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模拟金黄色葡萄球菌脂磷壁酸表位的初步筛选与鉴定: 2015年; 目的:利用噬菌体展示肽库技术筛选并鉴定可模拟金黄色葡萄球菌细胞壁脂磷壁酸(LTA)的表位。方法:以抗LTA单抗为靶分子,采用液相法对噬菌体12线性肽库进行3轮淘选,夹心ELISA鉴定噬菌体克隆。对阳性噬菌体克隆进行DNA测序并推导氨基酸序列,选择优势序列合成线性肽,ELISA鉴定线性肽与抗体结合特异性。结果:经过三轮液相筛选,得到4个与抗LTA单抗特异性结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示阳性克隆展示4种不同序列。选择与单抗结合最好的序列GHx DFRQxx QPS合成线性短肽L2,ELISA结果显示L2能够与抗LTA单抗特异性结合。结论:利用噬菌体展示肽库筛选技术获得可模拟LTA表位的序列。; 王湘豫黄钊霞侯晓睿朱平富宁刘北一; 关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体展示肽库模拟肽

在MRSA系统性感染模型中Pam3CSK4预处理降低小鼠肾组织的炎症反应被引量：2: 2017年; 目的:在耐甲氧西林金葡菌(MRSA)系统性感染模型中,观察低剂量TLR2激动剂Pam3CSK4预处理对小鼠肾组织中炎症反应的影响并初步探讨其机制。方法:于感染前48 h、24 h对BALB/c小鼠行尾静脉注射Pam3CSK4(10μg/100μl/只);2×10~7CFU/只MRSA经静脉感染小鼠,ELISA和荧光实时定量PCR(Q-PCR)检测细胞因子水平,Q-PCR检测TLR2、IRAKs等相对表达量,Western blot检测NF-κB p65磷酸化、IRAK-M及A20表达。结果:与对照组相比,预处理组在感染6 h后肾组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、CCL3和IFN-γ含量显著减少,i NOS表达量降低,IL-10和TGF-β表达量增高,TLR2表达下降;处理组肾组织在感染12 h后IRAK-1表达无明显增加,而IRAK-M表达量显著增加;Western blot结果显示Pam3CSK4预处理组NF-κBp65磷酸化降低,IRAK-M表达明显增高。结论:Pam3CSK4预处理降低MRSA系统性感染小鼠肾组织的炎症反应,这可能与诱导IRAK-M表达相关。; 黄钊霞易夏玉侯晓睿王湘豫朱平刘北一; 关键词：耐甲氧西林金葡菌炎症

抗金葡菌肽聚糖模拟肽抗血清的被动保护作用: 2017年; 目的探讨针对金葡菌肽聚糖(PGN)模拟序列抗血清的被动保护作用。方法应用在线软件(http://www.ddg-pharmfac.net/mhcpred/MHCPred)和T细胞表位分析软件DNAstar对模拟PGN表位的SP31(ATWSHHLSSAGL)进行分析,改造SP31序列后合成四分枝多价抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP)MAP-P31.1,以MAP-P31.1免疫小鼠和家兔,体外鉴定抗MAP-P31.1血清对MRSA/MSSA杀菌作用,体内观察饱和硫酸铵纯化免疫兔血清对金葡菌攻击动物的保护作用。结果将原始SP31序列改造为ATWSHHLSSAGLGGAS序列。2种抗MAP-P31.1血清均可结合PGN。用热灭活S.aureus再次加强免疫,抗血清的效价可有10倍以上升高(P<0.05)。抗MAP-P31.1血清在有补体或无补体作用下均有显著抑菌/杀菌作用(P<0.01),且显著优于抗金葡菌免疫的全菌血清及抗MAP-P31血清(P<0.001)。抗MAP-P31.1血清显著增强小鼠巨噬细胞对MRSA与MSSA的吞噬作用,过继转移后可保护小鼠抵御金葡菌致死性攻击(P<0.05),小鼠肾脏、脾脏中荷菌量显著降低(P<0.05)。结论模拟肽MAP-P31.1作为免疫原所诱导的抗血清具备了体外对MRSA的杀菌/抑制作用,但体内对MRSA的保护作用并不显著。; 陈益国侯晓睿朱平刘北一; 关键词：肽聚糖模拟肽金葡菌

模拟肽聚糖表位的序列分析及其抗原性鉴定: 2017年; 目的:在线预测肽聚糖(PGN)模拟抗表原位并鉴定其抗原性。方法:利用抗PGN单克隆抗体从12线性噬菌体随机展示肽库中筛选模拟PGN表位的阳性克隆,对阳性克隆进行DNA测序和推导氨基酸序列,结合生物信息学分析阳性序列GRWxHxVxWAGL的抗原性以及T细胞表位,根据分析对阳性序列进行修饰与合成,ELISA法鉴定阳性序列的抗原性。结果:经对噬菌体12线性肽库的3轮筛选,夹心ELISA鉴定得到16个与抗PGN单克隆抗体结合的克隆,DNA测序并推导氨基酸序列,该序列与前期具有抗金黄色葡萄球菌活性序列No.31(ATWxHxLxSAGL)含有保守序列WxHx…AGL。在线分析(http://bio.dfci.harvard.edu/Tools/antigenic.pl,www.syfpeithi.de,http://www.darrenflower.info/mhcpred)表明,含保守序列的阳性序列GRWxHxVxWAGL包含与人和小鼠MHC结合表位(-WxHxVxW-),C端加入AGGS后具有T细胞表位(DNAstar),据此合成线性肽Biotin-GRWxHxVxWAGLAGGS(命名为SP39)。ELISA结果显示,SP39能与抗PGN单抗及抗S.aureus全菌多抗结合,PGN能抑制SP39与抗PGN单克隆抗体结合。结论:经噬菌体肽库筛选获得阳性序列GRWxHxVxWAGLAGGS,该序列可能模拟PGN抗原表位。; 陈益国侯晓睿朱平刘北一; 关键词：肽聚糖模拟肽噬菌体肽库金黄色葡萄球菌

SPA预处理对小鼠金葡菌致死性攻击的保护作用被引量：3: 2013年; 目的:探讨金葡菌A蛋白(SPA)预处理小鼠对金葡菌致死性攻击的保护作用。方法:于0、24小时对BALB/c小鼠行腹腔注射SPA 20μg/只/次,对照组以生理盐水替代SPA。第二次处理24小时后,腹腔注射致死量(3×1010CFU/kg)金葡菌(ATCC25923),观察小鼠生存率;非致死量金葡菌(2×108CFU/只)腹腔感染6小时后,ELISA、Q-PCR检测小鼠血清及脾脏中TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及表达量。结果:与对照组小鼠2天内全部死亡比较,致死量细菌攻击后,SPA预处理组小鼠2周生存率为30%,显著高于对照组(P<0.05);非致死量细菌感染后,预处理组小鼠血清及脾脏中TNF-α、IL-6、IFN-γ含量及表达量显著低于对照组(P<0.05),IL-10表达量降低。结论:SPA预处理增强BALB/c小鼠抵御S.aureus致死攻击。; 侯晓睿陈益国朱平刘北一富宁; 关键词：金葡菌细胞因子

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国家自然科学基金(31270980)