宁波市自然科学基金(2009A610145)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
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- 坛紫菜胞质型抗坏血酸过氧化物酶基因的克隆及特征分析被引量：7
- 2010年
- 张晓龙杨锐仪茜茜孙雪吴晓微王亚军
- 关键词：抗坏血酸过氧化物酶坛紫菜RACE基因组步移克隆
- 紫菜共附生真菌次生代谢产物对坛紫菜生长的影响被引量：3
- 2011年
- 采用室内培养法,分别测定了坛紫菜叶状体和丝状体的日生长速率和光合色素质量分数,研究了紫菜共附生真菌——枝孢霉Cladosporiumsp.次生代谢产物的粗提物N5及纯化物DLF3、DLF4对坛紫菜Porphyra haitanensis生长的影响。结果表明:(1)粗提物N5在较低质量浓度时,对坛紫菜丝状体和叶状体的生长均有促进作用。其中,粗提物N5质量浓度由1.0×10-8mg/mL提高至1.0×10-6mg/mL时,丝状体日相对生长速率由1.2%升高到18.8%(p<0.01),丝状体藻胆蛋白的相对合成量由2.36×10-3增加到7.32×10-3;当N5质量浓度为1.0×10-8mg/mL时,叶状体日相对生长速率较对照组增加了2.76%(p<0.05),藻胆蛋白相对合成量较对照组增加了14.16×10-3(p<0.01),但随着N5质量浓度的升高,其促进生长的作用明显降低,当N5质量浓度升高至1.0×10-4mg/mL时表现出抑制作用。(2)当纯化物DLF3和DLF4质量浓度在1.0×10-8～1.0×10-4mg/mL时,其对丝状体生长均表现出完全的抑制作用,且抑制作用随纯化物质量浓度的升高而加强。DLF3和DLF4对叶状体生长速率影响均为极显著(p<0.01),起到类似植物生长激素的促进作用,其促进作用随纯化物质量浓度的升高而减弱,甚至在高质量浓度(1.0×10-4mg/mL)时出现抑制作用。由此认为,粗提物N5和纯化物DLF3、DLF4可能是通过参与坛紫菜的某些代谢过程来影响其生长的。
- 吴小凯朱竹君杨锐孙雪
- 关键词：坛紫菜次生代谢产物
- 坛紫菜hsp70基因克隆与表达被引量：6
- 2012年
- HSP70家族是一类最保守和最重要的热应激蛋白家族,在藻类中编码HSP70家族的基因也是普遍存在的,从原始单细胞藻到多细胞的大型藻,hsp70基因在藻类适应环境的过程中起了重要的作用.为了进一步探讨hsp70基因的生物学作用及其在系统进化中的保守性,研究采用简并PCR,扩增获得了坛紫菜(Porphyra haitanensis)hsp70基因片段,随后利用基因组步移获取了坛紫菜hsp70基因全序列.该基因全长2449个碱基,其中1866bp为编码区域,共编码621个氨基酸,与同属紫菜(P.purpurea)hsp70的氨基酸一致性达90%以上.利用Real-time PCR技术研究热激及恢复过程中坛紫菜hsp70的表达情况,结果表明:坛紫菜hsp70对热激应答极为迅速,35℃热激15 min,hsp70 mRNA的表达就提升了15倍;在恢复培养3 h后坛紫菜hsp70的表达进入第二个高峰,表达量提升了48倍,且在随后的过程中始终高于对照值.在整个热激处理中,坛紫菜HSP70蛋白除了作为胁迫的应激蛋白外,始终作为重要因素参与了防御与损伤修复的过程.
- 刘伟杨锐徐丽宁张晓龙王亚军孙雪
- 关键词：坛紫菜HSP70基因组步移热激
- 坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化
- 2011年
- 坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗透压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中。热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用。构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义。利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序。从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶SmaⅠ和NotⅠ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70。通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功。制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功。
- 仪茜茜杨锐刘伟孙雪赖晓娟
- 关键词：坛紫菜HSP70基因真核表达载体
- 中国沿海浒苔属rbcL和ITS序列比较及系统进化分析被引量：3
- 2010年
- 为阐明中国沿海浒苔的亲缘关系及地理分布特点,采集青岛栈桥、盐城弶港、宁波象山、温州平阳四地浒苔样本,克隆测序得到ITSl、5.8S rDNA和ITS2 3种不同长度序列片段.四个地区的rbcL目的片段,长度均为1 201bp.分析核苷酸差异和遗传距离,采用邻接法建立系统发生树.结果显示,ITS序列进化速率较快,rbcL序列相当保守.ITS区较短,GC含量均在65%以上,5.8S rDNA的CG含量在50%左右,ITS1区的序列差异大于ITS2区.四个地区的浒苔存在一定的地理差异,盐城和青岛的样本间的亲缘关系较近;宁波和温州的样本间的亲缘关系较近.石莼属（Ulva）和浒苔属（Enteromorpha）的物种没有聚成各自独立的分枝,而是相互混合在一起,应是两个亲缘关系相近的属.引起青岛绿潮的海藻很可能是来自盐城海域的Enteromorphalinza或Enteromorpha prolifera.
- 王亚军仪茜茜王钢孙雪杨锐
- 关键词：浒苔属RBCLITS亲缘关系
