浙江省科技攻关计划(011102465)
- 作品数：6 被引量：54H指数：4
- 相关作者：于涟许健由振强刘岩郑江涛更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- ChIL-2对H_5亚型AIV疫苗免疫增强作用研究被引量：14
- 2005年
- 鸡白细胞介素2真核表达质粒pCI-IL-2及原核表达重组鸡白细胞介素2(rChIL-2)分别与H5亚型禽流感油乳剂灭活苗联合使用,25日龄首免,40日龄时加强免疫.MTT法检测各组鸡外周血淋巴T细胞增殖,HI试验监测H5亚型禽流感抗体水平的消长规律,结果表明:pCI-IL-2及rChIL-2均能显著增强AIV疫苗的免疫效果(P<0.05),pCI-IL-2和rChIL-2两组间差异不显著(P>0.05);证实鸡白细胞介素2对H5亚型禽流感疫苗有免疫增强作用.rChIL-2协同免疫组MTT及HI试验均在第四周达到峰值,pCI-IL-2协同免役组峰值出现时间稍晚,但随后质粒免疫组可维持在更高的水平值.提示IL-2蛋白的作用更迅速,IL-2质粒作用更持久.
- 刘岩由振强许健郑江涛于涟
- 关键词：白细胞介素2MTTHI免疫增强
- 重组鸡白细胞介素2质粒在体内的分布研究被引量：4
- 2005年
- 3周龄雏鸡肌肉接种200μg重组鸡白细胞介素2真核表达质粒(pCI-chIL-2).PCR法检测血清、心、肝、肺、脾、法氏囊和肌肉接种部位中pCI-chIL-2的残留情况,利用竞争PCR观察血清中重组质粒的动态分布,RT-PCR检测上述组织器官pCI-chIL-2的表达情况.结果表明:接种后2 h血清中即可检测到pCI-chIL-2,8 h达到高峰,7 d时已检测不到;pCI-chIL-2在上述组织器官中存在的时间比较长,1～14 d各组织器官中均有分布,19 d时肺和法氏囊中已检测不到;RT-PCR结果显示pCI-chIL-2转录的mRNA在各组织于不同时间均有存在.本研究为重组chIL-2作为免疫增强剂的应用提供体内试验数据.
- 由振强于涟张朝政褚武英许健
- 关键词：RT-PCR
- IBDV VP2/4/3-ChIL-2融合基因真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2
- 2005年
- 构建含有传染性法氏囊病病毒(InfectiousBursalDiseaseVirus,IBDV)VP2/4/3和鸡白细胞介素2(ChickenInterleukin2,ChIL2)融合基因的真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,并在Vero细胞中进行表达.应用重叠延伸剪切技术(splicingbyoverlappingextension),分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3IL2、IL2VP2/4/3,定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3,在脂质体介导下,分别转染Vero细胞.RTPCR检测证实导入的外源基因在Vero细胞中得到了转录;间接免疫荧光试验(IFA)和Westernblot检测证实重组质粒在Vero细胞中正确表达了插入的外源基因编码的融合蛋白,且表达的融合蛋白具有免疫反应性.重组真核表达载体pCIVP2/4/3IL2、pCIIL2VP2/4/3的成功构建及其在Vero细胞中的有效表达,为进一步探讨ChIL2作为分子免疫佐剂对IBDVDNA疫苗的特异性免疫增强作用奠定了基础.
- 万旺军谢荣辉李龙许健于涟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒鸡白细胞介素2真核表达
- 鸡白细胞介素2真核表达质粒的构建、表达及对AIV疫苗免疫增强作用研究被引量：15
- 2005年
- 将鸡白细胞介素2(ChIL-2)基因亚克隆入pCI载体中,pEGFP-N1载体中的EGFP基因酶切后连入质粒pCI-ChIL-2中,构建真核表达质粒pCI-ChIL-2-EGFP,该载体表达ChIL-2-EGFP融合蛋白。重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞、鸡胚成纤维细胞(CEF)和外周血淋巴细胞(PBLC),荧光显微镜观察到融合蛋白在体外能稳定表达。HI试验显示,pCI-ChIL-2-EGFP与AIV疫苗共注射可明显提高AIV疫苗的免疫原性。
- 由振强于涟翁继锋许健徐根亮
- 关键词：鸡白细胞介素2EGFP真核表达
- 传染性法氏囊病病毒VP2/4/3-ChIL-2融合基因DNA疫苗免疫原性研究被引量：10
- 2006年
- 应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension,SOE),经3次PCR将传染性法氏囊病病毒(infectiousbursal disease virus,IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)基因和鸡白细胞介素2(Chicken IL-2,ChIL-2)基因进行融合,定向插入真核表达载体pCI的CMV启动子下游,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2和pCI-IL-2-VP2/4/3。将其制备成DNA疫苗,肌肉注射14日龄非免疫鸡,2周后加强免疫,定期测定鸡抗IBDV血清ELISA抗体效价及病毒中和抗体效价。加强免疫后3周用IBDV标准强毒株攻击,连续观察3天后全部扑杀,计算保护率及囊体比,并进行组织病理学检查。结果表明:1)融合基因重组质粒pCI-VP2/4/3-IL-2、pCI-IL-2-VP2/4/3免疫后能明显增强IBDVDNA疫苗对强毒的攻击保护(保护率分别为83.3%、91.6%),显著高于pCI-VP2/4/3单独免疫对照组(58.3%);2)诱导产生的抗IBDV血清ELISA抗体效价明显增高(P<0.05),同时能提高DNA疫苗诱导产生的中和抗体效价(P<0.05);3)能显著促进鸡外周血液T淋巴细胞增殖反应。上述结果提示:IBDV VP2/4/3与ChIL-2基因融合后发挥了相互协同作用,ChIL-2产生了分子免疫佐剂效应;融合基因DNA疫苗能增强IBDV DNA疫苗的免疫原性,促进了机体特异性免疫应答。
- 万旺军谢荣辉李龙许健郑江涛于涟
- 关键词：传染性法氏囊病病毒鸡白细胞介素2基因融合
