湖南省教育厅科研基金(04B057)
- 作品数：2 被引量：25H指数：2
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- 二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立被引量：9
- 2007年
- 目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。
- 易岚曾希苏琦周建国葛玲解娜黄炎石莺
- 关键词：二烯丙基二硫HL-60细胞
- 二烯丙基二硫作用于HL-60细胞后凋亡相关基因的差异表达被引量：17
- 2007年
- 背景与目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对多种肿瘤细胞有促凋亡作用,白血病是儿童最常见的恶性肿瘤,近期研究提示DADS能够在体外诱导人白血病细胞发生凋亡,但其具体作用机制尚不清楚。本实验旨在研究DADS诱导人白血病细胞HL-60凋亡的生物学效应,并探讨其分子机制。方法:运用DNA含量分析、AnnexinⅤ/PI双标记流式细胞仪、DNA琼脂糖凝胶电泳以及透射电子显微镜形态学观察等方法来证实细胞凋亡。通过基因芯片检测60μmol/L DADS作用于HL-60细胞4h后凋亡相关基因的表达谱,采用RT-PCR技术验证上调基因Fas-L和下调基因Bag-1。结果:15、30、60和120μmol/L DADS作用于HL-60细胞24h后,DNA含量分析出现了明显的亚二倍体峰;60μmol/LDADS作用4、8、12、24h后,Annexin Ⅴ/PI双标流式细胞仪检测表明早期凋亡细胞显著增加。60μmol/LDADS作用24h后,在DNA琼脂糖凝胶上可见特征性的梯形条带。电子显微镜观察到细胞体积缩小,核浓缩和凋亡小体形成等典型的形态学改变。通过基因芯片检测发现,60μmol/L DADS作用4h后有8个凋亡相关基因表达差异显著,选择其中Fas-L和Bag-1两个基因运用RT-PCR技术进行验证,其结果与基因芯片结果一致。结论:DADS能够诱导人白血病细胞HL-60凋亡,这可能是多个基因和多条信号转导通路共同作用的结果。
- 林敏谢海龙苏琦周建国谭晖易岚唐海林黄炎石莺
- 关键词：白血病HL-60细胞凋亡基因芯片
