湖北省科技攻关计划(2006AA301C18)
- 作品数：2 被引量：7H指数：2
- 相关作者：闫继锋李文杨鹏伟于运福张金盈更多>>
- 相关机构：河南省胸科医院郑州大学第一附属医院华中科技大学更多>>
- 发文基金：湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨桥蛋白短发卡样RNA质粒载体的构建与筛选被引量：2
- 2010年
- 目的 构建携带骨桥蛋白双链小干扰RNA（OPN-siRNA）的质粒表达载体,筛选出基因沉默效果最明显的短发卡样RNA（shRNA）质粒表达载体.方法 设计并合成2个针对OPN的shRNA寡核苷酸片段（shRNA1,shRNA2）,退火形成双链并分别克隆进入载体pGenesil-1.酶切鉴定后,采用LipofectamineTM2000介导的转染方法将重组的shRNA质粒转入大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,筛选出稳定转染株.采用RT-PCR及Western免疫印迹检测其对OPN表达的抑制效果.结果 shRNA质粒成功转染入VSMC且效率达50%以上.转染含OPN shRN A1的VSMC的OPN mRNA和蛋白的表达分别为0.16±0.04和0.30±0.09,含OPN shRNA2分别为0.23±0.06和0.44±0.06,两组之间及分别与正常细胞组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）.空载体组和阴性对照组与正常细胞组比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 成功构建了靶向OPN基因的shRNA质粒表达载体,其中抑制效果最为明显的shRNA质粒表达载体为shRN A1质粒.
- 孙玉梅郑向阳周颖别爱桂姜凤平闫继锋刘启功
- 关键词：RNA干扰骨桥蛋白质质粒血管平滑肌细胞
- 转导骨桥蛋白短发夹状RNA预防动脉粥样硬化模型兔血管成形后的再狭窄被引量：5
- 2014年
- 背景:血管成形后再狭窄严重限制了经皮冠状动脉介入治疗的应用和远期疗效。平滑肌细胞的表型转变,增殖是血管成形后再狭窄的重要机制。目的:探讨利用球囊在体转导骨桥蛋白短发夹状RNA,通过抑制实验性动脉粥样硬化模型兔损伤血管部位骨桥蛋白的表达,预防血管成形后再狭窄。方法:构建动脉粥样硬化模型兔20只,随机等分成空质粒组和OPN-shRNA质粒组,分别利用球囊在腹主动脉导入OPN-shRNA质粒和空载体。结果与结论:2组兔球囊扩张后血管平滑肌层出现特异性绿色荧光,且随转染后时间的延长荧光强度逐渐降低,与空质粒组相比,OPN-shRNA质粒组兔扩张动脉的管腔面积明显增加,而斑块负荷明显减小。提示在动脉粥样硬化兔模型局部血管利用球囊导管能成功地转导OPN-shRNA质粒,被扩张血管的再狭窄程度减轻,血栓负荷减轻。这对于预防模型兔血管成形后再狭窄的发生具有十分重要的意义。
- 孙玉梅张金盈闫继锋袁斌杨鹏伟李文于运福
- 关键词：骨桥蛋白再狭窄动脉粥样硬化血管成形
