您的位置: 专家智库 > >

国家科技重大专项(2008ZX08010-004-006)

作品数:3 被引量:5H指数:1
相关作者:鞠辉明白立景张明军赵为民阮楠更多>>
相关机构:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所吉林大学中国农业大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
相关领域:农业科学更多>>

文献类型

  • 3篇中文期刊文章

领域

  • 3篇农业科学

主题

  • 1篇多顺反子
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇植酸
  • 1篇植酸酶
  • 1篇顺反子
  • 1篇酸酶
  • 1篇黏液
  • 1篇克隆
  • 1篇基因
  • 1篇基因表达
  • 1篇功能分析
  • 1篇核表达
  • 1篇REGULA...
  • 1篇CLONIN...
  • 1篇FUNCTI...
  • 1篇GENE_E...
  • 1篇病毒
  • 1篇病毒基因

机构

  • 3篇中国农业科学...
  • 2篇吉林大学
  • 1篇扬州大学
  • 1篇中国农业大学

作者

  • 3篇白立景
  • 3篇鞠辉明
  • 2篇阮楠
  • 2篇赵为民
  • 2篇张明军
  • 1篇刘宗平
  • 1篇李奎
  • 1篇杨述林
  • 1篇牟玉莲

传媒

  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇畜牧兽医学报
  • 1篇Agricu...

年份

  • 2篇2012
  • 1篇2010
3 条 记 录,以下是 1-3
排序方式:
Cloning and Functional Analysis of the Porcine Growth Hormone Gene Promoter被引量:1
2012年
[Objective] This study aimed to clone the porcine growth hormone gene promoter and determine the core promoter sequences and the cis-acting elements. [Method] Sequence of the 5'flanking region of porcine growth hormone gene was searched out and downloaded from the NCBI website. According to the targeted se- quence, primers were designed and synthesized for the PCR amplification. The 1 882 bp (-1 821 bp-+61 bp) fragment was amplified by PCR. Nine promoter frag- ments with different lengths were obtained by genome-walking deletion method and then cloned into luciferase reporter vectors. Relative transcriptional activities of these 5' terminal-deleted plasmids in pituitary and non-pituitary cells were determined by transient transfection of the rat pituitary adenoma cell (GH3), porcine lilac endotheli- um cell (PIEC) and porcrne Kidney-15 (PK15) with the constructed dual-luciferase vectors. [Result] Result of DNA sequencing showed that the 1 882 bp fragment of GH 5' promoter was successfully cloned. Nine luciferase reporter gene plasmids were constructed. DuaI-Luciferase reporter assay indicated that the promoter inserted into reporter gene vector had very strong cell specificity. [Conclusion] Porcine growth hormone gene specifically expresses in pituitary cells. The minimal promoter of the porcine growth hormone gene is mapped at the region -110 bp-+61 bp. Promoter regions 218 bp--110 bp and -429 bp--218 bp contain positive regulatory elements.
阮楠张明军鞠辉明白立景赵为民
关键词:REGULATION
大肠杆菌植酸酶appA2基因联合人MxA基因真核表达载体的构建及表达研究被引量:3
2010年
本研究旨在探讨通过构建同时表达大肠杆菌植酸酶appA2及人抗黏液病毒基因A(Myxovirus resistance gene,MxA)的真核表达载体,比较双基因表达载体和相应单基因表达载体中外源基因的表达效率;从pcDNA-ap-pA2载体上扩增CMV-appA2-BGHpA片段,通过MluI酶切位点连接到pcDNA-MxA载体中,构建重组载体pcDNA-appA-MxA(下称AMP),分别将pcDNA3.1(+)、pcDNA-MxA、pcDNA-appA2及AMP质粒转染猪PK15细胞,经G418筛选后,取细胞通过实时荧光定量PCR测定细胞内appA2及MxA的表达,同时部分细胞通过Westernblot测定细胞内MxA蛋白表达量,采用改进的钼酸铵显色法测定细胞内植酸酶活性;酶切及测序结果表明成功构建了AMP载体;QRT-PCR结果表明,转AMP细胞组MxA表达水平是转pcDNA-MxA组的1.118倍,转AMP细胞组appA2表达水平是转pcDNA-appA2组的1.134倍,上述各组间差异显著(P<0.05)。灰度分析结果表明,AMP细胞组细胞内MxA表达量是转染pcDNA-MxA细胞组的1.07倍;植酸酶活性测定试验结果表明,转AMP、pcDNA-appA2细胞组及对照组细胞内植酸酶酶活和对照组平均酶活分别为0.294、0.235及0.082FTU·μL-1,2个试验组间差异不显著,试验组和对照组间差异极显著(P<0.01);试验结果表明本研究构建双基因表达载体中外源基因的表达效率比相应单基因表达载体表达效率高,本研究为以后多基因共表达及制备多基因转基因动物奠定了基础。
鞠辉明白立景牟玉莲杨述林刘宗平李奎
关键词:植酸酶真核表达载体多顺反子
猪生长激素启动子的克隆及功能分析被引量:1
2012年
[目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821~+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧光素酶表达载体pGL3-basic上。通过重组质粒瞬时转染大鼠垂体瘤细胞(GH3)、猪髋动脉血管内皮细胞(PIEC)和猪肾细胞(PK15)和转染后细胞荧光素酶活性的测定,检测这些5’末端缺失质粒在垂体及非垂体细胞中的相对转录活性。[结果]成功扩增了猪GH基因5’上游启动区1 882 bp的片段,并构建了9个pGL3-mGH promoter报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测系统证实插入报告基因载体中的启动子具有非常强的细胞特异性。[结论]猪生长激素特异性在垂体细胞中表达,其最小启动子位于-110 bp以内,启动子区-218~-110 bp和-429~-218 bp间存在正向调控元件。
阮楠张明军鞠辉明白立景赵为民
关键词:基因表达
共1页<1>
聚类工具0