“重大新药创制”科技重大专项(2010ZX09401-403)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：胡昌勤王楠冯芳张斗胜陈珍珍更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院中国药科大学四川大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 真菌来源的蛋白酶体抑制剂F04W2166A的研究
- 2011年
- 目的通过蛋白酶体抑制剂筛选模型从微生物代谢产物中筛选出具有蛋白酶体抑制活性的化合物。方法对1株筛选得到的阳性真菌进行放大发酵,通过硅胶和Sephadex LH-20柱色谱等分离手段进行单体化合物分离。结合理化性质和质谱及核磁共振等数据的分析,确定其化学结构。测定化合物的蛋白酶体抑制活性以及抗肿瘤细胞增殖活性。结果从1株具有活性的轮枝孢霉菌F04W2166中得到活性化合物F04W2166A,并确定其结构与环缩酚酞类已知化合物Pullularin C相同。体外酶抑制活性说明该化合物对蛋白酶体有很强的抑制活性,其IC50为3.1μg/mL。进一步的抗肿瘤细胞增殖活性结果证明该化合物对人结肠癌细胞株HT-29和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖均有很高的抑制活性,其IC50分别为28.3和271.6ng/mL。结论 F04W2166A是一个环缩酚酞类的蛋白酶体抑制剂,具有强的体外抗肿瘤细胞增殖活性。
- 王亚婷可爱兵王福生张雪莲李业英范玉玲路新华郑智慧蒋沁张华赵宝华
- 关键词：蛋白酶体抑制剂抗肿瘤
- 链霉菌FIM-080014产生的核苷类代谢产物研究
- 2012年
- 本文采用大孔吸附树脂、硅胶柱色谱、反相柱色谱、凝胶sephadex LH-20及HPLC等方法对链霉菌FIM-080014发酵液及菌丝体中的代谢产物进行分离,得到7个核苷类化合物。通过NMR及MS等方法鉴定了上述化合物的结构,分别为尿嘧啶(1)、尿嘧啶核苷(2)、2'-脱氧尿嘧啶核苷(3)、5'-C-甲基尿嘧啶核苷(4)、2'-脱氧胸腺嘧啶核苷(5)、2'-脱氧鸟嘌呤核苷(6)和次黄嘌呤(7),其中化合物4首次从微生物代谢产物中分离得到。活性分析表明化合物1～7对神经氨酸酶具有一定的抑制活性,其IC50值分别为3.7、2.1、4.4、1.4、3.6、2.5和2.4 mM。
- 王传喜彭飞江宏磊江宁宇陈名洪林如魏莹江红连云阳
- 关键词：链霉菌代谢产物核苷
- 人单酰基甘油脂肪酶基因的克隆表达、纯化及活性研究被引量：1
- 2012年
- 目的人单酰基甘油脂肪酶(human monoacylglycerol lipase,MAGL)是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶,是抗肿瘤药物研发的新靶点。为了建立高通量的MAGL抑制剂筛选模型,本研究对人MAGL进行了基因克隆、体外重组表达、纯化以及活性研究。方法通过RT-PCR方法从人脑总RNA中扩增人MAGL基因,并将该基因克隆入pET28a(+)表达载体。将重组蛋白在E.coli BL21(DE3)宿主菌中通过1mmol/L IPTG诱导表达。表达产物用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行分离纯化,通过SDS-PAGE进行分析。以7-hydroxycoumarinyl arachidonate(7-HAC)为荧光底物进行酶的活性测定。结果成功扩增出人MAGL基因,并构建了pET28a-MAGL表达载体。SDS-PAGE检测结果表明重组人MAGL蛋白在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的25%,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化后的重组蛋白纯度大于90%,其比活力达到7900IU/mg,,较纯化前提高了23倍。酶活性分析结果证明重组表达并纯化的蛋白具有单酰基甘油脂肪酶活性,另外,利用已知的MAGL抑制剂N-arachidonylmaleimide(NAM)对该酶表现出强的抑制活性,IC50值为0.53μmol/L。结论本研究成功利用大肠埃希菌原核表达体系重组表达并纯化了人单酰基甘油脂肪酶,为建立以MAGL为靶点的抗肿瘤药物筛选模型奠定了基础。
- 朱京童张駪郑海洲郑智慧路新华董爱华段宝玲
- 关键词：肿瘤纯化
- 两性霉素B效价测定方法的改进被引量：3
- 2013年
- 目的改进两性霉素B效价含量测定方法，提高方法的可靠性与可操作性。方法管碟法。新制培养基pH6．0～6．2；pH7．0磷酸盐缓冲液（含1％聚山梨醇）；检定菌为啤酒酵母（ATCC9763）；培养温度为（36±1）℃；培养时间为（20±2）hr：高、低剂量分别为10n5u／mL。结果抑菌圈大小符合规定，边缘清晰可以使用仪器进行测量：在1．09～10．90u／mL浓度范围内线性良好（回归方程：y=0．10763x＋0．50076，r=0．99965）；重现性与重复性好，日内精密度RSD=0．46％（n=6），日间精密度RSD=I．25％（n=12）。结论可以作为两性霉素B的常规质量控制方法。
- 常艳胡昌勤
- 关键词：两性霉素B效价测定抗生素微生物检定法不确定度
- 利用LC-MS和二维色谱相关光谱技术识别HPLC色谱图中杂质峰被引量：6
- 2012年
- 采用二维色谱相关光谱技术,实现质控HPLC方法与LC-MS色谱系统色谱峰的相互识别。本文采用HPLC-DAD(中国药典2010版方法)得到头孢唑肟和头孢地尼混合降解杂质的色谱图,建立降解杂质标准色谱光谱数据;采用LC-MS的方法结合MassWorks软件的应用鉴别出头孢唑肟和头孢地尼的主要降解产物;通过计算光谱相关性对杂质色谱峰进行归属。色谱二维光谱相关法在不同色谱系统下能够准确定性,在没有杂质对照品的情况下,可为质控HPLC方法中的杂质峰的归属提供新的途径和新的思路。
- 陈珍珍张斗胜王楠冯芳胡昌勤
- 关键词：头孢唑肟头孢地尼
