吉林省科技发展计划基金(20080930)
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 血清稀释液的筛选及犬抗狂犬病病毒血清抗体正常值范围的确定
- 2010年
- 应用间接ELISA法进行抗体检测是评价狂犬疫苗免疫效果的一种快捷有效手段。首先筛选得到一种灵敏、特异的血清稀释液;然后应用其对采集自不同地区的812份未免疫犬血清稀释并进行间接ELISA检测;以OIE标准阴、阳性犬血清为对照,随机选取不同A450范围的犬血清应用RFFIT进行检测;以RFFIT效价低于0.1 IU/ml的犬血清,计算阴性血清正常值范围和95%的可信区间,并建立标准品的回归方程。结果显示：所筛选到的血清稀释液灵敏、特异,有756份血清样品的效价低于0.1 IU/ml,犬抗狂犬病抗体阴性血清的正常值范围为0.127 3±0.059 8,95%的可信区间为0.078 1-0.172 3。应用OIE犬阳性血清标准品建立了A450和抗血清效价的回归方程：A=1.139 IU＋0.470。该试验结果为犬狂犬病防制以及犬狂犬病抗体ELISA检测试剂的研制奠定了基础。
- 刘红全单晶辉李宁孟锐奇何秀苗卢强张西臣张茂林何静李瑞友伍少团韦锋锐
- 关键词：正常值范围犬血清狂犬病病毒抗体
- 一种稳定、灵敏且适用于ELISA的四甲基联苯胺底物被引量：3
- 2011年
- 目的评价一种适用于酶联免疫吸附试验(ELISA)的即用型自制四甲基联苯胺(TMB)底物的特性。方法比较1-Step Turbo TMB底物、A/B两组分混合物底物和自制底物与不同稀释度酶标抗体的反应性及其对包被抗体的检测敏感性,对1-Step Turbo TMB底物和自制底物进行稳定性比较。结果 3种底物的吸光度(A)值均随着酶标抗体稀释度的增大而显著下降;当酶标抗体稀释度相同时,自制底物的A值显著高于另外2种底物(P<0.05);在直接ELISA条件下,自制底物对包被抗体的检测敏感性可达15.63 ng/mL;自制底物37℃贮存60 d后的A值仍高于1-Step Turbo TMB底物37℃贮存5 d的A值。结论该即用型自制TMB底物在检测敏感性及稳定性上优于1-Step Turbo TMB底物。
- 单晶辉李宁关振宏段铭卢强刘红全孟锐奇张茂林
- 关键词：酶联免疫吸附试验
- 混合培养基用于提高犬瘟热病毒在细胞上的效价研究
- 2011年
- [目的]探讨高滴度制备犬瘟热病毒(CDV)的方法,对于提高该疫苗的保护率具有重要意义。[方法]选用FK81细胞,分别应用MEM和混合培养基(MEM和DMEM按9∶1的混合物)进行细胞培养和CDV接种,然后对2种培养基下的总细胞数、CDV的半数细胞感染量(TCID50)及电镜下病毒粒子的形态等进行了比较。[结果]混合培养基在总细胞数、TCID50及病毒粒子的形态方面均优于MEM培养基。同时还发现,在测定CDV的TCID50时,酶联免疫吸附试验(ELISA)法较细胞病变(CPE)法更灵敏。[结论]试验所建立的CDV增殖方法,可望用于犬瘟热疫苗的生产实践。
- 王光明张茂林关振宏杨盛华张俊辉
- 关键词：犬瘟热病毒效价
- 猪瘟病毒E2抗原在不同酶标板上包被效果的比较
- 2011年
- 为比较杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)E2抗原在不同酶标板上的包被效果,本研究应用2μg/mL的CSFV E2分别包被Nunc Maxisorp、Cosar StripWell和JET FEP-101-896 3种酶标板,以Flyer Liquid Plate Sealer(FLPS)进行封闭,通过比较猪瘟阳性血清的OD450nm值,筛选包被性能最佳的酶标板。对FLPS、含10%FCS的PBST和含1%BSA的PBST的封闭效果进行比较。并比较FLPS在相同抗原条件下重复使用2次和3次对于CSFV阳性血清检测结果的影响。结果显示,在CSFV E2抗原包被的3种酶标板上,CSFV阳性血清的OD450nm值均存在显著差异(p<0.05),其中以Cosar酶标板OD450nm值最高;在Costar板上,3种封闭液间及FLPS重复使用对于CSFV阳性血清的检测结果无显著差异(p>0.05)。
- 宋艳单晶辉张茂林段铭关振宏李宁卢强涂长春
- 关键词：酶标板
- 一种包被抗原稳定剂的研制及其特性鉴定被引量：2
- 2010年
- 以纯化的狂犬病病毒2μg/mL包被酶标板,将乳糖、麦芽糖、蔗糖和海藻糖分别以5%(W/V)的终浓度加到1%BSA+4%PEG的PBS中,所制备的溶液作为封闭剂,研究其对于37℃贮存板的稳定性,从中选取最佳的封闭剂组合,并研究其对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物在包被状态下的稳定性。结果显示,以1%BSA+4%PEG+5%蔗糖的PBS溶液的封闭效果最佳,该封闭剂对于乙肝表面抗原、猪瘟病毒E2抗原和猪繁殖与呼吸综合征nsp2基因原核表达产物也具有良好的稳定性。
- 张茂林段铭关振宏单晶辉卢强孟锐奇刘红全何秀苗
- 关键词：抗原稳定剂狂犬病病毒乙肝表面抗原猪瘟病毒E2蛋白
- 小鼠原代神经元细胞狂犬病病毒滴度测定被引量：1
- 2011年
- 目的探索利用小鼠原代神经元细胞测定狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的可行性。方法分离培养小鼠大脑皮质原代神经元细胞,接种100小鼠脑内接种半数致死量(MICLD50)的标准攻击强毒(CVS)毒株,通过免疫荧光和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其感染性,并在此基础上在原代神经元细胞上进行了该毒株的细胞半数感染量(CCID50)测定。结果成功制备了小鼠大脑皮质原代神经元细胞;原代神经细胞培养物接种CVS 96h后,用抗微管相关蛋白质(MAP2)抗体和抗RV阳性血清作为一抗并经荧光抗体染色后,在胞体和突起上均有神经元特异性和RV特异性着染;在共聚焦显微镜下,当相同的细胞部位上出现红色和绿色交迭时呈现粉色斑点,免疫荧光证实原代神经细胞可被CVS感染,同时RT-PCR得到1 770 bp左右的目的条带,说明其被CVS感染;该原代细胞上所测定的CVS病毒滴度为104.5CCID50/0.1 mL,而该病毒的原始滴度为104.5MICLD50/0.03 mL。结论小鼠脑原代神经元细胞上测定的CVS株的病毒滴度与通过脑内接种法测定的滴度相同。
- 单晶辉王心蕊关振宏李宁宋艳张茂林
- 关键词：狂犬病病毒
