江西省科学技术厅社会发展攻关项目(20041095)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：邱小华郭琳琳吴建兵王汉姣段凤英更多>>
- 相关机构：南昌大学第二附属医院福建医科大学更多>>
- 发文基金：江西省科学技术厅社会发展攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 肺癌A549细胞中RNAi抑制MeCP2表达的实验研究被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨RNA干扰下调MeCP2基因后对人肺癌A549细胞RASSF1A和C/EBPα基因表达及细胞增殖能力的影响。方法:根据MeCP2的碱基序列设计并合成短发夹RNA(shRNA),构建质粒表达载体,用阳离子脂质体法体外转染A549细胞,筛选出稳定转染的细胞株,RT-PCR法检测MeCP2抑制效果及RASSF1A和C/EBPα表达,MTT法检测转染后细胞增殖能力。结果:成功构建了靶向MeCP2的真核表达载体pSilencer-MeCP2/Ⅰ和pSilencer-MeCP2/Ⅱ,与空白组和阴性组相比,pSilencer-MeCP2/Ⅰ和pSilencer-MeCP2/Ⅱ组均可有效抑制MeCP2基因mRNA的表达,抑制率分别为47.6%和70.3%。且在上述两组中C/EBPα表达分别上调约115%和135%、细胞增殖能力明显减弱,与空白组和阴性组比较差异具有统计学意义(P<0.05),而RASSF1A的表达在各组细胞中未见明显变化(P>0.05)。结论:肺癌A549细胞中MeCP2基因的表达可被RNA干扰载体有效抑制,进而导致细胞中部分与增殖和凋亡相关基因的表达改变,细胞增殖能力减弱。
- 王汉姣吴建兵邱小华郭琳琳
- 关键词：RNA干扰肺癌MECP2细胞增殖基因表达
- 人MeCP2基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响。方法根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确。转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响。结果成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2有明显的抑制作用。结论人MeCP2的shRNA真核表达质粒成功构建及鉴定为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
- 郭玲玲段凤英邱小华
- 关键词：质粒
