湖南省自然科学基金(14JJ2060)
- 作品数：11 被引量：23H指数：3
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- 嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2对神经干细胞分化的作用
- 2017年
- 目的:探讨嗅鞘细胞分泌蛋白IGFBP-2在诱导神经干细胞(NSCs)分化过程中的作用。方法:采用新生1 d昆明小鼠嗅球培养嗅鞘细胞(OECs),并制备无血清上清液。C17.2 NSCs置于含10%FBS的DMEM/F12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80%融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F12培养基(对照组)培养;实验组和对照组均分别加入终浓度为0 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL的IGFBP-2。倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5d后收集各组细胞,行Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、神经胶质酸性蛋白(GFAP)及β-微管蛋白Ⅲ(TUJ-1),蛋白激酶1/2(ERK 1/2)表达情况,免疫荧光染色鉴定GFAP,TUJ-1阳性细胞并计数,流式分析GFAP,TUJ-1阳性细胞。结果:Western blot、流式分析示对照组中各浓度组GFAP、TUJ-1表达差异无统计学意义;Western blot示实验组随IGFBP-2浓度升高,GFAP表达增多,TUJ-1表达减少,且加入IGFBP-2后ERK1/2表达迅速增多,免疫荧光鉴定表明,随着IGFBP-2浓度升高,GFAP阳性细胞增多,TUJ-1阳性细胞减少,结果有统计学意义。结论:IGFBP-2可以促进OCM诱导NSCs向星形胶质细胞分化,且与浓度呈正相关,其机制与ERK1/2通路有关。
- 邓裕佳段答卓毅严卫萍卢明滕晓华
- 关键词：IGFBP-2神经干细胞诱导分化嗅鞘细胞
- 低氧预处理间充质干细胞治疗缺血缺氧性脑损伤的研究进展被引量：1
- 2016年
- 间充质干细胞(MSCs)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞,它能促进损伤区域脑组织的功能恢复。MSCs在生理条件下生长的氧浓度低于传统实验条件下21%氧浓度,低氧预处理MSCs能增强它对低氧的耐受能力,增加它的增殖活性,减少它的凋亡,促进损伤区域的血管形成。移植低氧预处理后的间充质干细胞治疗缺血缺氧性脑损伤,能减轻损伤区域的炎症反应,减少神经细胞的凋亡,促进神经功能的恢复,达到治疗缺血缺氧性脑损伤的目的。
- 袁挺卢明
- 关键词：间充质干细胞低氧预处理缺血缺氧性脑损伤细胞移植
- 嗅鞘细胞分泌蛋白SC1促进神经元突触形成被引量：2
- 2015年
- 目的探讨嗅鞘细胞(OECs)诱导神经干细胞(NSCs)分化后,其分泌蛋白SC1对分化后神经元突触形成的作用。方法用小鼠OECs条件培养基诱导小鼠神经干细胞系C17.2分化后,用突触前膜抗体bassoon标记突触并计数,同时用Western blot检测bassoon的表达量。结果 OECs诱导组突触数目及bassoon的表达量明显高于全反式维甲酸(RA)诱导组,在RA诱导组加入小鼠SC1重组蛋白后,突触数目及bassoon的表达量与OECs诱导组接近。结论 OECs分泌蛋白SC1能促进C17.2 NSCs分化后神经元的突触形成。
- 段答姜淼叶玉勤葛丽特贺晓生陈平卢明
- 关键词：嗅鞘细胞神经干细胞突触形成
- 骨髓间充质干细胞移植治疗阿尔茨海默病的研究进展被引量：3
- 2017年
- 阿尔茨海默病是一种起病隐匿、缓慢,且呈进行性发展趋势的中枢神经系统退行性疾病,其病因及发病的机理仍不清楚。近几年干细胞移植治疗中枢神经系统退行性疾病已成为神经学科领域研究的热点,其中骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞,它与神经干细胞和胚胎干细胞相比具有显著的优势,没有伦理、免疫排斥及来源不足等问题。它既能为阿尔茨海默病的临床前期研究提供大量的细胞来源,也可以为将来临床自体细胞移植提供一种非常有效的种子细胞。
- 曾武彭立辉
- 关键词：阿尔茨海默病骨髓间充质干细胞细胞移植
- 低氧微环境促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖及其机制被引量：1
- 2017年
- 背景:人嗅黏膜间充质干细胞不仅具有一般间充质干细胞的基本特征,因其来源于外胚层,还能更多地向神经元方向分化,是一种用于神经损伤修复与再生的理想种子细胞。常规细胞体外培养的氧气体积分数约为21%,而人体正常组织和组织间隙中的氧气体积分数为3%-9%。低氧对人嗅黏膜间充质干细胞增殖及活性的影响尚未见报道。目的:探讨低氧微环境对人嗅黏膜间充质干细胞增殖、活性的影响及其相关机制。方法:分离培养人嗅黏膜间充质干细胞,应用流式细胞学和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将第4代人嗅黏膜间充质干细胞分成3组:体积分数为21%O2组(常氧组)、体积分数为3%O2组(低氧组)、体积分数为3%O2+20μmol/L YC-1(HIF-1α抑制剂)组(抑制剂组),干预72 h后采用流式细胞技术检测各组细胞的细胞周期和细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测增殖细胞核抗原的蛋白表达;采用Q-PCR及Western Blot分别检测HIF-1α和TWIST的m RNA及蛋白表达。结果与结论:(1)分离培养出了人嗅黏膜间充质干细胞,第4代人嗅黏膜间充质干细胞的纯度达97%以上;(2)低氧组比常氧组的增殖系数大(P<0.05),且两组间的存活细胞及总体的凋亡细胞(机械死亡+早期凋亡+晚期凋亡)比例差异无显著性意义(P>0.05);(3)低氧组的增殖细胞核抗原蛋白表达显著增高,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(4)低氧组中HIF-1α和TWIST m RNA和蛋白表达显著上调,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(5)低氧微环境能促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖而对其细胞活性无明显影响,且此过程与人嗅黏膜间充质干细胞内HIF-TWIST信号通路被激活有关。
- 卓毅李璇段答葛丽特袁挺吴沛王昊龙浪卢明
- 关键词：干细胞低氧低氧诱导因子增殖国家自然科学基金
- 嗅黏膜间充质干细胞在神经修复中的研究进展被引量：3
- 2014年
- 嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)是一类存在于嗅黏膜的多分化潜能的干细胞,在一定的体外条件下可分化为成骨细胞、脂肪细胞、平滑肌肌细胞、神经细胞等,且易于取材,可自体移植,无免疫排斥反应,无伦理道德问题,为神经系统疾病治疗提供了新的细胞来源,可在神经修复和功能重建中发挥治疗作用。
- 葛丽特卢明
- 关键词：嗅黏膜间充质干细胞生物学特性细胞移植
- 脂肪间充质干细胞在神经修复中的研究进展被引量：3
- 2014年
- 脂肪间充质干细胞(ADSC)具有自我更新和多向分化的潜能,可被诱导分化为神经元、神经胶质细胞等,表达多种神经营养因子并具有免疫调节作用,且来源广泛、采集方便、无伦理学问题,为神经修复及功能重建提供了新的细胞来源,可在多种神经系统疾病中发挥治疗作用。
- 葛丽特卢明
- 关键词：脂肪间充质干细胞神经修复细胞移植
- 微流控技术在神经科学中的应用被引量：1
- 2017年
- 微流控芯片以精确的时间、空间掌控能力特点能较好地模拟体内药理、生理环境。微流控芯片还具有样品消耗少、操作简单、检测速度快、多功能集成、体积小及便于携带等优点。微流控芯片自身微细结构对于操作细胞及小生物体也提供了便利,并且易于组装和拆卸,与其他精密仪器相互兼容。神经外科是精细学科,因此微流控芯片亦受到越来越多神经科学专家的关注,在神经分子生物学、形态学、电生理等领域均有研究。
- 曾武卢明彭立辉
- 关键词：微流控秀丽隐杆线虫药物筛选细胞分选
- 人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤被引量：3
- 2017年
- 背景:干细胞应用于脊髓损伤的报道很多,但是这些细胞存在免疫排斥、取材困难、纯化不易等各方面的缺陷,而鼻黏膜间充质干细胞无上述缺点,将其应用于临床脊髓损伤患者疗效分析目前尚无相关报道。目的:观察人鼻黏膜间充质干细胞的生物学特性,同时进行自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗晚期不完全性脊髓损伤的临床疗效观察与评价。方法:①取材、培养鼻中隔偏曲手术患者的鼻黏膜间充质干细胞,扫描及透射电子显微镜观察细胞的超微结构,并在体外对其进行多向诱导分化;②经医学伦理委员会同意后,取材培养脊髓损伤患者的鼻黏膜,通过腰椎穿刺术注射到8例晚期不完全性脊髓损伤患者椎管内,细胞移植1-3次,前后移植间隔时间为5-7 d,每次移植细胞总数约为5×107个。细胞移植治疗前及随访6个月时按照国际截瘫医学会ASIA评分标准进行评分。结果与结论:①鼻黏膜间充质干细胞在光镜下形态以梭形为主,并呈现出放射状排列,细胞免疫荧光表达STRO-1;②流式细胞学检测显示高表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞标记物CD34、CD45,且细胞纯度达97%以上;③鼻黏膜间充质干细胞在扫描及透射电子显微镜下可见短粗的微绒毛及不同的细胞生长形态;④鼻黏膜间充质干细胞还具有向骨组织、脂肪组织、干细胞球及神经元分化的潜能;⑤经自体血清培养的鼻黏膜间充质干细胞移植后,除1例患者住院期间无明显神经功能改善外,其余患者均有不同程度的神经功能恢复且无任何不良副反应;⑥结果表明,鼻黏膜间充质干细胞是组织工程细胞修复中一种新型的种子细胞来源;自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者能达到一定的治疗效果,具有临床应用价值。
- 卓毅段答葛丽特袁挺刘波吴沛王昊龙浪刘作贺西京卢明
- 关键词：鼻粘膜间质干细胞移植脊髓损伤
- 低氧微环境促进嗅黏膜间充质干细胞向神经元分化及其相关机制被引量：1
- 2016年
- 目的:研究低氧微环境下利用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)上清液诱导嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)更多地向神经元分化及其相关的机制。方法:分离培养OECs和OM-MSCs,应用流式细胞仪和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将OM-MSCs分为3%O_2+低氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂利非西呱(lifi ciguat,YC-1)+OECs上清诱导组(A组)、3%O_2+OECs上清诱导组(B组)及21%O_2+OECs上清诱导组(对照组)。采用免疫荧光检测分化后的神经元,采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)和Western印迹分别检测HIF-1α的mRNA及βIII-微管蛋白(βIII-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein,GFAP)的表达,再用膜片钳检测分化后的神经元钾离子通道开放情况。结果:实验各组相比较,B组OM-MSCs诱导后免疫荧光显示βIII-tubulin表达最多,Q-PCR显示B组HIF-1α表达明显增高(均P<0.05);Western印迹表明B组中βIII-tubulin蛋白表达显著增多,而胶质细胞标志物GFAP表达明显降低(均P<0.05);且诱导分化后的神经元经膜片钳检测发现钾离子电流。结论:低氧微环境下的OM-MSCs经OECs上清液诱导能显著提高其向神经元分化的比例,并明显降低了神经胶质细胞的产生,且与细胞HIF-1α信号通路被激活有关。
- 卓毅袁挺段答王磊葛丽特吴沛王昊卢明
- 关键词：低氧诱导因子-1Α嗅鞘细胞神经元
