国家自然科学基金(30470084)
- 作品数：5 被引量：19H指数：4
- 相关作者：彭宜红张浩屠静周琦王波更多>>
- 相关机构：北京大学北京航空航天大学南昌大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 敲减单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)UL30蛋白表达可抑制HSV-2复制被引量：8
- 2007年
- 按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染法将其转染入HEK(human embryonic kidney)293细胞中,用蛋白印迹法检测对HSV-2 UL30蛋白表达的影响,观察受染细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),终点滴定法测定细胞上清液中病毒感染滴度(50%tissue culture infective dose,TCID50).结果表明,针对UL30基因的siRNA能有效抑制UL30蛋白表达,同时显著抑制受染细胞的CPE,降低上清液中病毒感染滴度.提示本研究建立的针对UL30基因特异性siRNA能有效阻断HSV-2在HEK293细胞内的复制,UL30基因是一个潜在的抗HSV-2复制的药物靶标.
- 冯海张浩屠静罗凌琪周琦彭宜红
- 关键词：RNA干扰TCID50
- 细胞ERK信号通路对单纯疱疹病毒Ⅱ型增殖复制的影响被引量：7
- 2007年
- 目的以Raf-MEK-ERK通路关键激酶MEK1(MAPK/extracellular signal-regulated kinase- kinase-1)为研究重点,利用MEK1-siRNA(small interfering RNA for MEK1)阻断宿主Raf-MEK-ERK通路,阐述该通路对病毒复制的作用。方法用HSV-2感染预转染MEK1-siRNA的HEK 293细胞,应用观察细胞病变效应、病毒滴度以及病毒蛋白表达等研究方法,揭示细胞Raf-MEK-ERK通路对HSV-2增殖复制作用的影响。结果MEK1-siRNA在特异性阻断MEK1表达的同时,能明显抑制HSV-2的复制。结论体外实验表明,Raf-MEK-ERK通路在HSV-2增殖复制过程中具有十分重要的作用,MEK1-siRNA具有药物开发的潜能。
- 罗凌琪屠静冯海张浩彭宜红
- 关键词：细胞外信号调节激酶RNA干扰细胞病变效应
- 细胞MEK1/2蛋白及其相关通路在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制中的作用被引量：4
- 2008年
- 基于细胞Raf/MEK/ERK信号通路与病毒复制的关系,应用Western印迹检测p-ERK1/2蛋白的表达、用终点滴定法测定病毒增殖量(TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(CPE)等,揭示单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)复制与ERK通路的关系.结果表明,HSV-2的复制可引起细胞ERK通路的活化;用U0126预先抑制ERK通路的活化,或用特异性siRNA敲减MEK1/2基因的表达可显著地抑制病毒复制.提示ERK信号通路以及MEK1/2蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.该研究对进一步阐明细胞ERK通路各激酶蛋白在病毒复制中的作用机制、寻找抗病毒作用靶标等奠定了良好的基础.
- 屠静张浩周琦王波曹眸黄海彭宜红
- 关键词：ERK信号通路小干扰RNA
- MEK1/2抑制剂U0126抑制肠道病毒71型的复制被引量：4
- 2010年
- 为了揭示肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)的复制与宿主细胞Raf/MEK/ERK信号通路(简称ERK通路)的相互关系,本研究应用临床诊断为手足口病的患儿疱疹液,通过易感细胞分离培养、RT-PCR及序列测定,以及Western印迹技术等方法,成功分离到EV71临床株.进一步用该分离株感染易感细胞,通过观察宿主细胞p-ERK1/2蛋白磷酸化水平、病毒特异性衣壳蛋白VP1水平、病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及感染细胞的CPE等指标,以期揭示ERK通路在EV71复制的作用.结果表明,EV71的复制可引起细胞ERK通路的活化;而用MEK1/2特异性的抑制剂U0126预先抑制ERK通路的活化,可显著地降低受染细胞上清液中的病毒的感染滴度(以TCID50表示)、受染细胞中EV71VP1蛋白水平、受染细胞中EV71核酸水平,以及受染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE).提示ERK信号通路的活化对EV71的复制具有重要的作用.本研究为进一步阐明EV71在宿主细胞内的复制机制、寻找新型抗病毒靶标等研究奠定了良好的基础.
- 王波丁丽新邓娟张浩朱萌易婷刘静徐萍鲁凤民彭宜红
- 关键词：肠道病毒71型细胞外信号调节激酶通路
- 下调细胞P21^(WAF1/CIP1)基因表达可抑制单纯疱疹病毒Ⅱ型复制被引量：6
- 2009年
- 为了揭示细胞P21蛋白在单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virus type2,HSV-2)复制中的作用,通过用HSV-2感染和感染前用特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制P21基因表达,应用Western印迹方法检测宿主细胞和病毒蛋白水平,用终点滴定法测定病毒半数组织培养感染量(50%tissue culture infectious dose,TCID50),以及观察感染细胞的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)等3个方面,揭示细胞P21蛋白水平的变化对病毒复制的影响.结果表明,HSV-2在细胞内复制时可引起P21蛋白水平增高;而用特异性siRNA下调细胞P21基因表达时,可显著地抑制HSV-2gB蛋白水平,减少培养细胞上清液中病毒TCID50.提示P21蛋白对HSV-2的复制具有重要的作用.
- 周琦张浩王波彭宜红屠静朱萌徐萍
- 关键词：P21蛋白小干扰RNA
