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猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：2: 2010年; 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板,通过RT-PCR扩增编码非结构蛋白2(Nsp2)的基因,插入到pET32a表达载体中并在大肠埃希氏菌中进行表达。SDS-PAGE电泳结果显示融合表达的Nsp2分子量约为68 kDa,Western blotting分析该融合蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应。纯化融合表达产物Nsp2,按100μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以Nsp2和His-Tag为抗原,通过间接EL ISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆。经过3次亚克隆后,最终得到了6株能稳定分泌抗Nsp2抗体的阳性细胞克隆株。间接免疫荧光试验、Western blotting和间接ELISA试验鉴定这6株单克隆抗体均能够特异、单一地识别Nsp2,亚型鉴定结果显示6株单抗均属IgG2a型,其轻链均为κ链。所制备的这些单抗将为鉴定PRRSV Nsp2的B细胞抗原表位以及分析该蛋白的结构和功能奠定基础。; 严玉霖高洪陈玲陈培富杨建发孙文汇高利波赵汝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体

枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其16S-rRNA的克隆: 枯草芽孢杆菌是一种重要的益生菌,常用作动物微生态制剂和生产工业酶。本实验从引进样品中分离到五株杆菌,分别命名为YB-1、YB-2、YB-3、YB-4和YB-5。按照伯杰氏细菌鉴定手册鉴定方法,根据细菌的培养特性、表形分析...; 宋泉芝孙绍美刘旭川王生奎徐佳柴俊张以芳; 关键词：枯草芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌表型鉴定; 文献传递

猪瘟病毒E2蛋白乳酸菌表达系统的构建: 猪瘟(Swine fever)是由猪瘟病毒(Classic Swine FeverVirus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病,猪是该病毒唯一的自然宿主。E2即gp55,是CSFV的囊膜糖蛋白之一,是猪瘟病毒最重要的...; 童亮肖晶刘旭川王生奎孙绍美徐佳柴俊张以芳; 关键词：猪瘟病毒 E2基因乳酸菌; 文献传递

猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达被引量：2: 2012年; 目的研发猴B病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原。方法根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB。结果该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圆细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98kDa。实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达。结论研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。; 段博芳王琼段纲毛永杨叶玲玲杨建明徐维加董俊周晓黎艾军; 关键词：GB基因昆虫细胞

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云南省高端科技人才引进计划项目(2009C1125)