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紫花苜蓿18S rRNA基因的克隆及内参基因表达稳定性评价被引量：6: 2014年; 本文克隆紫花苜蓿常用内参基因18S r RNA,并筛选出稳定的内参基因,以确保紫花苜蓿基因表达分析结果的精确性和可靠性。从紫花苜蓿中克隆常用内参基因18S r RNA的c DNA全长,在此基础上结合β-actin、EF-1α、UBC2、TUB 4个常用的内参基因,应用实时定量PCR技术对5个候选内参基因在紫花苜蓿不同组织的表达情况进行分析。经Best Keeper和ge Norm软件综合分析,5个候选基因在紫花苜蓿不同组织中的表达稳定性不同,其中18S r RNA和EF-1α最稳定。; 付媛媛穆春生高洪文李俊王学敏; 关键词：RRNA 内参基因实时荧光定量PCR 紫花苜蓿

柠条锦鸡儿CkNCED1基因启动子的克隆及表达分析被引量：10: 2013年; 利用染色体步移(Genome walking)技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCED1基因启动子区连接到pGWB533植物表达载体上,构建Promoter::GUS载体,GUS组织化学染色结果表明,CkNCED1基因在植物的叶、根、茎、花和角果的维管组织中均有表达,且在叶片中表达强度最高。以上研究确定了柠条锦鸡儿CkNCED1基因的表达部位和强度。进一步说明CkNCED1基因在ABA合成调控中发挥重要作用,为深入研究基因功能奠定基础。; 任爱琴易津高洪文李俊王学敏; 关键词：柠条锦鸡儿

东方山羊豆GoGID基因表达载体构建及紫花苜蓿转化被引量：4: 2015年; 根据已经克隆得到的东方山羊豆赤霉素受体(GoGID)基因,扩增编码区cDNA。以pBI121为基础载体,采用酶切连接法,构建植物超表达载体pBI121-GoGID。酶切鉴定表明:目的基因已经正确插入载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl_2冻融法将重组载体转入农杆菌菌株中。以叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织培养法,转化紫花苜蓿(Medicage sativa),得到抗性苗。对载体携带的nptⅡ基因、GUS基因进行PCR检测均成阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。同时对转基因植株进行Southern-blot及RT-PCR检测,并均得到目的条带。本研究为进一步分析GoGID基因对紫花苜蓿生物量影响奠定了基础。; 李俊温红雨高洪文Dzyubenko NikolayChapurin Vladimir王学敏; 关键词：东方山羊豆紫花苜蓿

紫花苜蓿MsWRKY33转录因子的分离及遗传转化研究被引量：10: 2015年; WRKY转录因子是植物特有的转录因子,广泛参与植物对多种逆境胁迫的反应。但是对紫花苜蓿中WRKY转录因子的研究还较少。本研究从紫花苜蓿中克隆了一个WRKY I类转录因子MsWRKY33。该基因CDS全长1536bp,编码512个氨基酸,结构分析显示MsWRKY33包括两个WRKY结构域和一个C2H2锌指结构(C-X4-CX23-H-X-H),表明其属于WRKY I族WRKY转录因子。亚细胞定位预测MsWRKY33蛋白定位在细胞核。MsWRKY33基因受盐、干旱和冷胁迫诱导,暗示基因可能参与了这些逆境胁迫的调控。构建原核表达载体pETMsWRKY33,SDS-PAGE分析表明在大肠杆菌中表达了MsWRKY33蛋白。扩增MsWRKY33编码区cDNA,以pBI121为基础载体,构建植物超表达载体pBI121-MsWRKY33。采用农杆菌介导的愈伤组织培养法转化紫花苜蓿。利用nptⅡ基因引物和载体特异引物检测抗性苗呈阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。qRT-PCR检测发现,MsWRKY33基因在转基因株系中得到增强表达。本研究为进一步探索WRKY转录因子基因在紫花苜蓿抗逆性调控中的作用奠定了基础。; 冯光燕王学敏付媛媛方志红高洪文张新全; 关键词：紫花苜蓿转录因子

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国家自然科学基金(31101755)