国家自然科学基金(30070759)
- 作品数：10 被引量：57H指数：5
- 相关作者：邓廉夫朱雅萍冯伟杨庆铭何川更多>>
- 相关机构：上海市伤骨科研究所上海交通大学医学院附属瑞金医院美国波士顿大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科学技术委员会科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学动力工程及工程热物理更多>>
- 骨髓脂肪细胞生成及其在骨质减少性疾病中的意义被引量：1
- 2002年
- 万超杨庆铭邓廉夫
- 关键词：病理生理学细胞分化
- 转染核结合因子a1/成骨细胞特异性转录因子2基因在兔皮肤成纤维细胞成骨表达中的作用被引量：5
- 2005年
- 目的探讨外源性小鼠核结合因子a1(Cbfa1) /成骨细胞特异性转录因子2(Osf2)基因在兔皮肤成纤维细胞中的瞬时表达对该细胞成骨表型表达的作用。方法在阳离子脂质体介导下,将含外源性小鼠Cbfa1 /Osf2基因的真核表达载体pSG5 Cbfa1 /Osf2导入新西兰兔皮肤成纤维细胞。用RT PCR方法检测Cbfa1、骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原前肽基因表达,以Western Blot方法检测Cbfa1蛋白表达,以对硝基苯二磷酸底物法及放射免疫方法分别检测碱性磷酸酶活性及骨钙素分泌情况,并通过茜素红染色及扫描电子显微镜检测转染细胞形成骨性结节的能力。结果转染pSG5 Cbfa1 /Osf2真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞内可见Cbfa1mRNA及Cbfa1蛋白瞬时表达,骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA及Ⅰ型胶原前肽mRNA大量表达,碱性磷酸酶活性增强,骨钙素大量分泌,细胞表面形成骨性结节。结论转染pSG5 Cbfa1 /Osf2真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞能表达成骨相关基因及蛋白质,并在其表面形成骨性结节。
- 肖德常邓廉夫杨庆铭张伟吕学敏冯伟
- 关键词：CBFA1成骨细胞转染基因转录因子
- 核结合因子a1基因修饰的皮肤成纤维细胞修复骨缺损的实验研究被引量：6
- 2007年
- 目的探讨核结合因子 al(Cbfal)基因修饰的兔皮肤成纤维细胞与煅烧骨构建的移植材料对长骨大段骨缺损的修复作用。方法分离、纯化、培养兔皮肤成纤维细胞(RSF),应用pSG5-cbfal 及 pSG5质粒分别转染 RSF,获得 pSG5-Cbfal/RSF 及 pSG5/RSF,培养生长48 h 后,分别接种于长2 cm、直径4 mm 的圆柱状牛煅烧骨(TBC)上,制成 pSG5-Cbfal/RSF/TBC 及 pSG5/RSF/TBC复合物材料。制备兔桡骨中部长2 cm 的骨缺损模型,随机分组后,植入 pSG5-Cbfal/RSF/TBC 材料作为实验组(Ⅰ组),以 pSGS/RSF/TBC 材料植入组(Ⅱ组)、单纯 TBC 材料植入组(Ⅲ组)和无植入材料的自然修复组(Ⅳ组)作为对照,每组6只(12个桡骨)动物。分别于术后第4周及第12周摄 X 线片检查并最终获取骨折处标本,对植骨处进行三点抗折弯测试、脱钙骨组织切片的 HE 染色和 Masson染色及新生骨小梁图像计量分析。结果Ⅰ组标本骨质生长活跃,有大量新生骨小梁,生物力学性能良好,骨缺损处已完成早期愈合及修复;Ⅱ组、Ⅲ组及Ⅳ组无明显新生骨形成,未显示骨修复现象。结论 Cbfa1 基因修饰的兔皮肤成纤维细胞经与煅烧骨复合植入兔体内后,能完成对大段骨缺损的修复。
- 肖德常邓廉夫杨庆铭谭延斌吕学敏张伟冯伟何亚峰梁静朱雅萍齐进周琦王君
- 关键词：成纤维细胞骨缺损骨修复
- 诱导立体网架上成纤维细胞表达成骨表型及其机制的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨诱导条件下的成纤维细胞在三维结构的聚乙醇酸(PGA)网架上表达成骨表型的可行性,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对成纤维细胞骨形态发生蛋白(BMP)受体表型表达的影响。方法分离、纯化人皮肤成纤维细胞,实验用第2代细胞:(1)种植成纤维细胞于PGA网架上,进行体外旋转培养,并用含TNF-α(50 U/m l)和BMP-2(0.1μg/m l)的条件培养液进行诱导。于1 d,3、6周后利用倒置相差显微镜、扫描电镜、四环素荧光标记、茜素红染色方法观察细胞生长、骨样组织形成和矿化物沉积情况。上清液生化检测分析成骨性标志物分泌情况;(2)接种成纤维细胞于预置玻片或75 cm2培养瓶中,用含TNF-α(50 U/m l)的条件培养液进行一次性或连续性干预,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术,于2、4、6、8 d后分别检测BMPⅠ型受体(BMPR-ⅠA和BMPR-ⅠB)mRNA表达及蛋白形成状况。结果诱导3周后三维网架上的成纤维细胞表达成骨表型,分泌成骨细胞特征性标志物:骨钙素(OCN)和骨特异性碱性磷酸酶(B-AKP);分泌大量细胞外基质形成骨样组织;平面培养发现,TNF-α(50 U/m l)连续干预8 d可增高BMPR-ⅠB的mRNA表达和蛋白合成。结论三维立体网架上的成纤维细胞在诱导条件下能够向成骨型细胞转化,形成骨样组织,有希望作为一种新的成骨型细胞的种子细胞源;TNF-α为BMP-2的靶向作用提供条件,TNF-α和BMP-2联合应用是调节成纤维细胞表型转化的诱导条件之一。
- 何川邓廉夫杨庆铭沈玮冯伟张玥朱雅萍
- 关键词：成纤维细胞肿瘤坏死因子成骨表型
- RCCS中犬成骨细胞-nBGC复合物联合培养的实验研究被引量：3
- 2003年
- 目的探讨联合应用成骨细胞、活性玻璃 /胶原纳米复合材料 (nBGC)和旋转式细胞培养系统 (RCCS)体外构建组织工程化骨的可行性。 方法采用骨片组织培养法 ,分离培养犬皮质骨成骨细胞 ,传代培养至第 2代后 ,利用浸泡接种方法 ,形成成骨细胞 -nBGC支架复合物 ,然后在RCCS中培养。扫描电镜观察和上清液分析了解nBGC支架上成骨细胞生长、胞外基质沉积和成骨表型维持的情况。 结果成骨细胞吸附于nBGC支架表面 ,表面可见颗粒状分泌物和丝状胶原纤维 ,形成三维结构的细胞外基质 ;上清液生化分析显示 ,成骨细胞分泌大量Ⅰ型胶原、骨特异性碱性磷酸酶 (B -AKP)和骨钙素 (OCN) ,且分别在 18、2 4和 30d达分泌高峰。 结论nBGC材料和RCCS可以为成骨细胞提供良好的生物学环境 。
- 何川邓廉夫周来生冯伟万超杨庆铭
- 关键词：成骨细胞骨组织工程
- Cbfa1因子对成纤维细胞中软骨相关基因表达的影响被引量：3
- 2005年
- 目的 研究转录因子Cbfa1在软骨发生中的作用。方法 应用逆转录聚合酶链反应酶技术,直接从E13 5d胎鼠肢芽细胞中克隆出Cbfa1全长cDNA,并将其定向克隆到pcDNA3 1质粒载体中,经酶切鉴定和序列分析证实了克隆的正确性。在构建出Cbfa1真核表达载体后,将其转化到成纤维细胞中,48h后比较转染组和未转染组Sox9、Sox5和Sox6基因的转录表达情况,72h后比较转染组和未转染组中Ⅱ型胶原的表达。结果 Cbfa1在成纤维细胞中的高表达能提高Sox9和Ⅱ型胶原的表达,但Cbfa1在成纤维细胞中的高表达对Sox5和Sox6的表达没有影响。结论 Cbfa1可能参与了软骨细胞的发育调控。
- 张伟朱雅萍王君邓廉夫
- 关键词：CBFA1成纤维细胞相关基因表达肢芽细胞酶切鉴定骨发生
- 诱导成纤维细胞表达核结合因子的研究被引量：17
- 2002年
- 目的 探讨诱导条件下成纤维细胞表达成骨细胞特异性转录子 -核结合因子 (Cbfa1)的可能性及成纤维细胞表达成骨表型的发生机理。 方法 分离、纯化人皮肤成纤维细胞 ,使其生长在分别含一定浓度肿坏死因子 (TNF) α、骨诱导蛋白 (BMP) 2、TNF α加BMP 2的条件培养液中 ,采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学技术 ,分别检测Cbfa1、骨钙素、H ras、BMPⅠ型受体 (BMPR ⅠA)和Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达及Ras、BMPR ⅠA蛋白形成状况。 结果 TNF α可诱导成纤维细胞由表达Ⅰ、Ⅲ型胶原表型向表达Ⅰ型胶原转化 ;促进成纤维细胞Ras的形成 ,在TNF α作用 1、3h和 1周后 ,可使成纤维细胞H rasmRNA的相对表达量分别升高 39 5 %、7 4%和 43 2 % ;TNF α作用 1h后的成纤维细胞可产生BMPR ⅠA。联合应用TNF α与BMP 2可诱导成纤维细胞表达Cbfa1、骨钙素mRNA。 结论 TNF α与BMP 2联合应用 ,可刺激成纤维细胞表型转化 。
- 邓廉夫冯伟张玥朱雅萍
- 关键词：成纤维细胞成骨细胞核结合因子
- 旋转系统下三维培养成纤维细胞-PGA复合物的实验研究被引量：16
- 2003年
- 目的 观察微重力旋转培养系统对细胞种植于支架和细胞 支架复合物体外培养的影响。 方法 分离培养兔皮肤成纤维细胞 ,实验用第 2代细胞。 ( 1)分别用静止接种和动态接种方式 ,以 2× 10 6/cm3 的细胞密度接种于PGA网架 ,静止接种即滴加细胞悬液于PGA网架上 ,动态接种是把细胞悬液与PGA网架置于旋转细胞培养系统旋转接种 ,分别于 2、4、8、12、2 4h消化下网架上细胞后计数 ,通过计算细胞吸附率了解细胞吸附情况 ;( 2 )将相同细胞密度静止接种的细胞—PGA复合物分别置于旋转和静止条件下培养 ,于 1、3、5、7、14、2 1dMTT法检测细胞增殖 ;用倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞生长、基质形成及其细胞与PGA纤维结合状况的变化。 结果 细胞吸附量随时间延长而逐渐升高 ,动态组在接种后 8、12、2 4h细胞吸附率显著高于静止接种组 ,分别为 ( 46 70 %±2 16 %)比 ( 31 5 0 %± 3 5 4%) ;( 5 6 36 %± 3 18%)比 ( 34 2 8%± 3 16 %) ;和 ( 6 6 32 %± 4 6 0 %)比( 37 38%± 4 6 6 %)。在 3周培养中旋转培养组细胞增殖快于静止组 ,而且细胞在网架中分布比静止组均匀 ,并伴有活跃的细胞基质分泌。 结论 旋转培养系统具有促进细胞吸附增殖分化和在支架内均匀分布的特点 。
- 何川邓廉夫朱雅萍
- 关键词：成纤维细胞PGA生物医学工程细胞培养
- 自体成骨细胞—nBGC复合物修复犬胫骨骨缺损被引量：8
- 2003年
- 目的:评价搭载自体骨细胞的纳米仿生材料在体内的组织反应性和骨修复作用。方法:4只犬的双侧胫骨各制作一直径10mm的单侧皮质骨缺损,一侧骨缺损植入复合自体成骨细胞的仿生生物材料作为实验组,另一侧植入自固化磷酸钙(CPC)作为对照组。于术后8周取材,观察各组X线片、组织学、四环素荧光标记变化,比较骨缺损修复情况。结果:X线检查显示nBGC支架与周围骨组织很快融合,界限模糊;而对照组骨缺损界限仍清晰。nBGC支架内大量新骨组织形成,而在CPC植入组新生骨只沉积于植入物的表面,CPC周围有厚纤维组织条带包裹。结论:nBGC支架在体内既能降解又具有生物活性,能融入骨重塑过程,具有良好的组织反应性和骨修复作用,是一种良好的组织工程骨支架材料。
- 何川邓廉夫周来生冯伟朱雅萍杨庆铭
- 关键词：成骨细胞纳米材料骨修复
