国家自然科学基金(30500608) 作品数:5 被引量:8 H指数:2 相关作者: 张兴梅 石玉生 张天炜 刘慧 李妍 更多>> 相关机构: 南方医科大学南方医院 南方医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定 被引量:1 2008年 目的构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定。方法应用PCR方法扩增EGFRvⅢ ECD片段,将其T-A克隆和测序,再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达。采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-vⅢECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上。Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究。 张兴梅 石玉生 刘忠英关键词:表皮生长因子受体 胞外区 原核表达 融合蛋白 核酸适配子及其治疗应用 被引量:3 2006年 核酸适配子(aptamer)是从大容量的组合化学库中筛选出的短的寡核苷酸。与抗体类似,它与靶分子结合具有高特异性和高亲和力。大多数核酸适配子与靶分子结合后对靶分子有抑制作用。适配子可广泛用于抗凝血、抗病毒、抗增殖、抗炎等方面。特异针对人VEGF165的核酸适配子已在美国被批准上市。 张兴梅 石玉生SELEX技术在神经系统疾病研究中的应用 被引量:1 2010年 配体指数级富集系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术是一种组合化学技术,可经过反复筛选扩增得到针对靶分子的高亲和力和高特异性的适配子.适配子通过识别、结合特定靶分子并对其进行功能调控从而达到对疾病诊断和治疗的目的 .近年来SELEX技术在神经系统功能和疾病研究中的应用越来越多.现已经筛选出针对朊蛋白、肌腱蛋白-C、β-淀粉样肽、乙酰胆碱受体的自身抗体等靶标的适配子,促进了对朊病毒病、脑肿瘤、阿茨海默病、重症肌无力等神经系统疾病的诊断和治疗研究,为这些疾病的诊治提供了新的研究工具. 袁超 刘慧 张天炜 张兴梅关键词:适配子 神经系统疾病 表皮生长因子受体胞外区的原核表达和鉴定 被引量:1 2007年 目的克隆表皮生长因子受体(EGFR)胞外区段基因序列(EGFRECD),构建重组融合表达载体。方法采用常规PCR方法扩增EGFR的胞外区DNA序列,并将扩增产物克隆入GST融合表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-4T-1/EGFRECD,转化BL21(DE3)宿主菌;采用SalI和NotI双酶切和序列分析鉴定插入序列的正确性:并用IPTG诱导工程菌,SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达。结果双酶切鉴定表明,EGFR胞外区序列已经正确克隆到GST融合表达载体中,测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致。SDS-PAGE电泳显示,融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式表达,重组融合蛋白GST-EGFRECD的表达量占菌体总蛋白的12%左右。经Western blotting分析证实,重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别。结论本试验成功克隆了EGFR胞外区DNA序列,构建了融合表达载体,并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFR功能及免疫学研究。 石玉生 张兴梅 李妍关键词:表皮生长因子受体 原核表达 融合蛋白 针对表皮生长因子受体Ⅲ型突变体的抗肿瘤研究进展 被引量:2 2006年 表皮生长因子受体(EGFR)在许多上皮源性肿瘤中过表达,与基因的扩增及突变有关。其中最常见的是EGFR的外显子2~7被删除的Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ),它只在肿瘤中表达,不存在于正常组织,是肿瘤治疗中一个非常吸引人的靶标。特异针对EGFRvⅢ的抗肿瘤治疗包括免疫治疗、核酶技术、RNA干扰等方法。 张兴梅 石玉生关键词:受体 表皮生长因子 免疫疗法 肿瘤