广东省自然科学基金(8151802001000007)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：邱晨李娜任莉莉张婷齐晖更多>>
- 相关机构：暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向小鼠整合素β_1的shRNA表达载体构建及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建小鼠整合素β1的shRNA表达载体,用RNA干扰下调整合素β1基因在小鼠支气管平滑肌细胞中的表达。方法设计并合成靶向小鼠整合素β1基因的shRNA表达载体,转染入哮喘小鼠的支气管平滑肌细胞,检测shRNA表达载体对靶基因的抑制效果。结果 shRNA表达载体能稳定转染小鼠支气管平滑肌细胞,转染后的整合素β1mRNA及蛋白质水平均显著下调。结论成功构建了靶向小鼠整合素β1高效、持久的shRNA表达载体,转染细胞后可下调整合素β1表达,为进一步研究整合素β1在哮喘气道重塑中的作用及其基因治疗奠定了基础。
- 史菲邱晨邱晨
- 关键词：整合素Β1SHRNA表达载体RNA干扰
- 整合素β1基因沉默对支气管哮喘小鼠气道平滑肌功能的影响被引量：3
- 2010年
- 目的 探讨整合素β1基因沉默对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠气道平滑肌细胞（ASMC）增殖和分泌功能的影响.方法 原代培养正常及哮喘模型小鼠ASMC,分别取各自第5代ASMC进行实验,利用RNA干扰（RNAi）技术沉默ASMC的整合素β1基因,RT-PCR技术观察沉默前后ASMC整合素β1 mRNA表达水平变化,蛋白印迹检测沉默前后ASMC整合素β1蛋白含量变化;四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测整合素β1基因沉默前后ASMC细胞增殖变化;流式细胞仪测定整合素β1基因沉默前后ASMC细胞周期分布及细胞凋亡率变化情况;ELISA检测整合素β1 基因沉默前后ASMC分泌的白细胞介素（IL）-6及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）的含量变化.结果 （1）哮喘PBS对照组RT-PCR显示整合素β1 mRNA（0.907±0.041）较正常PBS对照组（0.527±0.027）显著增高（t=24.632,P＜0.05）,哮喘siRNA干预组（0.503±0.034）较哮喘PBS对照组明显减低（t=24.079,P＜0.05）,正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化（t=1.077,P＞0.05）;（2）Western blot检测显示哮喘PBS对照组整合素β1蛋白表达（0.733±0.067）较正常PBS对照组（0.386±0.044）显著增高（t=13.622,P＜0.05）,哮喘siRNA干预组（0.453±0.074）较哮喘PBS对照组显著减低（t=8.880,P＜0.05）,正常siRNA干预组较正常PBS对照组无显著性变化（t=1.908,P＞0.05）;（3）MTT实验显示3～5 d的吸光度（A）值哮喘PBS对照组较同期正常PBS对照组 显著增强（均P＜0.05）,哮喘siRNA干预组的A值较同期哮喘PBS对照组显著降低（均P＜0.05）,正常siRNA干预组与正常PBS对照组差异无统计学意义（均P＞0.05）;（4）哮喘PBS对照组ASMC处于增殖状态的S期＋G2/M期ASMC比例为[（49±4）%],明显高于正常PBS对照组[（34±4）%]（t=8.035,P＜0.05）,哮喘siRNA干预组ASMC的S期＋G2/M期ASMC比例（42±7）%明显低于哮喘PBS对照组（t=2.212,P＜0.05）,正常siRNA干预组�
- 邱晨刁振华齐晖李娜任莉莉张婷
- 关键词：哮喘
