国家自然科学基金(30070807)
- 作品数：13 被引量：70H指数：5
- 相关作者：谢鼎华肖自安葛圣雷胡鹏伍伟景更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院中南大学湘南学院附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 遗传性聋基因研究——进展和未来应用被引量：1
- 2004年
- 肖自安谢鼎华
- 关键词：遗传性聋病原学非综合征性聋病因学基因定位
- 基因芯片联合DNA测序法在大前庭水管综合征患者基因诊断中的应用被引量：8
- 2011年
- 目的应用基因芯片联合DNA测序法对大前庭水管综合征患者进行基因突变检测,分析中国人患者的基因型及探讨其基因诊断策略。方法采集30例大前庭水管综合征患者的外周血,提取基因组DNA。耳聋基因芯片筛查SLC26A4基因的2个突变ⅣS7-2A>G和H723R,发现纯合突变或复合杂合突变即停止筛查。如未发现突变或发现单纯杂合突变则采用DNA测序法检测SLC26A4基因其余外显子,直至发现另一个突变。如仍未发现突变则检测FOXI1基因。结果在30例大前庭水管综合征患者中,基因芯片法联合DNA测序法共检出28例有SLC26A4基因突变(93.33%)。共发现16种突变类型,其中ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。新发现4种突变类型(G368X、ⅣS8-1G>T、ⅣS13+9C>T和Q696X),未发现FOXI1基因突变。结论在中国人大前庭水管综合征患者中,SLC26A4基因的ⅣS7-2A>G突变的发生率最高,其次为H723R。针对这两个突变热点的基因芯片适用于对中国人群进行SLC26A4基因突变的筛查。发现的4例新突变类型对大前庭水管综合征的病因研究和基因诊断具有重要意义。
- 朱发梅胡鹏赖若沙谢鼎华
- 关键词：前庭水管基因基因芯片
- 脑源性神经营养因子基因修饰骨髓基质细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的影响被引量：11
- 2006年
- 目的探讨人脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)基因工程细胞的建立及其对体外培养的小鼠螺旋神经元生长活性的影响。方法参照分子克隆技术成功构建BDNF真核表达载体———pcD-NA3.1(-)-BDNF,体外证实BDNF基因转染猿猴病毒40肝脏转化细胞(COS7)后正常表达,将骨髓基质细胞分离培养,体外转染骨髓基质细胞建立BDNF基因工程细胞,观察该基因工程细胞对体外培养小鼠螺旋神经元的生长活性的影响。结果成功构建BDNF基因真核表达载体,并且建立了BDNF基因工程细胞;在体外BDNF基因工程细胞能促进螺旋神经元的生长,并保护螺旋神经元免受氧化损伤。结论建立的BDNF基因修饰的骨髓基质细胞,对体外螺旋神经元生长、生存起着重要的保护作用,为进一步研究基因修饰的骨髓基质细胞内耳移植奠定了重要的基础。
- 朱纲华葛圣雷谢鼎华
- 关键词：基因工程细胞骨髓基质干细胞脑源性神经营养因子螺旋神经元
- 内耳间隙连接和连接蛋白基因家族与遗传性聋被引量：3
- 2005年
- 耳蜗有非感觉上皮细胞和结缔组织细胞2套间隙连接系统,内耳前庭的感觉上皮也有间隙连接。已发现在内耳表达的连接蛋白有Cx26、Cx30、Cx31、Cx32、Cx43和Cx45。连接蛋白是同一基因家族编码,其中GJB2(Cx26)、GJB3(Cx31)、GJB6(Cx30)、GJA1(Cx43)、GJB1(Cx32)都与遗传性聋有关。GJB2基因敲除小鼠在胚胎期致死。GJB3敲除小鼠60%在胚胎死亡,成活小鼠无耳聋和皮肤疾病等表型。GJA1裸鼠表现心脏发育缺陷与膜内和软骨内成骨延迟。GJB1敲除小鼠表型无明显异常,但外周神经表现脱髓鞘改变。不同间隙连接的缺陷导致听力下降的机制可能不同。间隙连接与耳聋关系的深入研究,可能有助于阐明听觉和耳聋的部分机制。
- 肖自安谢鼎华
- 关键词：连接蛋白
- 骨髓基质干细胞豚鼠内耳移植初步观察被引量：14
- 2005年
- 目的 建立骨髓基质干细胞(marrowstromalcell,MSC)内耳移植技术,研究内耳细胞移植的可行性。方法 将豚鼠骨髓基质干细胞分离培养,用4 ,6 -联脒- 2 -苯基吲哚( 4 ,6 -diamidino - 2 -phenylindole,DAPI)荧光标记,采用显微注射技术在耳蜗底周鼓阶钻孔,通过钻孔处缓缓注入细胞,术后14天处死,行耳蜗石腊切片,荧光显微镜及HE染色观察移植细胞成活情况。结果 骨髓基质干细胞内耳移植成活,并贴壁生长。结论 成功地建立了骨髓基质干细胞内耳移植技术。
- 葛圣雷谢鼎华朱钢华陈勇张青松肖自安陈主初肖志强
- 关键词：骨髓基质干细胞细胞移植DAPI
- 浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达被引量：2
- 2005年
- 目的探讨浆膜蛋白RTN1和RTN4基因在小鼠内耳的表达。方法采用5只成年小鼠内耳组织提取总RNA,逆转录后获得小鼠内耳细胞cDNA,根据RTN1和RTN4基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增,通过PCR产物分析和DNA测序确定RTN1和RTN4是否在小鼠内耳细胞表达。结果采用小鼠内耳组织总RNA,RT-PCR扩增出RTN1和RTN4基因部分编码区,扩增产物测序证实小鼠内耳中有RTN1和RTN4基因的表达。结论RTN1和RTN4基因在内耳有表达,为RTN1和RTN4与连接蛋白26(connexin26)蛋白的互作关系提供了进一步的证据。浆膜蛋白RTN1和RTN4可能与连接蛋白26在听觉生理中起作用。
- 胡鹏谢鼎华肖自安伍伟景陈勇夏昆
- 关键词：逆转录聚合酶链反应信使RNA内耳
- EGCG对过氧化氢造成的螺旋神经节细胞损害的抑制作用被引量：14
- 2004年
- 目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸盐 [(- ) -epigallocatechin - (3) -gallate ,EGCG]对过氧化氢(H2 O2 )所致培养耳蜗螺旋神经节细胞 (spiralganglioncells ,SGC)氧化损伤的保护作用。方法 SGC在体外培养 2 4小时后 ,分别加入不同浓度 (2 5、5 0、10 0、2 0 0及 5 0 0 μmol L)的H2 O2 和 或EGCG(10、5 0及 10 0 μg ml)后继续培养 2 4小时 ,采用四唑盐 (MTT)比色试验和Hoechst332 5 8核染色法分别检测细胞活力和凋亡率 ,并以经典抗氧化剂维生素C为对照。结果 当H2 O2 浓度≥ 5 0 μmol L时 ,细胞存活率及细胞凋亡率与对照组相比明显下降 (P <0 .0 5 ) ,并随H2 O2浓度升高而加重。EGCG处理后 ,能明显提高细胞存活率 ,降低细胞凋亡率 (P <0 .0 5 ) ,随着EGCG浓度提高 ,其保护作用加强 ,且较VitC更具优势。结论 绿茶提取物EGCG在H2 O2
- 刘国辉谢鼎华朱纲华伍伟景葛圣雷
- 关键词：螺旋神经节细胞细胞活力
- 连接蛋白26与神经内分泌特异蛋白的羧基端相互作用被引量：1
- 2004年
- 目的 :应用酵母双杂交技术筛选和鉴定连接蛋白 2 6 (connexin 2 6 ,Cx2 6 )的相互作用蛋白质。方法 :以正常人DNA为模板 ,PCR扩增Cx2 6 (GJB2 )全长编码区作为诱饵 ,基因重组法定向克隆到第 3代MatchMakerGal4双杂交系统的 pGBKT7质粒 ,用构建的pGBKT7 Cx2 6质粒筛选人胎脑cDNA文库 ,获得的阳性克隆的插入子为Cx2 6的相互作用蛋白质 (猎物 ) ,将Cx2 6和筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验 ,去除假阳性。对阳性克隆插入子的DNA序列进行测序 ,在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果 :1个阳性克隆的插入子与神经内分泌特异蛋白 (neuroendocrinespecificprotein ,NSP)羧基端的 1 4 5个氨基酸残基序列一致 ,阅读框无移位。结论 :Cx2 6与NSP的羧基端具有相互作用 ,NSP可能在Cx2 6蛋白的转运。
- 肖自安谢鼎华黄亮群施小六夏昆杨曙夏家辉
- 关键词：连接蛋白胎脑人胎阳性克隆
- 小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位分析被引量：5
- 2004年
- 目的 分析小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位的类型。方法 手术分离新生小鼠的耳蜗螺旋神经节细胞进行培养,24 h后提取RNA。逆转录后获得螺旋神经节细胞cDNA,根据电压依赖性钙通道7种亚单位序列设计的引物进行聚合酶链反应扩增,通过聚合酶链反应结果分析和DNA测序确定螺旋神经节细胞表达的亚单位类型。结果 逆转录聚合酶链反应扩增出α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的片段,测序进一步证明小鼠螺旋神经节细胞中有这几种亚单位的存在。结论 小鼠螺旋神经节细胞中有α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的表达。α1D和α1E亚单位的共表达证明在哺乳动物的螺旋神经节细胞中有L型和R型电压依赖性钙通道。
- 胡鹏谢鼎华肖自安伍伟景陈勇夏昆
- 关键词：小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位逆转录聚合酶链反应耳蜗
- 湖南郴州非综合征型聋患者GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因突变分析被引量：11
- 2012年
- 目的探讨湖南郴州非综合征型聋患者的分子病因特点。方法采取湖南郴州154名非综合征型聋患者的外周血,提取DNA,采用基因芯片筛查GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因的热点突变,基因芯片法未确诊的样本则采用DNA测序法进一步检测。结果两种方法共在34例(22.08%,34/154)患者中检出7种GJB2基因突变,其中235delC(13.63%,21/154)发生率最高,其次是299delAT(9.09%,14/154);在8例伴有大前庭水管的患者中检测出7种SLC26A4基因突变,包括一种新突变Q696X;3例患者被检出线粒体DNA12SrRNA基因突变。结论湖南郴州非综合征型聋患者中GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因突变的发生率与中国大部分地区相似,Q696X为新发现的SLC26A4基因突变。
- 胡鹏邓忠谭东辉赖若沙朱发梅谢鼎华
- 关键词：基因突变基因芯片
