湖北省自然科学基金(301132174)
- 作品数：9 被引量：27H指数：2
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- 脂肪干细胞修复辐射诱导的肠血管损伤实验室研究
- 2014年
- 目的观察脂肪干细胞修复辐射诱导的肠血管损伤实验室研究。方法取辐射相关肠血管损伤患者脂肪组织以酶消化法处理后获取ADSCs,免疫荧光标记并体外培养、扩增后,注射至肠血管内,观察60d后肠血管修复情况,并分析体外培养、诱导下免疫荧光、流式细胞仪检测,并予以RT-PCR检测。结果诱导后肠血管特异标记Calponin、MHC、α-SMA,细胞核为红色荧光,细肌丝阳性表达可见绿色荧光。脂肪干细胞诱导后Calponin、MHC、α-SMA阳性表达率分别为39.26±2.54%、45.42±5.12%、48.22±4.48%,均相比诱导前阶段有明显差异(P<0.05)。脂肪干细胞Calponin、MHC、α-SMA、SM-22αm RNA诱导后均发现相应m RNA表达。脂肪干细胞诱导情况下受损肠血管修复70%占比为100%,明显优于无诱导组(P<0.05)。结论脂肪干细胞适当培养、诱导下可促进血管平滑及修复,利于消除血管损伤。
- 熊志袁玉林孔志华朱俊
- 关键词：脂肪干细胞
- 慢性肝病幽门螺杆菌感染患者白细胞介素水平测定的临床研究被引量：2
- 2016年
- 目的探讨慢性肝病幽门螺杆菌(Hp)感染患者白细胞介素-12(IL-12)、IL-18水平测定的临床意义,为临床慢性肝病诊治提供理论指导与依据。方法选择2012年10月-2015年9月于医院接受治疗的慢性乙型肝炎及肝炎肝硬化患者160例为研究对象,其中根据疾病轻重程度可分为CH-Ⅰ组(45例)、CH-Ⅱ组(58例)、CH-Ⅲ组(32例)及肝硬化组(25例),选择同期医院体检的健康人群30名为对照组,应用14 C-尿素呼气试验检测各组幽门螺杆菌(Hp)感染情况,数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析。结果慢性肝病感染Hp患者IL-12、IL-18水平明显高于未感染Hp的患者,且随着患者肝脏炎症的加重其IL-12、IL-18值也逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hp感染与慢性肝病有密切关系,可促进患者肝脏炎症的反应过程;慢性肝病Hp感染的患者其IL-12、IL-18水平可反应肝脏炎症的严重程度。
- 朱俊袁玉林陈敏方文敏潘登饶少锋
- 关键词：慢性肝病幽门螺杆菌
- Cdc2/cdk1和survivin特异性siRNA真核表达载体的设计、构建和鉴定被引量：1
- 2015年
- 目的：构建表达靶向cdc2/cdk mRNA和survivin mRNA的siRNA真核表达质粒。方法：从GenBank中搜索Cdc2/cdk1和survivin基因组标准序列,根椐siRNA设计原理构建siRNA真核表达质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivinshRNA。phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2、pU6-HK-shRNA质粒均含有增强绿色荧光基因作为报告基因和酶切位点,而phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2均含有红色荧光基因作为报告基因和酶切位点。质粒酶切、电泳、测序鉴定;用脂质体转染鼻咽癌CNE2细胞,荧光显微镜下观察、摄片、计数阳性细胞,计算转染效率,激光共聚焦显微镜检测质粒载体绿色和红色荧光蛋白的表达,免疫印迹法检测真核表达质粒对相应蛋白的抑制率。结果：荧光显微镜下计算转染效率显示在转染鼻咽癌细胞CNE2 48h转染率高达45.00%-57.45%;质粒phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1、phU6-survivin-shRNA2和pU6-HK-shRNA酶切后均可见400bp条带,与预期插入的目的基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;在共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达相应荧光;免疫印迹检测phU6-cdc2/cdk1-shRNA1、phU6-cdc2/cdk1-shRNA2、phU6-survivin-shRNA1和phU6-survivin-shRNA2对鼻咽癌CNE2细胞相应蛋白抑制率分别是33.00±1.41、38.31±1.01（survivin）、36.33±1.21和43.26±1.02（cdk1）。结论：本实验构建了靶向Cdc2/cdk1mRNA和survivin mRNA的真核表达质粒。重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞,phU6-cdc2/cdk1-shRNA2和phU6-survivin-shRNA2与phU6-cdc2/cdk1-shRNA1和phU6-survivin-shRNA1相比,转染CNE2 48h后其对相应蛋白的干扰率相对较高。
- 朱俊袁玉林彭涛陈树黄铄李双
- 关键词：RNA干扰SURVIVIN
- ADSCs抑制辐射诱生胸腺瘤的作用分析
- 2015年
- 目的:探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)对辐射诱导形成胸腺瘤的影响。方法:清洁级C57BL/6小鼠160只随机分为4组:假照射组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各40只,末次照射后第1、3、7、14天后分别处死4组小鼠,荧光显微镜下观察ADSCs在胸腺瘤组织中的定位;末次照射第1、7、14、21、28天及6个月后分别处死4组小鼠,石蜡包埋HE染色观察胸腺组织的病理变化,并行免疫组化分析。结果:照射组小鼠胸腺瘤的发生率(75%,12/16)明显高于ADSCs注射组(20%,3/15)(P<0.05)。在X线照射后第7天和6个月后,照射组和照射+ADSCs组胸腺组织中CD31染色阳性的血管管状结构及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数较假照射组和假照射+ADSCs组明显增多,并且照射+ADSCs组小鼠胸腺组织的PCNA阳性细胞数相对于照射组小鼠胸腺组织较低(P<0.05)。结论:本实验成功建立辐射诱发的小鼠胸腺瘤模型。ADSCs具有保护胸腺辐射损伤,抑制辐射诱发胸腺瘤的作用。
- 熊志孔志华朱俊袁玉林王国祥夏干清
- 关键词：脂肪来源干细胞胸腺瘤
- 脂肪来源干细胞对cyclin-D1、c-myc、p53、ATM和γ-H2AX蛋白在辐射诱发胸腺损伤修复中的影响
- 2015年
- 目的:明确脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在辐射诱发的C57小鼠胸腺瘤的形成过程中是否通过增强DNA损伤修复功能进而影响辐射诱导胸腺瘤的形成。方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组8只,仅以假照射;照射组8只,采用深部X射线治疗机照射;照射+ADSCs组8只,收集转染EGFP表达质粒48h后的ADSCs,将ADSCs的浓度调整为2.0×106个/mL,取0.5mL经尾静脉注射入末次照射后第1天的胸腺瘤模型小鼠;假照射+ADSCs组8只,ADSCs的注射方法同照射+ADSCs组。末次照射第7天后分别处死4组小鼠,各组小鼠胸腺组织中的细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、p53、c-myc、毛细血管共济失调突变期(ATM)和γ-H2AX蛋白水平采用Western blot进行检测。结果:照射组小鼠胸腺组织中ATM、γ-H2AX、cyclin-D1和c-myc水平高于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,而p53水平低于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。通过流式细胞术检测,照射组小鼠胸腺G1期细胞的百分比相比于对照组明显降低(P<0.05),而照射+ADSCs组小鼠胸腺G1细胞的百分比较照射组增多。结论:ADSCs可能通过减轻DNA损伤程度,减少p53和c-myc蛋白的表达,使细胞G1期增加,并阻滞在G1期,修复胸腺细胞的DNA,抑制肿瘤的形成。
- 朱俊袁玉林熊志孔志华
- 关键词：脂肪来源干细胞胸腺瘤
- 辐射致鼻咽癌细胞株cdkl和survivin表达与细胞增殖时相转换的关系被引量：4
- 2014年
- 目的：探讨鼻咽癌细胞放疗后肿瘤细胞加速衰老及辐射抗拒机制。方法：采用免疫印迹，流式细胞术，sA-β-gal及H-E染色，BrdU细胞标记及细胞计数的方法，检测鼻咽癌CNE2细胞株5Gy间断照射后，细胞周期时相与cdc2／cdkl和survivin蛋白表达的关系。结果：鼻咽癌细胞株射线5Gy间断照射期间及照射后的2～6d内，细胞BrdU标记率大于90％，SA-β-gal阳性细胞小于3％，流式显示G2／M期细胞比例增多，cdkl和survivin表达无明显变化，PCNA表达稍有增加，此期即加速增殖期；细胞处理后第7天～25天，流式显示G1／S期细胞比例增多，BrdU标记率小于10％，SA-β-gal染色阳性细胞达55％以上，H-E染色可见四倍体细胞，cdkl和survivin表达明显下降，PCNA下调不明显，此期即细胞增殖阻滞期；照射细胞后第26天以后，细胞BrdU标记率恢复大于90％，sA-β-gal阳性细胞小于3％，流式检测G2／M期细胞比例增多，cdkl和survivin表达明显上调，此期即再增殖期，结论：细胞衰老可能是人鼻咽癌细胞放射后的反应，衰老细胞中cdkl和survivin表达上调可能是鼻咽癌衰老细胞再增殖机制，也可能是鼻咽癌局部复发和进展的根源。
- 彭涛袁玉林张岑周绪红
- 关键词：鼻咽癌辐射抗拒
- 人免疫球蛋白联合抗菌药物治疗中晚期肝病感染患者的临床效果研究被引量：17
- 2016年
- 目的 探讨对中晚期肝病并发感染不同Child-Pugh评分的患者实施人免疫球蛋白联合抗菌药物治疗的临床效果,为临床治疗晚期肝病并发感染提供理论指导和依据。方法 选取2013年2月-2015年2月在医院接受治疗的中晚期肝病并发感染患者90例作为研究对象,将其随机分为观察组与对照组,每组各45例;对照组患者仅使用抗菌药物进行治疗,观察组患者在对照组治疗的基础上联合使用人免疫球蛋白实施治疗;根据两组肝硬化患者的肝脏储备功能进行量化评估（Child-Pugh评分）,比较两组患者的临床治疗效果,采用SPSS16.0软件进行统计分析。结果 治疗一周后,两组Child-Pugh评分〈10分患者血清胆红素浓度和凝血酶原时间比较差异不明显;Child-Pugh评分10~15分观察组患者的血清胆红素浓度明显低于对照组,凝血酶原时间明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义;两组Child-Pugh评分〈10分的患者抗感染有效率无明显差异,而10~15分的患者观察组有效率明显高于对照组,差异有统计学意义。结论 Child-Pugh评分10~15分的中晚期肝病患者,应用人免疫球蛋白联合抗菌药物治疗,能明显降低血清胆红素浓度和提高凝血酶原时间,提高抗感染的疗效,值得临床推广使用。
- 陈敏朱俊袁玉林方文敏潘登饶少峰
- 关键词：人免疫球蛋白抗菌药物CHILD-PUGH评分
- 脂肪干细胞的免疫学性质分析被引量：2
- 2014年
- 目的分析脂肪干细胞的免疫学性质分析。方法选取5名符合抽脂要求的健康志愿者,抽取25g脂肪组织并培养,以流式细胞术查看目标细胞分化群表面抗原与人体组织相容性抗原表达特点,并观察淋巴细胞、异体脂肪干细胞共同培养下增殖情况。结果脂肪干细胞表面CA29、CD40、CD90与组织相容性抗原Ⅰ均可阳性表达,CD31、CD34、CD45与组织相容性抗原Ⅱ均阴性表达;对照组平均CPM值为1805±152,研究组平均CPM水平为1811±164,两组平均CPM对比无统计学差异,P>0.05。结论脂肪干细胞无内皮细胞、造血系统污染问题,异体脂肪干细胞并未诱发淋巴细胞增殖,表明脂肪干细胞排斥反应小,可尝试应用于组织工程、细胞治疗工作的主要同种异体细胞应用。
- 孔志华袁玉林熊志朱俊
- 关键词：脂肪干细胞免疫学性质
- ADSCs对辐射诱发C57小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其机制被引量：1
- 2015年
- 目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分别处死4组小鼠,计算小鼠胸腺指数。刀豆素A(ConA)诱导的胸腺淋巴细胞转化率采用MTY法测定,运用流式细胞仪检测胸腺淋巴细胞的细胞周期以及T淋巴细胞亚群的变化。结果:照射+ADSCs组相对于照射组小鼠的胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数显著增高(P<0.05),并且CD4+T淋巴细胞的含量显著增加(P<0.05),CD8+T淋巴细胞明显下降(P<0.05),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P<0.05)。结论:ADSCs可能通过调节小鼠胸腺内细胞水平的变化,保护小鼠胸腺细胞的免疫功能。
- 孔志华李应续熊志朱俊袁玉林
- 关键词：脂肪来源干细胞T淋巴细胞亚群
