国家科技重大专项(2009ZX09503-025)
- 作品数：16 被引量：49H指数：5
- 相关作者：陈代雄方宁赵春华余丽梅章涛更多>>
- 相关机构：遵义医学院附属医院中国医学科学院北京协和医学院中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项贵州省科技计划项目南京市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 恒河猴糖尿病动物模型血清超氧化物歧化酶和丙二醛的检测及意义被引量：1
- 2012年
- 目的对糖尿病恒河猴血清中的超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)进行动态检测,探讨其在在非人灵长类糖尿病并发肾病模型中的应用价值。方法健康恒河猴5只,小剂量30mg/kg多次静脉注射链脲佐菌素(STZ),血糖稳定后观察血清中SOD和MDA的含量。连续观察13个月。结果造模后动物血清中的SOD值降低,在8个月出现显著性差异(P<0.05),11个月出现极显著性差异(P<0.01)。MDA含量持续上升,9个月出现显著性差异(P<0.05),13个月出现极显著性差异(P<0.01)。血糖与SOD呈负相关(F=-0.186,-0.323,P<0.05),血糖与MDA呈正相关(F=0.128,0.087,P<0.05),SOD与MDA无相关关系。结论测定血清SOD,MDA含量可以在一定程度上反应恒河猴糖尿病微血管病变的程度。
- 朱华刘颖秦川
- 关键词：超氧化物歧化酶丙二醛糖尿病恒河猴
- 人羊膜间充质干细胞对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的疗效及免疫调节作用被引量：8
- 2014年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法分离、培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;模型动物随机分为正常对照组、模型组、培养基组、hAMSCs治疗组和泼尼松治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双侧侧脑室移植5×105个hAMSCs;采用Kono评分法动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变以及hAMSCs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球阵列法(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果 hAMSCs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAMSCs移植第3周,大鼠脑和脊髓组织可见较多人细胞核抗原阳性细胞即hAMSCs存活;与模型组和培养基组相比,hAMSCs治疗组外周血Treg、Th2、Tc1、Tc2淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);血浆Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论 hAMSCs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg细胞和下调Th17细胞有关。
- 方宁李丹余丽梅章涛赵春华陈代雄
- 关键词：人羊膜间充质干细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节
- 静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能被引量：3
- 2013年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。
- 方宁王钰莹陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞心肌梗死分化心功能
- 人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞被引量：10
- 2011年
- 背景:羊膜间充质干细胞在体外适当的诱导条件下可分化为肝细胞样细胞,而在受损肝脏原位是否可分化为肝细胞值得探讨。目的:观察人羊膜间充质干细胞在大鼠肝损伤原位植活及分化情况。方法:采用胰酶-胶原酶二酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜间充质干细胞。采用腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠肝损伤模型,随机分为2组,人羊膜间充质干细胞移植组造模后注射L-DMEM悬浮的人羊膜间充质干细胞悬液,对照组注射等量L-DMEM。结果与结论:①FCM分析结果显示,所分离的人羊膜间充质干细胞表达CD29、CD44和CD166;免疫荧光染色显示人羊膜间充质干细胞表达波形蛋白,不表达CK19。②与对照组比较,人羊膜间充质干细胞移植后肝病理无明显差异,均呈急性肝坏死病理改变。③免疫荧光双染色结果显示,人羊膜间充质干细胞移植后1周主要定植于肝小叶且表达CK19,至2周表达CK18,至3周表达Alb。结果表明,人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中能被植活,且可分化为肝细胞,提示人羊膜间充质干细胞移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。
- 宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛刘祖林余丽梅赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞分化肝细胞肝损伤
- 人羊膜间充质干细胞对大鼠1型糖尿病模型的疗效及免疫调节作用被引量：6
- 2014年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞（hAMSCs）对1型糖尿病的疗效及免疫调节作用。方法分离培养hAMSCs；建立大鼠1型糖尿病模型，分为正常组、模型组、培养基组、hAMSCs组和胰岛素组，每组6只。hAMSCs组经舌下静脉注射5x10。个hAMSCs，动态监测血糖水平，检测血浆胰岛素浓度，观察胰腺病理变化和hAMSCs在胰腺中的分布，分析hAMSCs表型和淋巴细胞亚群，测定血浆Thl、Th2型细胞因子。结果与模型组比较，hAMSCs组血糖水平明显下降，血浆胰岛素含量增加，胰腺病损程度减轻：移植后6周，hAMSCs组外周血Th1和Th17细胞百分比下降（均P〈0．05），而Th2细胞和FoxP3＋Treg细胞上调（均P〈0．01）；血浆Th1型细胞因子干扰素-1、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素（IL）-2的浓度下降（均P〈0．01），Th2型细胞因子IL4升高（P〈0．05）；hAMSCs组胰腺组织中未见由hAMSCs分化的胰岛素分泌细胞。结论hAMSCs能明显降低1型糖尿病大鼠血糖和减轻胰岛损伤，其作用机制可能主要与上调FoxP3＋Treg有关。
- 蒲莹峰方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞免疫调节
- 人羊膜间充质干细胞对大鼠胶原性关节炎的疗效及免疫调节作用被引量：7
- 2013年
- 目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠胶原性性关节炎(CIA)的疗效和免疫调节作用。方法从人羊膜分离培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)分析其表型;用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导大鼠CIA模型;动物随机分为正常对照组、CIA模型组、hAMSCs治疗组、培养基对照组和氨甲蝶呤(MTX)治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双踝关节腔注射2×106hAMSCs。观察关节炎指数(AI)、足趾容积、关节影像和病理变化以评价疗效;流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞中淋巴细胞亚群百分比。结果与模型组和培养基组比较,hAMSCs治疗组和MTX治疗组AI和足趾容积均明显下降(P<0.05),踝关节关节骨质破坏和炎症反应减轻;Th1、Th2、Th17、CTL1、CTL2和NKT亚群百分比明显下降,而Foxp3+Treg细胞显著上调(P<0.01)。hAMSCs治疗组和MTX治疗组比较,淋巴细胞亚群的变化相似,但后者Foxp3+Treg细胞上调幅度不及前者(P<0.01)。结论 hAMSCs可能通过调节Foxp3+Treg和Th17细胞发挥对大鼠CIA的治疗作用。
- 肖瑶方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞胶原性关节炎免疫调节
- 人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞被引量：1
- 2012年
- 目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只。造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM。于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达。结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白;2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb。结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。
- 宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛余丽梅赵春华
- 关键词：人羊膜上皮细胞分化肝细胞肝损伤
- 人羊膜间充质干细胞移植治疗帕金森病模型大鼠的疗效评价被引量：4
- 2015年
- 目的观察不同途径移植人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,h AMSCs)对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型大鼠的生物学效应及其在体内的分化。方法采用胰蛋白酶-胶原酶消化法分离hAMSCs,流式细胞术分析表型。40只雌性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、hAMSCs静脉移植组和原位移植组。采用单侧前脑内侧束(MFB)注射6-羟基多巴胺建立PD大鼠模型。通过舌下静脉或于MFB原位移植3×105个hAMSCs。腹腔注射阿朴吗啡诱导旋转观察大鼠的行为变化,免疫荧光染色法检测人细胞核抗原及神经元微管结合蛋白(microtubule-associated protein 2,MAP-2)的表达,免疫组化染色法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达。结果与模型组比较,hAMSCs静脉移植组和原位移植组大鼠旋转次数均明显减少(均P<0.05),前者行为学改善可持续至移植后6 w,后者则至8 w;免疫荧光染色显示,hAMSCs在原位移植区可存活至少12 w,并表达MAP-2;免疫组化染色显示静脉和原位移植hAMSCs均可上调PD模型大鼠黑质TH表达,但后者强于前者。结论 hAMSCs能改善PD模型大鼠的运动行为,原位移植优于静脉移植,其机制可能与上调黑质TH表达有关。hAMSCs可在原位移植部位分化为多巴胺能神经元样细胞。
- 陈勇方宁陈代雄赵春华
- 关键词：人羊膜间充质干细胞帕金森病
- 不同途径移植人羊膜上皮细胞对心肌梗死大鼠心脏的保护作用被引量：1
- 2013年
- 目的比较经舌下静脉和心外膜直视注射移植人羊膜上皮细胞(hAECs)对心肌梗死大鼠的心脏保护作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=12)、hAECs心外膜移植组(n=12)和hAECs静脉移植组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌梗死模型。hAECs经体外分离、纯化、培养和标记后,在心肌梗死后1周,分别经心外膜和舌下静脉注射hAECs,4周后测定心功能,免疫组化法检测Ⅷ因子相关抗原(vWF)的表达,免疫荧光观察移植细胞的定植和存活。结果免疫荧光染色可见两种途径移植组心肌组织中均有DAPI标记细胞存在;免疫组化结果显示,200倍视野下hAECs静脉移植组和hAECs心外膜移植组的vWF染色阳性微血管计数较模型组明显增高[(22.00±2.61)和(19.80±2.32)vs.(9.80±1.17),P<0.01]。与模型组相比,两移植组左心功能显著改善(P<0.05)。结论 hAECs经静脉移植和心外膜移植均可归巢至心肌梗死区,并促进新生血管形成,对梗死大鼠的心脏具有保护作用。
- 王钰莹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜上皮细胞细胞移植心脏保护
- 人羊膜上皮细胞治疗大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的效应及免疫调节作用被引量：6
- 2013年
- 目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧脑室移植5×105个hAECs;采用kono评分动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变,以及hAECs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球芯片捕获技术(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果:hAECs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),神经功能明显改善,体重稳定,脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAECs移植后3周,宿主脑和脊髓组织中均有较多人细胞核抗原阳性细胞即hAECs存活;与对照组相比,hAECs治疗组FoxP3+Treg、Th2、CTL、NKT、B淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hAECs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg和下调Th17细胞有关。
- 李丹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华
- 关键词：人羊膜上皮细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节
