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T_7体外转录siRNA靶向干扰Pim-2效应观察: 2008年; [目的]观察T7RNA聚合酶介导体外转录合成siRNA靶向干扰Pim-2基因表达的效应。[方法]利用T7RNA聚合酶介导的体外转录合成靶向Pim-2的siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ,将其转染入人结肠癌细胞株SW480。利用RT-PCR和Westernblot观察Pim-2基因在RNA和蛋白质水平的表达变化。[结果]与对照细胞相比,转染siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ48h后,Pim-2基因mRNA的抑制率分别为65.4%(P<0.05),46.2%(P<0.05)和56.1%(P<0.05);转染72h后,Pim-2基因蛋白表达抑制率分别为61.6%(P<0.05),45.8%(P<0.05)和55.6%(P<0.05)。[结论]T7体外转录合成siRNA,能有效而特异地抑制人原癌基因Pim-2的表达。; 薛兴欢张淑群姜建涛王西京薛锋杰刘晓旭; 关键词：SIRNA PIM-2

正常乳腺与乳腺癌核基质蛋白的双相电泳—飞行时间质谱研究: 2009年; 目的:应用比较蛋白质组学方法分析正常乳腺与乳腺癌组织的差异表达核基质蛋白,为人乳腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据.方法:应用双相电泳(2-DE)每组分离4例乳腺组织核基质蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI数据库鉴定蛋白质.结果:每张图谱约检测到900个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,选择背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子质量及等电点,初步鉴定了12种蛋白质.结论:这些差异蛋白质部分有望成为乳腺癌诊断及治疗的分子标志物.; 何谦张淑群楚雍烈赵丽华王香玲姜建涛; 关键词：基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱肽质量指纹图谱

Survivin siRNA协同5-FU抑制MCF-7细胞的增殖(英文): 2006年; 目的研究以survivin为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-FU联合应用抑制MCF-7细胞增殖的作用。方法利用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA并筛选出一条RNA干扰survivin基因的靶序列。以脂质体为载体,将survivin siRNA转染至人乳腺癌MCF-7细胞中,用四氮唑盐(MTT)法染色并计算siRNA联用5-FU对MCF-7细胞的抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行统计分析。结果单用5-FU处理细胞,其IC50为4.42μg/ml,而加入5 nmol/L siRNA后,其IC50降为1.18μg/ml,siRNA与5-FU联用对MCF-7细胞的抑制作用较单用5-FU明显增强(F=26.74,P<0.01);Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-FU联用,有较好的协同作用(Q≥1.15)。结论survivinsiRNA可显著增强5-FU对MCF-7细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,克服耐药性的产生。; 张淑群张淑慧薛兴欢王西京姜建涛; 关键词：化学疗法 MCF-7细胞

Prohibitin基因的shRNA真核表达载体的构建及鉴定: 2009年; 目的:构建靶向prohibitin基因的shRNA真核表达载体.方法:根据prohibitin mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,并进行酶切鉴定和测序.结果:酶切结果表明构建的shRNA已插入载体,经测序证明与设计一致.结论:成功构建两个靶向prohibitin基因的shRNA真核表达载体,为下一步研究prohibitin基因在肿瘤细胞中的作用和后续的的体内外实验奠定了基础.; 何谦张淑群赵丽华王香玲楚雍烈; 关键词：RNA干扰 SHRNA 真核表达载体

靶向survivin siRNA与5-Fu协同抑制MCF-7细胞增殖被引量：5: 2008年; 目的研究以survivin为靶标的小干扰RNA(siRNA)与化疗药5-Fu联合应用抑制MCF-7细胞增殖的作用。方法以脂质体为载体,将survivin siRNA转染至MCF-7细胞中,用四氮唑盐(MTT)法染色并计算siRNA联用5-Fu对MCF-7细胞的抑制率,用SAS统计软件及金正均Q值法进行统计分析。结果单用5-Fu,IC50为4.42μg/ml;加入5nmol/LsiRNA后,IC50降为1.18μg/ml;siRNA与5-Fu联用的抑制作用较单用5-Fu强(F=26.74,P<0.01);Q值分析表明survivin siRNA与中低浓度的5-Fu联用,有较好的协同作用(Q≥1.15)。结论survivinsiRNA与5-Fu联用,可显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。; 薛兴欢张淑群姜建涛王西京薛锋杰刘晓旭; 关键词：化学疗法 MCF-7

核基质蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达被引量：2: 2010年; 目的:采用比较蛋白质组学方法研究正常乳腺和乳腺癌组织中的差异表达核基质蛋白(nuclear matrix protein,NMP),并在蛋白质水平对差异蛋白LaminA/C进一步地确证。方法:分别提取4例正常乳腺和乳腺癌组织的核基质蛋白,进行双向凝胶电泳。分离出的差异表达蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析,获得肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),应用Mascot搜索引擎在NCBInr数据库中进行检索鉴定。最后用免疫组化和Western blotting方法验证差异蛋白LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织的相对表达量。结果:经双向凝胶电泳和质谱鉴定,正常乳腺组含有(904±58)个蛋白质点,乳腺癌组检测出含有(944±70)个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,成功鉴定出12种蛋白,其中包括LaminA/C。用免疫组化方法分析LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各20例中的表达,结果显示LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织中的阳性率分别为15%(3/20)和40%(8/20),P<0.05。用Western blot方法观察LaminA/C在正常乳腺和乳腺癌组织各10例中的表达,结果显示乳腺癌组中LaminA/C/β-actin灰度值比值为0.40±0.13,是正常乳腺组LaminA/C/β-actin灰度值比值(0.21±0.13)的1.91倍(P<0.05)。结论:LaminA/C在乳腺癌组织中表达明显增高,LaminA/C蛋白在乳腺癌的发生和发展中可能起一定的作用。; 何谦张淑群赵丽华王香玲楚雍烈; 关键词：蛋白质组学乳腺癌

STUDY ON NUCLEAR MATRIX PROTEINS FROM HUMAN BREAST CARCINOMA: 2009年; Objective To investigate the marker protein of human breast carcinoma from nuclear matrix proteins (NMPs). Methods NMPs were injected subcutaneously into rabbit to get antiserum, which was used to detect the NMPs specificity for breast carcinoma. Results There was an apparent positive band (100 kD) in the NMPs of breast carcinoma, which did not exist in normal breast and other tumors that were detected.Conclusion One or one group of 100 kD NMPs were found to be related to human breast carcinoma, which may be involved in the carcinogenesis and development of human breast carcinoma and valuable for breast carcinoma diagnosis.; 何谦张淑群楚雍烈贾晓黎姜建涛; 关键词：乳腺癌细胞核基质蛋白肿瘤检测标记蛋白抗血清

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国家自然科学基金(30500600)

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