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国家自然科学基金(30070786)

作品数：28 被引量：65H指数：4
相关作者：王泽华李敏蔡俐琼卢实王晓翊更多>>
相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属协和医院河北省人民医院更多>>
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文献类型

  • 28篇中文期刊文章

领域

  • 28篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 19篇卵巢
  • 18篇基因
  • 16篇耐药
  • 13篇卵巢癌
  • 12篇细胞
  • 8篇多药
  • 8篇多药耐药
  • 6篇上皮
  • 6篇上皮性
  • 6篇启动子
  • 6篇肿瘤
  • 6篇耐药细胞
  • 5篇凋亡
  • 5篇顺铂
  • 5篇脱氨酶
  • 5篇转移酶
  • 5篇细胞株
  • 5篇甲基化
  • 5篇胞嘧啶
  • 5篇胞嘧啶脱氨酶

机构

  • 23篇华中科技大学
  • 2篇华中科技大学...
  • 1篇山西医科大学...
  • 1篇重庆医科大学...
  • 1篇河北省人民医...

作者

  • 25篇王泽华
  • 11篇李敏
  • 10篇蔡俐琼
  • 8篇卢实
  • 6篇王晓翊
  • 5篇于利利
  • 4篇董卫红
  • 3篇王瀚
  • 3篇肖蓝
  • 3篇汪宏波
  • 3篇李晓艳
  • 2篇蔡春芳
  • 2篇杨守华
  • 2篇贺小红
  • 2篇黄在菊
  • 2篇王志华
  • 1篇蔡惠兰
  • 1篇邱文红
  • 1篇颉彦华
  • 1篇吴素慧

传媒

  • 6篇中华妇产科杂...
  • 4篇华中科技大学...
  • 3篇现代妇产科进...
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  • 1篇肿瘤
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  • 1篇Journa...

年份

  • 1篇2009
  • 3篇2008
  • 6篇2007
  • 7篇2006
  • 4篇2005
  • 2篇2004
  • 3篇2003
  • 2篇2002
共 28 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
mdr1启动子调控双自杀基因对卵巢癌SKOV3耐药细胞的靶向杀伤作用
2007年
目的观察多药耐药基因1(mdr1)启动子调控腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CD∷UPP)融合基因系统对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞的靶向杀伤作用。方法2004年10月至2005年5月于华中科技大学附属协和医院,将重组腺病毒(Admdr1-CD∷UPP)转染卵巢癌紫杉醇耐药细胞(SKOV3/Taxol)及非耐药细胞(SKOV3),荧光显微镜下观察转染效率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测目的基因CD∷UPP的表达,并给予不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-FC),用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测二组的细胞存活率及旁观者效应。结果重组腺病毒对SKOV3/Taxol的转染率随腺病毒滴度的递增而增加,感染复数(MOI)为50时,感染率约100%;CD∷UPP基因仅在SKOV3/Taxol中稳定表达;5-FC对耐药细胞转基因组的杀伤作用显著高于非耐药细胞转基因组,前者表现出明显的旁观者效应。结论mdr1启动子调控的CD∷UPP融合自杀基因系统对人卵巢癌紫杉醇耐药细胞有靶向杀伤作用。
卢实王晓翊肖蓝蔡俐琼王泽华
关键词：胞嘧啶脱氨酶卵巢癌
卵巢上皮性癌组织中p16INK4A基因表达缺陷的意义及其与甲基化的关系被引量：8
2006年
目的研究抑癌基因p16INK4A在卵巢上皮性癌(卵巢癌)组织及细胞系中的表达变化,分析其表达变化与甲基化的关系。方法选取7种卵巢癌细胞系、18份卵巢癌组织和10份正常卵巢组织为研究对象。采用甲基化特异性PCR方法检测p16INK4A基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16INK4A基因的mRNA表达;蛋白印迹(western blot)法检测P16INK4A蛋白的表达。5-杂氮-2′-脱氧胞苷对p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞进行去甲基化处理,再次进行p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达的检测,以及p16INK4A基因甲基化的分析。检测5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理前后卵巢癌细胞的生长情况;并将处理前后的细胞接种于裸鼠,观测肿瘤的体积、重量。结果3种卵巢癌细胞系(Anglne、SW626和OVCAR3细胞)、6份卵巢癌组织中存在p16INK4A基因甲基化,卵巢癌细胞和卵巢癌组织中的甲基化率分别为3/7和33%(6/18)。卵巢癌细胞系、卵巢癌组织和正常卵巢组织中,p16INK4A基因的mRNA相对含量的平均值分别为0·34±0·11、0·81±0·13、1·52±0·12,蛋白相对含量的平均值分别为0·56±0·14、1·32±0·12、2·09±0·11,卵巢癌细胞系、卵巢癌组织分别与正常卵巢组织相比,差异均有统计学意义(P<0·05)。有甲基化表现的卵巢癌细胞和组织中p16INK4A基因的mRNA和蛋白表达均下降。5-杂氮-2′-脱氧胞苷处理能使p16INK4A基因甲基化的卵巢癌细胞中的p16INK4A基因的mRNA和蛋白重新表达或表达增高。与去甲基化处理前比较,去甲基化处理后Anglne、SW626和OVCAR3细胞的生长速度均减慢;接种去甲基化处理的OVCAR3细胞的裸鼠中,肿瘤体积和重量明显减小,分别为(0·243±0·022)cm3、(0·035±0·004)g。结论p16INK4A基因的表达下降或缺失在卵巢癌的发生中起重要作用,DNA甲基化是其表达缺陷的原因,去甲基化处理可以恢复p16INK4A基因的表达并抑制卵巢癌细胞的增殖。
李敏黄在菊董卫红李晓艳王晓翊贺晓红王瀚王泽华
关键词：蛋白质P16基因P16脱氧胞苷
mdr1启动子调控CD∷UPP基因对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的杀伤作用
2007年
目的:探讨腺病毒介导的mdr1启动子调控胞嘧啶脱氨酶∷尿嘧啶磷酸核糖转移酶(CD∷UPP)融合基因联合5-氟胞嘧啶(5-FC)对紫杉醇耐药卵巢癌细胞的特异性杀伤作用。方法:扩增、纯化含有mdr1-CD∷UPP基因的重组腺病毒,转染人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株A2780/Taxol和亲本细胞株A2780,RT-PCR检测mdr1和CD∷UPP基因的表达水平;之后加入5-FC,MTT法检测细胞抑制情况及旁观者效应,并观察腺病毒转染后裸鼠移植瘤的生长情况。结果:mdr1和CD∷UPP基因在A2780/Taxol细胞中可稳定表达,转染后A2780/Taxol组的细胞生长明显低于A2780组;转基因的A2780/Taxol细胞联合5-FC后可通过旁观者效应杀伤周围未转基因的耐药细胞;耐药组移植瘤生长明显受到抑制,肿瘤体积为(569.10±187.93)mm3,对照组肿瘤体积为(2111.98±230.82)mm3,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:mdr1启动子可调控CD∷UPP基因特异性表达并特异性杀伤紫杉醇耐药卵巢癌细胞。
卢实蔡俐琼王晓翊王泽华
关键词：胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶
Expression of cyclooxygenase-2 mRNA in drug-sensitive cell and drug-resistant strains of ovarian cancer cell lines
2006年
Objective: To investigate the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) mRNA in drug-sensitive cell and drug-resistant clones of ovarian cancer cell lines. Methods: RT-PCR and immunocytochemistry were used to investigate the expression of cyclooxygenase-2 in 3 clones drug-sensitive and 5 clones drug-resistant ovarian cancer cell. Results: Strong COX-2 mRNA expressions were detected in 3 clones of drug-sensitive cell and weak expressions were detected in 5 clones of drug-resistant cell. The protein expression of COX-2 in drug-sensitive cell was strongly positive reaction in immunocytochemistry stain and there was a weak positive reaction in 5 clones of drug-resistant cell. Conclusion: The expression of COX-2 mRNA in drug-sensitive cell strains is much higher than that in drug-resistant strains of ovarian cancer cell lines, providing a basis of the chemoprevention for ovarian cancer.
Xiaoyan Li Zehua Wang
关键词：环氧合酶-2MRNA
凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达
2007年
目的探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制。方法采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平。结果①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder)。②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P<0.05)。③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780。在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780。结论顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因。
于利利王泽华
关键词：卵巢癌多药耐药基因BCL-2顺铂
凋亡程度对客观诊断卵巢癌细胞耐药性价值的研究(英文)被引量：3
2005年
目的寻找一种能够全面、客观地反映卵巢癌细胞耐药程度变化的指标。方法采用人类上皮性卵巢癌细胞株A2780和由它诱导的耐顺铂细胞株AD4,在四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazoliumbromide,MTT)法测定耐药倍数的基础上,以逆转录聚合酶链反应(ReverseTranscriptionPolyrmeraseChainReaction,RT-PCR)检测耐药基因mdrl、TopoⅡα和GSTπ的表达情况,并以G3PDH作内参,进行半定量分析;同时进行DNA梯度电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡情况以反映耐药程度的变化,并比较几种方法用于检测耐药的优劣。结果经MTT测定卵巢癌敏感细胞株A2780的IC50为19.2,耐药细胞AD4的IC50为66μg/ml,耐药倍数为3.4。RT-PCR检测A2780和AD4中mdrl的表达都非常低,与G3PDH的比值分别为0.09±0.03及O.10±O.02,且在敏感及耐药细胞株中的表达差异无显著性;TopoⅡα在敏感细胞中的表达为2.60±0.12,耐药细胞为O.11±O.03,两组比较差异有显著性;而GSTπ则相反,在敏感细胞中的表达低于耐药细胞,比值分别为0.11±0.03和3.13±0.14,差异也有显著性,证实了卵巢癌对顺铂耐药主要是通过TopoⅡα和GSTπ等途径,而非mdrl途径。但在所取时间点(6h、12h、24h)内各基因表达未发现明显差异。可见RT-PCR虽可特异性检测几种耐药基因的表达,但由于耐药机制的多样性,检测往往不够全面,同时受细胞增殖周期的限制,此方法不能在短时间内反映耐药程度的变化;用DNA梯度电泳方法检测凋亡,在顺铂作用A2780及AD424h、48h后均有180-200bp整数倍的均匀梯度产生,此方法虽对凋亡的检测较具特异性,但只能检测晚期凋亡且只能做定性分析;流式细胞仪检测凋亡在用药后几小时即可发现各实验组耐药性的差异,实现了对耐药进行早期、定量检测的目标;并且通过检测凋亡反映耐药程度的变化不受耐药机制的限制,使结果较为全面、客观。结论以流式细胞仪�
董卫红颉彦华王泽华
关键词：细胞凋亡卵巢癌肿瘤细胞耐药性
上皮性卵巢癌中p16INK4A表达缺陷与甲基化的关系(英文)
2006年
目的研究抑癌基因p16INK4A在卵巢癌中的表达变化,分析这种差异表达与甲基化的关系。方法逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测7种卵巢癌细胞系、18例卵巢癌组织和10例正常卵巢组织中p16INK4A基因的表达, Western Blot对p16INK4A蛋白进行定量检测,分析蛋白水平上的P16INK4A表达的变化,并与正常卵巢组织中的p16INK4A表达情况进行对照。同时用甲基化特异性的PCR技术(MSP)对细胞系和组织的p16INK4A DNA进行甲基化分析。5-脱氧杂氮胞苷对细胞进行脱甲基化处理后检测细胞中p16INK4A基因的表达;体外体内检测细胞增殖变化。结果卵巢癌细胞系和卵巢癌组织中p16INK4A表达下降或缺失,与正常卵巢组织中的p16INK4A表达相比,差异具有显著意义(P <0．05)。蛋白的表达检测也得到相同的结果。MSP检测发现3种卵巢癌细胞株、6例卵巢癌组织p16INK4A第1外显子甲基化表现,细胞和组织中的甲基化率分别为42．86％和33．33％,甲基化者p16INK4A表达均下降。5-脱氧杂氮胞苷处理能使p16INK4A基因重表达,细胞增殖减慢,裸鼠荷瘤体积和重量明显下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因,它的表达缺失或下降在卵巢癌的发生中起重要作用,外显子甲基化是导致这种表达的主要原因,脱甲基化处理可以抑制细胞的增殖。
李敏董卫红李晓艳王泽华
关键词：甲基化基因表达肿瘤抑制基因卵巢癌
谷胱甘肽S-转移酶P1启动子调控胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因对卵巢癌顺铂耐药细胞的体内杀伤作用被引量：2
2004年
汪宏波蔡俐琼李敏卢实王泽华
关键词：卵巢癌顺铂耐药细胞胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶杀伤作用
谷胱甘肽-S-转移酶P1启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用被引量：1
2004年
目的　观察谷胱甘肽 S 转移酶P1(GSTP1)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶和尿嘧啶磷酸核糖转移酶融合基因 (CD UPP ,即自杀基因 )表达的腺病毒载体 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞的体外杀伤作用。方法　采用细菌内同源重组法构建腺病毒载体 ,设立卵巢癌顺铂敏感细胞株A2 780和以其诱导的耐药细胞株A2 780 /DDP ,在体外用重组腺病毒转染两组细胞并联合应用前药 5 氟胞嘧啶 (5 FC) ,观察两组卵巢癌细胞对 5 FC的敏感性。将CD UPP阳性和CK UPP阴性的A2 780 /DDP细胞按不同比例混合后给予 5 FC ,观察 5 FC对混合细胞的杀伤作用。结果　当重组腺病毒滴度为 10 0感染复数(MOI)、5 FC浓度为 2 5 0 μg/ml时 ,对顺铂耐药的A2 780 /DDP细胞的存活率为 (3 6± 1 0 ) % ,对顺铂敏感的A2 780细胞的存活率为 (76 5± 2 8) % ,两者比较 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。此外 ,2 0 %CD UPP阳性A2 780 /DDP细胞 ,即可引起 80 3%的混合细胞死亡 ,CD UPP / 5 FC系统表现出明显的旁观者效应。结论　由腺病毒介导的含有GSTP1调控的CD UPP/ 5 FC系统 ,对卵巢癌顺铂耐药细胞具有特异性杀伤作用 ,为临床上克服卵巢癌化疗耐药 ,提供了一条安全、高效的治疗途径。
蔡俐琼李敏卢实汪宏波王泽华
关键词：胞嘧啶脱氨酶转移酶融合基因卵巢癌顺铂耐药细胞体外杀伤作用
人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系被引量：1
2006年
目的研究抑癌基因p16I NK4A在宫颈癌发生中的表达变化,分析这种差异表达与甲基化的关系。方法逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变(CI N)组织(CI NⅠ12例、CI NⅡ16例、CI NⅢ20例)中p16I NK4A基因的表达。Western Blot分析P16I NK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术(MSP)对p16I NK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果70%(21/30)宫颈癌组织中p16I NK4A表达下降或缺失,与正常宫颈组织、CI NⅠ和CI NⅡ中的p16I NK4A表达相比,差异具有统计学意义(P<0.05),与CI NⅢ相比差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MSP检测发现宫颈癌组织中有9例p16I NK4A外显子甲基化,甲基化率为30%,其中8例年龄小于40岁,提示甲基化易于出现在年轻患者。而CI N组织中仅CI NⅢ发现1例甲基化,说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16I NK4A表达的关系,发现42.86%(9/21)的宫颈癌组织中p16I NK4A表达下降与甲基化有关,甲基化的宫颈癌组织中p16I NK4A表达均下降。结论p16I NK4A作为一种抑癌基因,它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用,外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。
李敏吴素慧贺小红王瀚李晓艳董卫红王泽华
关键词：P16INK4A宫颈癌甲基化
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