国家自然科学基金(39970929)
- 作品数：10 被引量：145H指数：7
- 相关作者：王海燕李惊子梁秀彬张宏余凌更多>>
- 相关机构：北京大学第一医院南京中医药大学北京中医药大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 采用基因表达谱芯片技术筛选新基因AngRem104的功能相关基因被引量：5
- 2002年
- 目的 采用基因芯片技术来筛选新基因AngRem104的功能相关基因,为进一步的基因功能研究提供线索。方法 建立新基因AngRem104的正义和反义表达的系膜细胞模型,应用含有4000个人类基因的cDNA表达谱芯片,对过量表达AngRem104基因和抑制表达AngRem104基因的人肾小球系膜细胞RNA表达进行检测。部分基因的差异表达由RT-PCR方法来验证。结果 筛选出的差异表达基因共96个,其中94个基因上调表达,2个基因下调表达。差异表达的基因涉及到细胞外基质和受体蛋白、细胞信号传导相关基因、DNA结合及转录相关蛋白、免疫相关蛋白、细胞骨架和动力蛋白和细胞合成及代谢相关蛋白等。特别是纤连蛋白(FN)及整合素β1(integrin β1)表达明显上调。RT-PCR的方法也证实了AngRem104与FN表达的相关性。结论 应用作为研究基因功能有效手段的基因表达谱芯片技术来筛选新基因AngRem104的功能相关基因,发现AngRem104与FN的表达有关,为其功能研究提供了重要线索。
- 梁秀彬张宏王海燕
- 关键词：纤连蛋白基因表达谱芯片相关基因芯片筛选
- AngRem104基因与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及在COS-1细胞中的表达定位被引量：6
- 2003年
- 构建以绿色荧光蛋白 (Greenfluorescenceprotein ,GFP)为报告基因的重组表达质粒AngRem10 4 pEGFP N1,利用脂质体转染体外培养的COS 1细胞 ,在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察AngRem10 4 EGFP融合蛋白在细胞中的分布和定位 ,用RT PCR和Westernblot方法验证其mRNA和蛋白的表达。结果表明在空载体pEGFP N1转染组中 ,COS 1细胞内绿色荧光呈弥散分布 ;重组质粒AngRem10 4 pEGFP N1转染组中 ,绿色荧光集中在细胞核中 ,随着表达量的增高 ,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状、颗粒状。RT PCR的结果表明AngRem10 4在重组质粒转染组中的表达明显高于空载体和空白对照组。Westernblot的结果也确证了AngRem10 4 EGFP融合蛋白的表达。提示新基因AngRem10 4 /pEGFP融合基因真核表达载体在真核细胞COS 1中获得了表达 ,细胞所表达的融合蛋白具有An gRem10 4和EGFP的双重活性 ,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位 ,为基因功能研究提供了线索。
- 梁秀彬张宏周安宇王海燕
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达
- 肾上腺髓质素拮抗转化生长因子β_1的促纤维化作用及其机制被引量：13
- 2002年
- 目的 :探讨肾上腺髓质素 (AM)在人肾小管上皮细胞系 (HK - 2 )对转化生长因子 β1(TGFβ1)促纤维化作用的影响及机制。方法 :细胞总胶原的合成和分泌以 [3H]-脯氨酸掺入量及培养液内 [3H]-羟脯氨酸放射活性来判断 ;ELISA法检测培养液中纤维连接蛋白 (FN)含量 ;FN、IV型胶原和组织型金属蛋白酶抑制剂 - 1(TIMP - 1)mRNA的表达采用RT -PCR法 ;信号蛋白Smad2及Smad6蛋白表达采用Westernblot法。结果 :( 1)AM在蛋白和mRNA水平均明显抑制TGFβ1刺激的胶原和纤维连结蛋白的表达 ;( 2 )AM抑制TGFβ1刺激的TIMP - 1mRNA的上调 ;( 3 )AM( 10 -8mol/L)本身对Smad2和Smad6的表达无明显影响 ,且对TGFβ1刺激的Smad2的表达也无明显影响 ;但是可以明显上调被TGFβ1抑制的Smad6的表达。结论 :在HK - 2细胞 。
- 马春艳王海燕
- 关键词：肾上腺髓质转化生长因子Β肾小球疾病
- 银染mRNA差异显示法分离黄芪与当归肾脏保护作用相关基因被引量：10
- 2000年
- 目的 分离与肾脏疾病慢性进展相关的基因 ,以及黄芪、当归药物防治肾硬化相关的基因。方法 以银染mRNA差异显示法对比正常肾脏、肾病综合征后硬化肾脏以及黄芪、当归治疗组的肾脏基因表达 ,并分离疾病状态下表达发生改变且能被黄芪、当归治疗纠正的基因。结果 分离、克隆了 2 6个黄芪、当归对肾脏具有保护作用的相关基因片段 ,随机选取 8个进行Northern杂交验证 ,其一被证实在肾硬化过程中表达下调 ;黄芪、当归治疗组其表达恢复。测序后同源性比较显示为一新基因。结论 银染mRNA差异显示法是简便快捷的分离差异基因的方法 ,本实验分离的新基因可能参与了肾脏疾病的慢性进展 ,并与黄芪、当归的治疗作用有关。
- 余凌王海燕吕有勇李惊子
- 关键词：当归肾疾病
- 血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂和血管紧张素转换酶抑制剂的肾保护作用及其对肾内肾素-血管紧张素系统的影响被引量：5
- 2001年
- 目的 :比较血管紧张素受体拮抗剂 (AT1RA)和血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)的肾脏保护作用 ,观察这两类药物对肾脏局部肾素 -血管紧张素系统的影响。方法 :肾病综合征模型由反复给SD大鼠腹腔注射嘌呤霉素诱导而成。2 8只大鼠随机分为 4组 :正常对照组、肾病对照组、AT1RA治疗组和ACEI治疗组。 12周后收集血、尿和肾组织标本进行检测。结果 :两治疗组尿蛋白明显少于肾病对照组 ,且到实验期末 ,肾功能仍在正常范围 ,肾小球和肾间质损伤指数也低于肾病对照组 ,但两治疗组间无明显差异 (P >0 0 5 )。肾病对照组的肾组织ACE活性、血管紧张素Ⅱ浓度显著高于正常对照组(P <0 0 1)。在ACEI和AT1RA治疗组 ,肾组织ACE活性和ANGⅡ浓度显著低于肾病对照组 (P <0 0 1)。结论 :AT1RA和A CEI在肾病综合征进行性肾损伤中 ,具有相似的肾脏保护作用 。
- 周安宇余凌李惊子张峻峰王海燕
- 关键词：肾素-血管紧张素系统肾脏保护作用肾病综合症
- 血管紧张素Ⅱ上调人肾小球系膜细胞硬化相关基因的克隆被引量：9
- 2002年
- 目的 筛选和鉴定培养的人肾小球系膜细胞（MsC）在血管紧张素Ⅱ（Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ）作用下,产生以纤连蛋白（Fibronectin,FN）为代表的细胞外基质成分的过程中上调表达的基因,寻找Ang Ⅱ致细胞外基质堆积作用的相关基因,为探讨Ang Ⅱ在肾小球硬化发展过程的分子机制奠定基础。方法 人MsC经Ang Ⅱ（10-6mol/L）刺激24h后,采用抑制性消减杂交（suppressionsubtractive hybridization,SSH）获得Ang Ⅱ相关的差异表达的cDNA,经纯化克隆到pGEM-Teasy Vector并转化大肠杆菌;随机选择120个克隆,经反向Northern筛选上调表达的基因cDNA片段,并以Northern杂交验证,然后进行DNA序列测定和同源性比较。采用5＇-和3＇-RACE及长距离PCR的方法获得新基因的全长cDNA。结果 在120个随机选择的克隆中,反向Northern结果表明有55个克隆表达明显上调。挑选其中20个克隆进行DNA序列测定,结果显示18个为独立的基因片段序列（有两个序列为双拷贝）,其中15个为已知基因,包括细胞外基质成分:如血小板反应素Ⅰ、Ⅰ型胶原α2;细胞骨架及结合蛋白:如平滑肌肌动蛋白α、钙调蛋白1、γ-胞浆型肌动蛋白等;合成和代谢相关蛋白:如醛缩酶A、延长因子1-γ、arnesyl pyrophosphate synthetase等;蛋白分解相关蛋白:如组织蛋白酶。
- 周安宇张宏梁秀彬侯平王海燕
- 关键词：细胞外基质系膜细胞肾小球硬化相关基因
- 黄芪当归对急性缺血再灌注大鼠肾损伤的治疗作用被引量：49
- 2001年
- 目的 :观察黄芪、当归对急性肾损伤的影响。方法 :采用双侧肾动脉夹闭 4 5min的缺血再灌注损伤大鼠模型 ,观察缺血再灌注前后肾小球滤过率 (GFR)、肾血浆流量 (RPF)、钠排泄分数 (FENa)、尿量、平均动脉压的变化 ,以及肾组织形态学的改变。结果 :黄芪、当归可促进再灌注后GFR及RPF的恢复 ,避免缺血后少尿的发生或使少尿期缩短 ,减轻FENa升高的幅度 ,并能改善肾组织病理损伤。结论 :黄芪。
- 盛梅笑李惊子王海燕屈磊许远邹万忠洪健美
- 关键词：当归急性缺血再灌注损伤肾损伤
- RP-HPLC法测定不同产地余甘子药材和鞣质有效部位中3种成分的含量被引量：9
- 2012年
- 目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定余甘子药材及鞣质有效部位中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸含量。方法:采用Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%冰醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱;检测波长为270mm和254nm;流速为1mL/min;柱温为30℃。对线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率各方法学进行考察。结果:没食子酸、柯里拉京和鞣花酸线性范围分别为0.1728-1.0368μg、0.0717-0.1792μg、0.2440-0.4880μg;平均回收率(n=6)分别为100.60%、100.65%、102.16%,RSD分别为2.83%、2.45%、1.65%。结论:建立的方法简便,重现性好,可用于余甘子药材和鞣质有效部位中没食子酸、柯里拉京和鞣花酸的含量测定。
- 张鸿雁沙磊石任兵张兰珍
- 关键词：没食子酸柯里拉京鞣花酸高效液相色谱
- 肾上腺髓质素在人肾小管上皮细胞系对转化生长因子β1的拮抗作用被引量：8
- 2001年
- 目的 探讨肾上腺髓质素 (AM)在人肾小管上皮细胞系 (HK 2 )对转化生长因子 β1(TGF β1)生物学效应的影响。观察系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平与肾小管间质病变的关系。方法 体外细胞培养实验分为 4组 (1)TGF β1组 ;(2 )AM组 ;(3)AM +TGF β1组 ;(4 )对照组。以3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;细胞总胶原的合成和分泌以3H 脯氨酸掺入量及培养液内3H 羟脯氨酸放射性活性来判断 ;ELISA法检测培养液中的纤连蛋白 (FN)含量 ;FN、IV型胶原和TIMP 1mRNA的表达采用RT PCR法 ;2 5例系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平测定采用放射免疫法。并设对照组。结果 (1)AM对TGF β1的生长抑制作用无明显影响 ;(2 )AM呈浓度依赖性抑制TGF β1刺激的胶原合成和分泌 ,与TGF β1组相比 ,AM(10 -8mol/L)分别抑制了 8% (P >0 .0 5 )和 30 % (P <0 .0 5 )的胶原合成和分泌 ,AM(10 -7mol/L)则分别抑制了 5 7% (P <0 .0 5 )和 6 4% (P <0 .0 1) ;并且AM明显抑制TGF β1刺激的FN分泌 ,AM +TGF β1组FN分泌 (2 0ng/ μl± 5ng/ μl)较TGF β1组 (2 8ng/ μl± 6ng/ μl)降低了 30 % (P <0 .0 5 ) ;AM显著抑制TGF β1刺激的IV型胶原、FN及TIMP 1mRNA的表达 ;(3)
- 马春艳王海燕
- 关键词：肾上腺髓质素转化生长因子Β间质性肾炎
- 黄芪当归合剂对大鼠慢性肾硬化中骨桥蛋白表达的影响被引量：42
- 2002年
- 目的 :探讨黄芪当归合剂对慢性肾硬化中骨桥蛋白表达的影响。方法 :采用大鼠慢性嘌呤霉素肾硬化模型 ,随机分为模型组 ,黄芪当归合剂治疗组 (简称中药治疗组 ) ,血管紧张素受体拮抗剂 (Irbesar tan)治疗组 (简称AT1RA组 )。实验全程 12周 ,血、尿标本进行生化检测、肾组织病理染色和免疫组化检测骨桥蛋白 ,单核巨噬细胞及细胞外基质层粘连蛋白 (laminin)、核心蛋白聚糖 (decorin)的表达。结果 :黄芪当归合剂具有与Irbesartan相似的减少尿蛋白 ,改善肾功能的作用 ;同时肾组织病理损伤减轻 ,尤其是小管间质损伤指数明显降低 ;间质细胞外基质 (decorin和laminin)聚集明显减少 ;小管骨桥蛋白的表达和间质单核巨噬细胞浸润均明显减少 ,且两者呈正相关性 (r =0 885 ,P <0 0 1)。结论 :黄芪当归合剂具有与Irbesartan相似的肾脏保护作用 ,这一作用可能涉及骨桥蛋白表达上调的抑制。
- 赵雅妮李惊子余凌王海燕
- 关键词：黄芪当归合剂骨桥蛋白肾脏纤维化中医药疗法
