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上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性及单倍型组合研究被引量：37: 2003年; 目的　分析上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体 (killer Ig-like receptors,KIR)基因多态性及单倍型 ,为进一步研究不同人群 KIRs与某些疾病的相关性提供线索。方法　采用序列特异性引物 PCR法对 87名无关汉族健康志愿者进行 KIR基因低分辨率检测和单倍型分析。结果　 (1)共检出Xv、KIR1D在内的 18个 KIRs基因。 3 DL 3、2 DL 4、3 DL 2和 3 DL 1存在于所有个体 ;较常见为 2 DL 3、Z、2 DL 1、X;其次为 2 DS4、1D、2 DL 5、2 DS1、3 DS1、2 DS5;2 DS2、2 DL 2、2 DS3、Xv频率较低。 (2 )共检出 13种单倍型 ,最常见的是单倍型 2。 (3 )共检出 18种基因型 ,以 AJ(2 ,2 )、AF(1,2 )型最常见 ,其次为 AH(5,2 )、AI(1,5)和 AG(1,1)。另外有 5种基因型 FZ1(2 ,9或 6,16)、FZ2 (1,16或 2 ,15)、FZ3 (6,17)、FZ4(4,13 )和FZ5(2 ,6) ,目前在白人中尚未发现。结论　上海地区汉族人群有其独特的 KIRs基因频率。; 张磊Katharine C.HsuXiao-Rong Liu杨珏琴姚芳娟许玲娣Bo Dupont范丽安; 关键词：杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性 KIR 单倍型

人类白细胞抗原-G突变体cDNA克隆及在K562细胞上的表达被引量：1: 2003年; 目的　克隆人类白细胞抗原 G(Humanleukocyteantligen G ,HLA G)突变体cDNA ,并使其在HLA Ⅰ类阴性的K5 6 2细胞上获得稳定表达 ,为研究配受体之间的识别机制奠定基础。方法　用RT PCR方法从人子宫蜕膜组织扩增出HLA GcDNA ,得到全长HLA GPCR产物后 ,用桥式PCR方法进行定点点突变 ,将突变的目的基因亚克隆于逆转录 ,将突变的目的基因亚克隆于逆转录mG pLNCX表达载体 ,采用感染的方法将重组质粒转入K5 6 2细胞 ,最后经G4 18筛选及有限稀释 ,利用单克隆抗体W6 32进行FACS及mRNA检测 ,观察HLA G突变体在靶细胞表面的表达。结果　HLA G突变体分子在经mG pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达。结论　成功构建了mG pLNCX表达载体 ,并使HLA G突变体分子在HLA Ⅰ类阴性的靶细胞K5 6 2细胞上获得稳定表达。; 颜卫华范丽安; 关键词：人类白细胞抗原-G K562细胞 HLA-G 克隆点突变 RT-PCR方法

KIR2DL4在NK-92细胞上的超表达及其功能分析: 2003年; 目的　克隆KIR2DL4cDNA ,并使其在NK 92细胞上获得稳定表达 ,分析KIR2DL4分子对NK 92细胞功能的调节作用。方法　采用RT PCR方法 ,从人蜕膜单个核细胞扩增出KIR2DL4cDNA ,将目的基因亚克隆于逆转录病毒表达载体构建成KIR2DL4 pLNCX表达载体 ,将重组质粒转入NK 92细胞 ,利用单克隆抗体 # 33进行FACS检测 ,观察KIR2DL4分子在靶细胞表面的表达。ELISA检测KIR2DL4对IFN γ分泌的影响 ,同时根据LDH的释放实验 ,分析KIR2DL4分子对NK 92细胞毒功能的调节。结果　KIR2DL4分子在经KIR2DL4 pLNCX转染的靶细胞表面获得稳定高表达 ,且不影响其他受体在NK 92细胞上的表达水平。KIR2DL4分子能够部分限制NK 92细胞对HLA G阳性靶细胞的杀伤作用 ,交联KIR2DL4分子能够诱导IFN γ的分泌。结论　成功构建了KIR2DL4 pLNCX逆转录病毒表达载体 ,并使KIR2DL4分子在NK 92细胞上获得功能性的高表达。; 颜卫华范丽安; 关键词：NK-92细胞自然杀伤细胞免疫调节

HLA-E的表达对RSA及PIH患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响被引量：1: 2003年; 探索HLA-E分子的表达对习惯性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)及妊高症(pregnancy-induced hypertension,PIH)患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响。通过固相抗体法体外分离并扩增外周γδT血细胞作为效应细胞,以HLA-E转染的LcL721.221细胞(.221E)及滋养层细胞JAR作为靶细胞,采用4 h乳酸脱氢酶(LDH)释放试验观察NK细胞对靶细胞的细胞毒效应。结果显示,来自RSA、PIH及正常对照组的γδ细胞均不能有效杀伤HLA-E转染的.221E细胞及JAR细胞,但未经HLA-E转染的LcL721.221细胞则被溶解;抗HLA-E单抗3D12及抗CD94单抗HP-3B1的阻断可以分别部分恢复效应细胞对靶细胞LcL721.221E的杀伤,但对JAR细胞没有影响;与正常对照组相比,RSA及PIH患者外周血γδT细胞对.221、.221E及JAR细胞的细胞毒活性没有显著性差异(P>0.05)。这说明HLA-E分子的体外表达可以保护靶细胞防止γδT细胞的杀伤,该保护机制主要是通过γδT细胞受体CD94/NKG2对靶细胞表面HLA-E分子的识别来实现的;滋养层细胞对γδT细胞杀伤的抵抗可能存在MHC I类非依赖的机制。; 赵亮范丽安许玲娣; 关键词：HLA-E PIH ΓΔT 细胞毒

HLA-G α1结构域Met^(76)和Gln^(79)在KIR2DL4特异性识别中的作用研究被引量：2: 2006年; 目的探讨HLA-Gα1结构域中特异的Met^(76)和Gln^(79)两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用。方法采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgG Fc段的可溶性融合蛋白；利用“桥式”PCR和“点突变”方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met^(76)和Gln^(79)的密码子突变为Ala^(76,79)(HLA-mG),通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAI分子阴性的K562细胞上表达。流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met^(76)、Gln^(79)→Ala^(76,79)HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Mel^(76)、Gln^(79)残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用。结果Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白。FACS结果表明,野生型HLA-G及Met^(76)、Gln^(79)→Ala^(76,79)HLA-G突变体在K562细胞上高表达。Met^(76)、Gln^(79)突变为Ala^(76,79)后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别。结论HLA-Gα1结构域中Met^(76)和Gln^(79)可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点。; 颜卫华林爱芬范丽安; 关键词：HLA-G

NK细胞中的信号传导: 2005年; NK细胞的免疫应答是由细胞表面受体分子介导的激活性信号和抑制性信号调控的。抑制性受体胞浆区内免疫受体酪氨酸抑制基序 (ITIM)的磷酸化募集酪氨酸或脂类磷酸酶 ,调控细胞内经Syk、ZAP70或PI 3激酶途径激活的信号分子。最近对一些基因缺失动物如Syk和ZAP70缺失小鼠的研究表明NK细胞拥有广泛及强大的受体系统来保证其正常发育和发挥效应。本文拟对NK细胞信号传导研究的新进展作一综述。; 池永斌范丽安; 关键词：NK细胞信号传导

KIR2DL4-IgFc融合蛋白基因真核细胞表达载体的克隆及鉴定分析被引量：4: 2002年; 目的构建人KIR2DL4-IgFc段融合蛋白基因真核细胞表达载体。方法用RT-PCR从孕妇蜕膜组织单个核细胞的总mRNA中逆转录扩增KIR2DL4胞外段cDNA,经Nhe　I和Bam　HI双酶切后,定向插入真核细胞表达载体CD51negl中,然后经酶切和测序鉴定。结果限制性内切酶酶切和序列分析表明已成功构建CD51negl-KIR2DL4载体。结论本研究成功构建KIR2DL4-IgFc融合蛋白真核细胞表达载体,为研究KIR2DL4与其配体之间的关系奠定了基础。; 颜卫华范丽安等; 关键词：KIR 融合蛋白基因克隆真核细胞表达载体

HLA-E与原因不明习惯性流产的关联研究被引量：11: 2001年; 目的 :探索HLA E与原因不明习惯性流产的发生是否存在关联。方法 :采用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术 ,对上海地区 5 3例原因不明习惯性流产病人和 15 6例正常对照进行了HLA E等位基因检测。结果 :在病人和对照组中HLA E 0 10 1均是最常见的等位基因 ,其基因频率分别为 5 0 %和 43.0 9% ,其次是E 0 10 32分别为 2 9.2 5 %和 33 .12 %。E 0 10 31则分别占 2 0 .75 %和 2 3.79% ,HLA E 0 10 2和E 0 10 4在两组标本中均未检出。检出的 3个等位基因在两组之间比较均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :HLA E等位基因多态性与原因不明习惯性流产的发生可能没有直接关联。; 赵亮范丽安杨珏琴姚芳娟; 关键词：HLA-E 习惯性流产基因多态性

HLA-E cDNA克隆及在LcL721.221细胞的表达被引量：2: 2001年; 目的克隆 HL A- E c DNA,并使其在 HL A 类阴性的靶细胞 L c L72 1.2 2 1细胞上获得稳定表达。方法用 RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞扩增出 HL A - E c DNA ,并通过内核糖体进入位点 (IRES)将目的基因亚克隆于已经载有 HL A-A2的逆转录病毒表达载体 p GCEN上 ,构建成 HL A - A 2 / E多顺反子表达载体 (p G/ A2 E) ,采用感染的方法将重组质粒转入L c L 72 1.2 2 1细胞 ,最后经 G418筛选及有限稀释 ,利用抗 HL A- E特异的单克隆抗体 3D12进行 FACS检测 ,以观察 HL A - E分子在靶细胞表面的表达情况。结果 HL A- E分子在经 p G/ A2 E转染的靶细胞表面获得明显的表达 (88.79% ) ,且显著高于表达 HL A- E的对照细胞株 JAR(2 6 .2 1% ) ,而经 p G/ A2载体转染的靶细胞则未获得表达。结论成功构建了 p G/ A2 E多顺反子表达载体 ,并使 HL A- E分子在 HL A 类阴性的 L c L72 1.2 2; 赵亮范丽安; 关键词：HLA-E CDNA 克隆

NK细胞受体KIR2DL4的结构与功能被引量：3: 2003年; KIR2DL4分子是NK细胞受体(NKR)的一种,属于免疫球蛋白样(IgSF)受体家族成员,主要分布在自然杀伤(Natural killer,NK)细胞上。KIR2DL4是HLA-G分子的特异性受体,结构上具备激活性和抑制性受体的双重特点,能够通过不同途径影响NK细胞的活性,具有重要的免疫调节功能。; 颜卫华; 关键词：NK细胞受体 HLA-G

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国家自然科学基金(30070784)

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