国家自然科学基金(31071519)
- 作品数：11 被引量：76H指数：4
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 杂色鲍组织蛋白酶L的分离纯化与性质研究被引量：3
- 2011年
- 通过硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose阳离子交换层析、Sephacryl S-200HR凝胶过滤和Hydroxyapatite羟基磷灰石层析,从杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏中分离纯化了组织蛋白酶L。SDS-PAGE结果显示,纯化蛋白的分子量约为28ku。该酶最适温度37℃,最适pH5.5。当温度低于40℃,pH在5.0～6.5范围内该酶较稳定。底物特异性实验与抑制剂实验结果表明,该酶属于半胱氨酸蛋白酶。金属离子Mn2+、Ba2+和Mg2+对该酶有不同程度的激活作用,而Co2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+和Ca2+等对该酶起抑制作用。
- 董训江钟婵蔡秋凤曹敏杰
- 关键词：杂色鲍组织蛋白酶L分离纯化
- 章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究被引量：2
- 2013年
- 通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂(Octopus Trypsin Inhibitor,OTI).Tricine-SDS-PAGE电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u.性质分析结果表明:OTI在pH=1.0～11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100℃下加热1 h、2 h后仍分别具有90%和65%的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)引起的肌球蛋白降解.
- 吴海龙陈雪芳王诚蔡秋凤曹敏杰
- 关键词：章鱼胰蛋白酶抑制剂分离纯化稳定性
- 鲤鱼肌肉中胶原蛋白酶的分离纯化与性质分析被引量：2
- 2013年
- 利用明胶酶谱法,在鲤鱼肌肉中检测到了一种具有分解胶原蛋白能力的丝氨酸蛋白酶.通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel和Phenyl-Sepharose等一系列柱层析法,纯化得到了分子质量为70 ku,能够降解胶原蛋白的丝氨酸蛋白酶(Collagenolytic Serine Proteinase,CSP).性质分析表明,CSP在弱碱性条件下显示活性,最适温度为30℃;丝氨酸蛋白酶抑制剂特异抑制CSP的活性.CSP能有效地分解鲤鱼肌肉中的I型胶原蛋白,提示其可能在鱼体死后肌肉胶原蛋白降解中发挥着重要的作用.
- 王诚张超群吴海龙黄身镰曹敏杰
- 关键词：丝氨酸蛋白酶纯化降解I型胶原蛋白
- 青石斑鱼胃蛋白酶原的分离纯化及酶学性质被引量：6
- 2011年
- 采用硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel,DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、SP-Sepharose阳离子交换柱层析和Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析,从青石斑鱼的胃中分离纯化到3种胃蛋白酶原(PG-1、PG-2和PG-3),SDS-PAGE结果显示,它们的分子量分别为35、36和37 ku。在pH 2.0下,3种胃蛋白酶原转化为有活性的胃蛋白酶P-1、P-2和P-3,分子量分别约为33、33和34 ku。3种酶的最适pH分别为3.0、2.5和2.5,最适温度均为40℃,且均能被典型的天冬氨酸蛋白酶抑制剂pepstatin A有效抑制。免疫交叉反应结果表明,3种胃蛋白酶原能与大鼠抗黄鳍鲷PG-Ⅰ,PG-Ⅱ,PG-3b,PG-3a,PG-4a及PG-4b多克隆抗体发生不同程度的免疫交叉反应。动力学参数测定结果表明,P-1、P-2和P-3对酸变性牛血红蛋白的Km、kcat及kcat/Km值分别为7.0×10-5 mol/L,17.6 S-1,2.5×105 mol/(L.S);5.5×10-5 mol/L,22.8 S-1,4.1×105 mol/(L.S)和5.2×10-5 mol/L,18.7 S-1,3.6×105 mol/(L.S)。
- 刘西之邱晓燕蔡秋凤刘光明苏文金曹敏杰
- 关键词：青石斑鱼胃蛋白酶原胃蛋白酶纯化
- 鱼皮明胶蛋白膜的制备及其热稳定性被引量：38
- 2011年
- 利用鲨鱼皮明胶制备蛋白可食膜,测定了成膜液蛋白浓度、甘油含量对明胶蛋白膜理化性质的影响,以及环境湿度对膜热稳定性的影响。结果发现,利用鲨鱼皮明胶可以制备成无色透明的蛋白可食膜,成膜液蛋白浓度对明胶蛋白膜的断裂延伸率(EAB)、水蒸气透过率(WVP)以及透明度值有一定的影响,对拉伸强度(TS)没有发生显著影响,但甘油含量从10%增加到70%时蛋白膜的TS逐渐降低。利用DSC对膜的热稳定性进行分析,结果表明当水分活度(Aw)<0.33时,明胶蛋白膜在常温下可以处于玻璃态,机械性质能够保持稳定。然而,当Aw超过0.44后,膜的玻璃化转变温度(Tg)起始点低于25℃,膜的EAB上升,TS出现显著下降。当Aw达到0.92时,膜甚至开始溶解变成溶胶。因此,利用鲨鱼皮制备的明胶蛋白膜只适合在Aw小于0.44的干燥环境中应用。
- 翁武银刘光明苏文金大迫一史曹敏杰
- 关键词：可食膜热稳定性水分活度差示扫描量热法
- 鲤鱼胶原蛋白的过敏原性研究被引量：4
- 2011年
- 以鲤鱼鱼皮为研究对象,通过碱溶、酸溶、NaCl盐析等方法从鱼皮中分离纯化得到了胶原蛋白.SDS-PAGE分析显示,鲤鱼胶原蛋白由分子质量约为120 ku和115 ku的2条α链(α1与α2)、分子质量约为250 ku的β链以及大分子质量的γ链组成.分析比较鲤鱼胶原蛋白与鲢鱼小清蛋白的基本性质,结果显示:2种蛋白质的pH值稳定性相似;胶原蛋白的热稳定性不如小清蛋白,但比小清蛋白更耐胃蛋白酶消化;在高温高压处理下,胶原蛋白明显降解,小清蛋白则出现了降解与聚合2种情况.应用8份鱼类过敏患者血清的酶联免疫吸附测定实验结果显示,小清蛋白对6份血清有特异性IgE反应,胶原蛋白对3份血清有特异性IgE反应.Dot-blot实验结果显示,胶原蛋白与鱼类过敏患者血清出现了特异性的杂交显色斑点.与小清蛋白相似,鲤鱼胶原蛋白具有特异的IgE结合活性,提示其是一种潜在的过敏原.
- 潘冰青刘光明曹敏杰蔡秋凤翁武银苏文金
- 关键词：鲤鱼胶原蛋白稳定性
- 锯缘青蟹精氨酸激酶基因的克隆与表达被引量：4
- 2011年
- 通过分子生物学方法,克隆得到锯缘青蟹(Scylla serrata)精氨酸激酶(Arginine Kinase,AK)开放阅读框基因序列.测序结果显示:该开放阅读框基因的序列长度为1 071 bp,编码356个氨基酸残基;该序列登录Genbank(GQ:851626),序列比对结果显示,锯缘青蟹精氨酸激酶与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)精氨酸激酶的氨基酸序列同源性高达94%,与岸蟹(Carcinus maenas)、中华绒鳌蟹(Eriocheir sinensis)等甲壳类动物的精氨酸激酶也有较高的同源性,均高于90%;将克隆得到的锯缘青蟹精氨酸激酶基因与pGEX-4T-3载体连接,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导得到分子质量为65 ku的融合表达蛋白(GST-AK),经兔抗锯缘青蟹精氨酸激酶多克隆抗体的免疫印迹分析证实,GST-AK具有抗原性.
- 阮韦伟沈苑曹敏杰苏文金蔡秋凤刘光明
- 关键词：锯缘青蟹精氨酸激酶CDNA克隆
- 鲫和鳜主要过敏原小清蛋白的基因克隆及序列分析被引量：4
- 2012年
- 小清蛋白（parvalbumin，vv）是鱼类的主要过敏原，为分析淡水鱼PV的序列及结构特征，采用RT-PCR方法，从鲫和鳜肌肉中分别克隆得到2种小清蛋白的基因序列。生物信息学分析结果显示，4种基因的序列长度均为330bp，编码109个氨基酸残基，推导分子量在11．6ku左右，等电点为4．45-4．69。氨基酸序列分析表明，克隆得到的这4种PV序列均含有丙氨酸-14、亮氨酸．16、半胱氨酸．19、苯丙氨酸．67、谷氨酰胺-69以及苏氨酸．79等β型PV特征性残基序列，表明克隆的目的基因均为β型PV。鲫的2种PV序列相似性为80．73％，鳜的2种PV的序列相似性为83．49％。对克隆得到的PV序列进行空间结构分析显示，这4种PV序列均含有3个螺旋一松弛一螺旋结构，即EF一手型结构，其中靠近c端功能域的两个手型结构为Ca^2＋结合位点。
- 阮密密蔡秋凤刘光明曾伶俐苏文金曹敏杰
- 关键词：小清蛋白基因克隆生物信息学分析
- 蓝圆鲹肌肉中丝氨酸蛋白酶的分离纯化及性质研究被引量：6
- 2012年
- 鱼类死后肌肉容易发生软化现象。研究表明,这与肌肉中的丝氨酸蛋白酶有着密切的关系。本研究通过硫酸铵盐析、DEAE-Sephacel、Q-Sepharose及Capto Q等柱层析相结合的方法,从蓝圆鲹肌肉中纯化得到一种具有分解明胶能力的丝氨酸蛋白酶,SDS-PAGE结果显示其分子量约为60ku,该酶最适温度及最适pH分别为40℃和9.0。丝氨酸蛋白酶抑制剂Pefabloc SC、Benzamidine、MBTI、PMSF和LBTI均能明显的抑制该酶的活性,而其他蛋白酶抑制剂对其活性没有明显的影响。底物特异性表明其能有效的降解丝氨酸蛋白酶荧光底物Boc-Leu-Lys-Arg-MCA,但进一步研究发现,该酶对I型胶原蛋白及明胶有明显的分解能力,同时对肌球蛋白重链也有一定的分解作用,说明该酶可能参与鱼肉保鲜中肌肉软化的过程。
- 王梦想钟婵蔡秋凤刘光明苏文金曹敏杰
- 关键词：蓝圆鲹丝氨酸蛋白酶明胶酶谱性质分析
- 草鱼肌肉脯氨酸内肽酶的研究被引量：3
- 2015年
- 脯氨酸内肽酶（Prolylendopeptidase，PEP）是一类能够特异性水解低分子质量多肽链中脯氨酸残基羧基端肽键的内切酶，与胶原蛋白的后期降解有密切关系。以淡水鱼草鱼为原料。采用硫酸铵分级沉淀。DEAE—Sephacel阴离子交换，Phenyl—Sepharose疏水层析和羟基磷灰石层析等方法从草鱼肌肉中分离纯化得到一种脯氨酸内肽酶。SDS—PAGE结果显示，草鱼PEP的分子质量为75ku。酶学性质分析表明，其最适pH为6．0，在pH5．5～7．5间有较好的稳定性。酶的最适温度为30℃，其热稳定性较差。PEP能够特异性分解肽链羧基端为脯氨酸残基的荧光底物，PEP的特异性抑制剂SUAM以及丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟对其有强烈的抑制作用。酶动力学研究表明，草鱼PEP的k为19．23μmol／L，kca为2．5s-1。肽指纹质谱分析结果表明，草鱼PEP与青锵鱼、罗非鱼、斑马鱼PEP的序列同源性分别为98-3％．96．1％和94．4％。
- 翁凌林韵张玲张凌晶颜龙杰刘光明曹敏杰
- 关键词：草鱼纯化性质分析
