广西壮族自治区自然科学基金(0832129)
- 作品数：5 被引量：17H指数：2
- 相关作者：李力王琪张玮吴飞翔蒋胜更多>>
- 相关机构：广西医科大学附属肿瘤医院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区卫生厅重点科研课题更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测变异剪接体被引量：4
- 2009年
- 目的:建立应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术对基因mRNA的各个变异剪接体分别进行定量检测的技术。方法:以对ERCC1的变异剪接体进行检测为例。使用TRIzol裂解新鲜手术切除的卵巢癌组织后提取总RNA,逆转录为cDNA后,PCR扩增ERCC1基因以及beta-actin基因,琼脂糖电泳分离PCR产物,纯化后连接到pMD18-T载体,转化入感受态大肠杆菌,提取并纯化质粒,稀释成不同浓度作为标准品以便制作标准曲线。结果:成功构建了缺失第VⅡI外显子的ERCC1质粒以及beta-actin质粒,设计了两套针针对ERCC1的TaqMan探针和引物,建立了稳定的定量检测ERCC1mRNA变异剪接体表达水平的平台。结论:TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法可以成功地分别对基因的变异剪接定体进行定量检测。
- 蒋胜李力
- 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCRERCC1基因卵巢癌
- ERCC1基因mRNA表达水平在卵巢上皮性癌组织中的意义被引量：11
- 2009年
- 目的:研究切除修复交叉互补基因1(ERCC1)在卵巢上皮性癌组织中的mRNA表达水平与患者对铂类药物化疗反应及生存期的关系,并探讨ERCC1基因缺失第Ⅷ外显子变异剪接体的临床意义。方法:使用TRIZol试剂提取63例卵巢上皮性癌组织总RNA,逆转录为cDNA后,TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术分别检测ERCC1基因及缺失第Ⅷ外显子变异剪接体的mRNA表达水平,并分析其与患者化疗反应和术后生存期的关系。结果:①ER-CC1基因总mRNA和去除变异剪接体后ERCC1全长相对表达量在化疗敏感组的值均低于化疗耐药组,差异有统计学意义(P=0.013;P=0.009)。②总ERCC1mRNA和去除变异剪接体后ERCC1全长相对表达量在低水平表达组比高水平表达组的生存期更长,差异有统计学意义(P=0.012;P=0.008)。结论:卵巢癌组织中ERCC1基因mRNA表达水平能够预测患者的化疗反应性与术后生存期,缺失第Ⅷ外显子变异剪接体与患者的化疗反应和术后生存期没有关系,无临床意义,是无功能的转录产物。
- 蒋胜李力张玮唐兆前王琪姚德生张洁清阳志军
- 关键词：抗肿瘤联合化疗方案逆转录聚合酶链反应选择性剪接
- 卵巢上皮癌铂类耐药与非耐药细胞间核苷酸切除修复基因多态性的检测
- 2011年
- 目的:探讨卵巢上皮癌铂类耐药与非耐药细胞间核苷酸切除修复基因(ERCCl、XPA、XPC、XPD、XPG)多态性遗传的差异表达。方法:应用PCR及测序方法筛查ERCCl、XPA、XPC、XPD、XPG外显子单核苷酸多态性在卵巢癌耐铂类药物的细胞株和敏感细胞株中的分布差异,序列读解采用ChromaS软件,并结合NCBISNP数据库寻找和验证SNP位点。结果:DNA测序分析发现XPG His46His及XPGHis1104Asp两个SNP位点在细胞系中存在分布差异。结论:核苷酸切除修复系统中XPGHis46His及XPG His1104Asp多态表达可能与卵巢癌患者对铂类药物耐药性相关。
- 张玮吴飞翔王琪黎丹戒李力
- 关键词：XPG药物敏感性
- XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨XPG基因表达下调对卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药细胞增殖及顺铂耐药性的影响。方法针对XPGmRNA的不同区域设计不同的小分子干扰RNA（siRNA）片段（共3个，包括siRNA．XPG-733、1279和3227），瞬时转染卵巢癌顺铂耐药细胞系SKOV3／DDP细胞，实时荧光定量PCR技术检测瞬时转染后SKOV3／DDP细胞中XPGmRNA的表达；选择对XPGmRNA表达抑制率最高的siRNA—XPG干扰片段，构建短发夹状RNA（shRNA）-XPG重组表达载体，转染SKOV3／DDP细胞；采用氨基糖甙类抗生素G418筛选、蛋白印迹法鉴定，确认获得XPG基因表达下调的shRNA—XPG．SKOV3／DDP细胞。采用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）比色法检测shRNA—XPG。SKOV3／DDP细胞增殖情况和顺铂耐药性，采用流式细胞仪和高效液相色谱法分别检测其细胞周期比例和细胞内顺铂浓度，转染以内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）siRNA构建的shRNA—GAPDH重组表达载体的SKOV3／DDP细胞为阳性对照，转染以XPG无关序列构建的shRNA—NC重组表达载体的SKOV3／DDP细胞为阴性对照。结果（1）实时荧光定量PCR技术检测显示，siRNA—XPG-733干扰片段转染后SKOV3／DDP细胞中XPGmRNA的表达水平最低，对XPGmRNA表达抑制率最高，达53．8％。构建shRNA—XPG-733重组表达载体，转染SKOV3／DDP细胞，获得shRNA．XPG-733-SKOV3／DDP细胞，该细胞中xPG蛋白表达明显下调。（2）MMT比色法检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的增殖速度明显低于阳性对照和阴性对照（P〈0．05）。流式细胞仪检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的s＋G，／M期细胞比例为34．0％，与阳性对照和阴性对照（分别为58．7％和51．3％）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。MMT比色法检测显示，shRNA—XPG-733-SKOV3／DDP细胞的顺铂半数抑制浓度（ICsc）为（13．79±0．06）g／ml，明显低于阳性对照和阴性对照[分别为（27．84�
- 张玮吴飞翔王琪李力
- 关键词：DNA结合蛋白质类核蛋白质类顺铂肿瘤肿瘤
- XPG遗传多态位点His46His和His1104Asp与卵巢癌患者铂类药物敏感性关系探讨被引量：2
- 2012年
- 目的探讨核苷酸切除修复基因XPG单核苷酸多态性与卵巢癌患者对铂类药物敏感性的关系。方法 2002年6月至2009年6月在广西医科大学附属肿瘤医院以聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA序列测定方法检测接受含铂类药物化疗的102例卵巢上皮细胞癌患者的XPGHis46His及XPGHis1104Asp的多态基因型,并比较不同基因型与化疗敏感性的关系。结果 His1104Asp多态性在卵巢癌铂类药物化疗敏感组中分布与耐药组差异无统计学意义(P>0.05)。而XPGHis46His在化疗敏感组T/T,T/C,C/C的基因型频率明显高于耐药组(P=0.016),与携带XPG46T/T基因型比较,携带至少一个46C等位基因(即T/C和C/C基因型)的卵巢癌患者对铂类药物化疗敏感性增加3.096倍(95%CI1.330～7.208)。COX风险比例回归模型结果显示XPG遗传多态位点His46His和His1104Asp不是卵巢上皮癌患者的独立预后因素(P<0.05)。结论核苷酸切除修复系统中XPGHis46His遗传多态可能与卵巢癌患者对铂类药物敏感性相关。
- 张玮吴飞翔王琪黎丹戒李力
- 关键词：卵巢肿瘤XPG多态位点药物敏感
