调。结论KDR siRNA在体外能逆转MCF-7细胞的NES1基因和RUNX3基因甲基化,并诱导细胞凋亡。
- 许秀娥徐宏伟葛银林张金玉冯翠萍
- 关键词：MCF-7细胞血管内皮生长因子受体2甲基化
- siRNA沉默血管VEGFR-1基因对乳癌生长抑制作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨应用化学修饰的小干扰RNA(siRNA)沉默人裸鼠乳癌移植瘤新生血管中的血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)基因对移植瘤生长的影响。方法将组织瘤块接种于裸鼠右侧第二对乳腺的脂肪垫内,肿瘤长至一定大小时,随机分为对照(A)组、转染试剂对照(B)组、siRNA治疗(C)组。于肿瘤局部分别注射PBS溶液、Lipofectamine2000TM转染试剂和Lipofectamine2000TM转染试剂包裹的VEGFR-1siRNA。22d后处死全部动物,取肿瘤,测其大小;用RT-PCR及蛋白印迹法检测乳癌组织VEGFR-1基因的表达。结果与A、B组比较,C组移植瘤增长趋势受到明显抑制(F=158.18、55.72,q=11.39、14.05,P<0.01);RT-PCR结果表明,与A、B组比较,C组明显下调了VEGFR-1mRNA的表达(F=385.06,q=33.43,34.52,P<0.01);蛋白印迹法结果亦显示,C组明显下调了VEGFR-1mRNA的表达(F=114.11,q=9.31,20.75,P<0.01)。A组和B组各指标差异无显著性(P>0.05)。结论化学修饰的siRNA介导的RNAi可以降低人乳癌裸鼠移植瘤血管中VEGFR-1的表达,抑制血管生成进而抑制肿瘤的生长,是潜在的肿瘤治疗的新方法。
- 王明明葛银林欧阳奇琦
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子受体1乳腺肿瘤
- 下调VEGF表达对人乳腺癌细胞凋亡相关基因的影响
- ＜正＞血管生成与肿瘤生长、侵袭、转移密切相关。血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowth factor）VEGF除了促进肿瘤新生血管生成外,还通过自分泌作用于肿瘤细胞自身的（vascular ...
- 许秀娥徐宏伟葛银林
- 文献传递
- 靶向VEGF基因的siRNA联合树突状细胞介导的CTL对MCF-7细胞作用的研究
- 2010年
- 目的探讨靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的小干扰RNA(siRNA)联合负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的联合抗瘤作用。方法体外应用靶向VEGF基因最佳转染浓度(100nmol/L,增加浓度不再提高沉默作用)的siRNA联合负载人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)抗原的DC介导的CTL(siRNAVEGF+CTL组)共同作用于MCF-7细胞,同时设立空白对照组和空白+CTL组(只加无血清无抗生素培养基);脂质体组和脂质体+CTL组(只加LipofectamineTM2000);siRNAVEGF-组(100nmol/LsiRNA);siRNASCR组和siR-NASCR+CTL组(100nmol/LsiRNASCR),每组做6个平行孔,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测siRNAVEGF+CTL组和各对照组肿瘤杀伤活性(n=6),Hoechst33258核染色观察细胞的凋亡(n=3)。结果siRNAVEGF+CTL组、siR-NAVEGF-组siRNASCRCTL组肿瘤杀伤活性分别为99.37%,51.17%和43.94%,siRNAVEGF+CTL组与对照组比较可明显杀伤肿瘤细胞,瘤细胞几乎完全溶解,Hoechst33258显示细胞核呈明显的细胞凋亡改变。结论体外实验显示靶向VEGF的siRNA联合负载肿瘤抗原DC致敏的CTL能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,二者的联合应用抗瘤效果显著。
- 王海燕李延年董永孙波张树超葛银林
- 关键词：树突状细胞
- 下调VEGF表达对人乳腺癌细胞凋亡相关基因影响的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:研究下调VEGF基因的表达对人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡及相关基因表达的影响,探讨敲减VEGF后乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制。方法:体外化学合成针对VEGF基因的siRNA序列,在脂质体Li-pofectamine2000TM介导下转染MCF-7细胞,RT-PCR检测VEGF、Survivin及wtP53表达水平,比色法检测Caspase-3的活性,免疫组织化学法检测Survivin蛋白的表达,并用图像分析软件分析蛋白表达强度。结果:靶向VEGF的siRNA转染MCF-7后,明显促进了细胞凋亡,VEGF mRNA表达明显减少;Survivin基因mRNA及蛋白水平表达下调(P<0.01);p53的mRNA表达上调,Caspase-3活性增高。结论:敲减VEGF基因可促进MCF-7细胞的凋亡,其主要途径可能是下调Survivin的表达,活化Caspase-3来实现。
- 王晓飞葛银林
- 关键词：乳腺肿瘤基因疗法
- MCF-7乳腺癌细胞培养上清对树突状细胞抑制作用的研究
- 2009年
- 目的:应用MCF-7乳腺癌细胞分泌的上清液培养正常外周血树突状细胞,探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌因子对正常树突状细胞分化、成熟及功能的影响。方法:应用MCF-7乳腺癌细胞的培养上清和GM-CSF、IL-4及TNF-α培养正常外周血单个核细胞,检测所诱导的树突状细胞(DC)及其致敏的CTL活性。结果:MCF-7乳腺癌细胞培养上清能够明显抑制正常树突状细胞的分化成熟及抗原提呈能力,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达明显降低,与正常对照差异显著(P<0.01);CTL对MCF-7细胞杀伤活性为17.35%与对照组56.14%比较差异显著(P<0.01);IL-12分泌和共刺激T淋巴细胞所分泌的IFN-γ明显降低(P<0.01)。结论:MCF-7乳腺癌细胞上清明显抑制所共培养的树突状细胞的分化、成熟及抗原提呈能力。
- 王海燕葛银林
- 关键词：树突状细胞MCF-7细胞肿瘤
- siRNA沉默KDR基因对人乳腺癌细胞甲基化和凋亡作用的研究
- 目的KDR的表达抑制对人乳腺癌细胞NES1甲基化状态和凋亡相关基因的表达作用,探讨KDR siRNA促MCF-7细胞凋亡的作用机制。方法体外化学合成针对KDR基因的siRNA序列,在脂质体Lipofectamine200...
- 许秀娥葛银林徐宏伟
- 关键词：MCF-7细胞甲基化血管内皮生长因子受体2
- 文献传递
- 敲减VEGFR-1基因抑制乳腺癌细胞增殖的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:体外水平探讨利用化学修饰的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减VEGFR-1基因治疗乳腺癌的可行性和特异性。方法:采用阳离子脂质Lipofectamine2000TM作为转染试剂将同时针对人和大鼠VEGFR-1基因的小干扰RNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7和大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88,敲减VEGFR-1基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,半定量RT-PCR,蛋白印迹试验等检测VEGFR-1mRNA和蛋白表达及细胞增殖变化。结果:靶向VEGFR-1基因的siRNA转染细胞后,两种细胞增殖均被抑制,同浓度两细胞株指标无显著差异,VEGFR-1mRNA和蛋白的表达均明显降低。各对照组指标则无显著变化。结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi能成功敲减VEGFR-1基因的表达、抑制乳腺癌细胞增殖。
- 王明明葛银林李泉张金玉欧阳奇琦
- 关键词：SIRNAMCF-7细胞血管内皮生长因子受体1基因治疗
- 下调VEGFR-1基因表达对抑制乳腺癌细胞增殖的影响
- 2010年
- 目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)下调VEGFR-1基因的表达研究对乳腺癌增殖的影响。方法设计针对人VEGFR-1基因的小干扰RNA,直接化学合成,脂质体Lipofectamine^(TM)2000作为转染试剂,转染人乳腺癌细胞系MCF-7,然后四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,半定量RT-PCR和蛋白印迹试验检测VEGFR-1 mRNA和蛋白的表达,Hoechst33258荧光染色分析细胞凋亡。结果实验结果显示:下调VEGFR-1基因表达,乳腺癌细胞MCF-7增殖被抑制,VEGFR-1 mRNA和其蛋白的表达明显降低,Hoechst33258荧光染色显示转染siRNA72h后MCF-7细胞凋亡明显增加。结论化学合成的siRNA能成功下调VEGFR-1基因的表达,并抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、增加凋亡;下调VEGFR-1基因的表达有可能是潜在的肿瘤治疗方法。
- 王晓飞
- 关键词：基因治疗SIRNAMCF-7细胞血管内皮生长因子受体
- 应用siRNA技术探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF对树突状细胞的影响被引量：3
- 2009年
- 为探讨MCF-7乳腺癌细胞分泌的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)对树突状细胞(dendritic cell,DC)功能及其分化的影响,针对VEGF基因设计siRNA(small interferingRNA,siRNA),采用脂质体转染法以100nmol/L最佳转染浓度导入MCF-7乳腺癌细胞(siRNA组),以脂质体Lipofectamine2000TM转染MCF-7乳腺癌细胞培养上清培养正常DC作为对照(对照组),采用ELISA法检测经siRNA干扰VEGF基因后的MCF-7乳腺癌细胞分泌的VEGF因子含量,Western印迹检测VEGF蛋白表达,以探讨siRNA的基因沉默效果;以siRNA组和对照组培养上清分别培养外周血单个核细胞,用流式细胞仪检测所诱导DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达,用MTT法检测转染前后两组DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)对MCF-7细胞的细胞毒作用.结果显示,MCF-7乳腺癌细胞培养上清能明显抑制正常DC分化成熟及抗原递呈能力,干扰VEGF基因后MCF-7乳腺癌细胞培养上清对DC的影响明显降低,CD80、CD83、CD86和HLA-DR的表达较对照组显著升高,而CD1a表达下降(P<0.01).转染前后DC诱导的CTL对MCF-7细胞的杀伤活性有明显差异(P<0.01).由此可见,siRNA可靶向抑制MCF-7乳腺癌细胞VEGF的表达,下调VEGF后的MCF-7细胞上清对DC分化成熟及功能的抑制作用明显降低,从而推测VEGF在肿瘤的发生、发展和免疫抑制方面可能起着重要的作用.
- 王海燕葛银林
- 关键词：树突状细胞RNA干扰MCF-7细胞
