国家自然科学基金(31101744)
- 作品数：21 被引量：71H指数：5
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- 双纤维素酶基因在乳酸杆菌中的融合分泌表达被引量：3
- 2014年
- 为提高纤维素的降解效率,将两种不同的纤维素酶基因在乳酸杆菌中融合表达,实现双纤维素酶在乳酸杆菌中的高效表达。根据两纤维素酶的基因序列设计两对引物,并在两基因间引入一段连接肽。通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)分别扩增得到两纤维素酶基因CelL15和CelL73,将其融合后连接到乳酸杆菌分泌性表达载体pMJ67中,构建重组表达质粒pMJ-CelL15-CelL73,电转化入乳酸杆菌Lactobacillus casei,利用红霉素MRS平板筛选阳性克隆,通过PCR验证获得了分泌表达双纤维素酶的重组乳酸杆菌。电泳实验结果表明重组乳酸杆菌成功表达了1个约为83 kD的融合蛋白。平板酶活力检测发现重组乳酸杆菌能明显降解底物中的羧甲基纤维素钠,培养液上清中纤维素酶酶活力可达1.25 U/mL。
- 丁轲罗伟光丁盼盼李旺李元晓余祖华恒子钤贾艳艳程相朝
- 关键词：纤维素酶分泌
- 枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建被引量：2
- 2017年
- 目的:以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为宿主,构建纤维素酶基因整合表达载体,获得能够表达纤维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法:通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)从B.subtilis LN基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段,以质粒pGEM-T为载体,将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt,并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B.subtilis LN基因组中。结果:通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成,并成功整合到野生型B.subtilis LN中,获得重组菌B.subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37℃条件下摇瓶培养,重组菌B.subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B.subtilis LN提高了115%。
- 聂利波王占彬史敦胜宋洋洋李旺
- 关键词：同源重组纤维素酶基因枯草芽孢杆菌
- 饲料中添加乳酸菌对肉鸡免疫器官的影响被引量：6
- 2013年
- 乳酸菌是微生态制剂中的主要菌种,作为饲料添加剂具有促进动物生长、减少动物发病率和死亡率、增加动物抗应激能力等作用。试验采用单因素随机分组设计,将1日龄AA肉仔鸡96只随机分为4组,试验1组为对照组,试验2、3、4组为试验组,每组设3个重复,每个重复8只鸡。每隔10d分别灌服乳酸菌培养液0、200、300、400μL.只-1。对照组和试验组采用完全相同的日粮,自由采食和饮水。饲养至20和40d时分别宰杀。通过对免疫器官胸腺、脾脏和法氏囊重量、尺寸和发育情况判断添加重组乳酸菌对肉仔鸡免疫功能的影响。结果表明,20日龄时试验组免疫器官指标有所增加,但各免疫器官指标组间差异不显著(P>0.05)。而40d时第2组法氏囊重与其他各组间差异显著(P<0.05),第2组法氏囊指数与第3、4组相比差异显著(P<0.05)。第3、4组脾脏直径与第1组间差异显著(P<0.05)。试验结果表明,添加乳酸菌能够促进肉鸡后期的免疫器官发育。
- 李旺刘永磊孙二刚程传红
- 关键词：乳酸菌肉鸡免疫器官
- 添加纤维素酶产生菌对鸡饲料养分消化率的影响被引量：2
- 2013年
- 试验研究枯草芽孢杆菌对肉鸡日粮粗纤维消化率的影响。选用1日龄AA肉仔鸡96只,随机分为4组(对照组和试验1、2、3组),每组3个重复,每个重复8只鸡。对照组每10日灌服乳杆菌培养液400μL,试验组每10日分别口腔灌服乳杆菌和枯草芽孢杆菌菌液200、300、400μL。结果表明,产纤维素酶枯草芽孢杆菌对鸡前期(1～20d)和后期(21～40d)饲料粗纤维的消化率均有显著影响(P<0.05)。试验结果表明,口腔灌服400μL菌液效果最好,产纤维素酶枯草芽孢杆菌既能表达纤维素酶,又对动物有益生菌的作用,所产的纤维素酶特异性地降解纤维素,从而对饲料粗纤维的消化率具有显著提高作用。
- 李旺孙二刚刘永磊程传红
- 关键词：纤维素酶枯草芽孢杆菌纤维素消化率
- 微生物知识在动物营养与饲料科学教学和科研中的应用被引量：1
- 2017年
- 笔者根据多年的教学科研体会,分析了现代动物营养与饲料科学发展的新趋势,动物肠道微生物和饲料生物技术逐渐成了研究热点;阐述了微生物知识和技能在动物营养与饲料领域应用的诸多方面;讨论了微生物与动物营养与饲料科学交叉学科的发展趋势。结合教学科研实践,提出二者交叉研究的重要性和发展前景。
- 李旺
- 关键词：微生物饲料
- 饲料镉污染现状及其对动物危害的研究进展被引量：4
- 2012年
- 重金属镉污染是个世界性的环境污染问题。在我国,镉污染不容小视,已威胁到我国环境和生态健康,其中"土壤(水体)-饲料-动物"是镉污染、蓄积、危害的主线之一。文中就饲料镉污染现状及其对动物的危害进行综述,为我国畜牧业健康发展提供一定参考。
- 周宁李旺俎国何万领
- 关键词：饲料镉污染动物
- 黄曲霉毒素分解酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达与应用
- 2018年
- 本试验旨在研究黄曲霉毒素分解酶(ADTZ)基因在枯草芽孢杆菌中的表达与应用。试验通过构建枯草芽孢杆菌ADTZ基因的整合表达载体,将ADTZ基因整合到野生型枯草芽孢杆菌(B.subtilis LN)中,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步检测ADTZ蛋白的表达情况。将重组枯草芽孢杆菌作为发酵菌种接种到发霉玉米中进行发酵试验,检测发霉玉米样品中黄曲霉毒素B1(AFB1)含量的变化,验证ADTZ基因在枯草芽孢杆菌中的表达效果。结果表明,通过构建整合表达载体成功将ADTZ基因整合到枯草芽孢杆菌基因组中,在SDS-PAGE上检测到重组枯草芽孢杆菌能够分泌表达特异性蛋白条带。经过重组菌发酵的发霉玉米AFB1的含量较未接种和接种野生型枯草芽孢杆菌发酵的发霉玉米AFB1的含量差异显著(P<0.05)。由此可见,ADTZ基因可成功整合到野生型枯草芽孢杆菌中,并进行了胞外分泌表达,表达产物具有生物活性,能有效地降解AFB1。
- 史敦胜聂利波宋洋洋李元晓李旺
- 关键词：基因重组枯草芽孢杆菌发酵
- 一株土壤源高产纤维素酶芽孢杆菌的分离与鉴定被引量：3
- 2013年
- 为了获得产纤维素酶的芽孢杆菌,从河南省不同地方采集玉米地、秸杆垛的土壤样品58份,利用刚果红平板法分离产纤维素酶的芽孢杆菌,采用3,5-二硝基水杨酸法测定纤维素酶活,结合菌落特征、显微形态、生理生化试验和16SrDNA序列进行鉴定。结果表明,从样品中分离出的42株产纤维素酶菌株中筛选出一株产纤维素酶较高的菌株B.LY02,纤维素酶活力可达0.5351U/mL。该菌株呈短杆状,革兰氏染色阳性,能形成芽孢。基于16SrDNA序列同源性比较分析表明该菌株与Bacillus licheniformis strain CICC10095的亲缘关系最近,基因序列的同源性为96.5%,因此鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌。
- 董鹤娟丁轲恒子钤贾艳艳彭春平罗伟光李旺
- 关键词：纤维素酶芽孢杆菌
- 干燥温度和提取方法对蛋白桑 1-Deoxynojirimycin提取量的影响被引量：1
- 2018年
- 为研究不同干燥温度和提取方法对1-脱氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin,DNJ)提取量的影响,收割新鲜的蛋白桑(Morus alba)在不同温度下干燥后,分别用酸提法、水提法、醇提法提取其中的DNJ。提取液用柱前衍生高效液相色谱荧光检测法(HPLC-FLD)测定DNJ含量。测定结果表明,采用盐酸提取法时,蛋白桑最佳干燥温度为90℃,DNJ提取量为3.38mg·g^(-1),显著高于其他温度干燥下的提取量(P<0.05);采用水提取法时,蛋白桑最佳干燥温度为80℃,DNJ提取量为1.91mg·g^(-1),显著高于其他温度干燥下的提取量(P<0.05);采用乙醇提取法时,蛋白桑最佳干燥温度为100℃,DNJ提取量为3.77mg·g^(-1),显著高于其他温度干燥下的提取量(P<0.05);对相同处理的样品,不同提取方法的提取量差异显著(P<0.05),乙醇提取法的DNJ提取量最高,盐酸提取法的DNJ提取量较高,水提取法的DNJ提取量最低。
- 韩蕴琦柴鸿勋马召稳王占彬李旺
- 关键词：干燥温度1-脱氧野尻霉素
- 纤维素复合酶对肉鸡血液生理指标的影响被引量：1
- 2012年
- 试验选用128羽1日龄AA肉鸡,随机分成4组,每组4个重复,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加0.05%、0.1%和0.15%的纤维素复合酶。研究添加不同剂量纤维素复合酶对肉鸡血液生理指标的影响。结果表明:日粮添加纤维素复合酶可提高肉鸡血液红细胞(RBC)数、白细胞(WBC)数、红细胞压积(PCV)、血红蛋白(Hb)含量和平均红细胞血红蛋白(MCH)含量,尤其以0.15%酶添加水平效果最好;对平均红细胞体积(MCV)和平均红细胞血红蛋白质量浓度(MCHC)无显著影响。
- 何万领李晓丽邓雯董淑丽李旺
- 关键词：纤维素复合酶肉鸡血液生理指标
