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白念珠菌CaFIG1基因缺失突变株的构建: 2015年; [目的]研究Ca FIG1基因除参与有性生殖过程外,是否还参与细胞钙稳态等其他功能,对Ca FIG1进行基因敲除。[方法]采用2种方法分别敲除Ca FIG1的2个等位基因,一种通过PCR扩增HIS1敲除盒,另一种通过克隆的手段构建URA3敲除盒。[结果]从白念珠菌RM1000中成功敲除了Ca FIG1双等位基因。[结论]该敲除策略同样适用于其他基因的敲除,提高了基因敲除的效率。; 王雅楠王军军徐大勇蒋伶活; 关键词：白念珠菌基因敲除

酿酒酵母中与ScRch1定位相关的膜蛋白和脂质体蛋白的筛选被引量：3: 2013年; 酿酒酵母YMR034c基因与我们之前发现和鉴定的白念珠菌的CaRCH1基因同源,因此把它命名为ScRCH1,它编码的蛋白ScRch1在胞外高钙离子条件下定位于细胞质膜。为了研究酿酒酵母细胞对ScRch1质膜定位的调控机理,在编码细胞质膜和液泡膜等膜蛋白以及与脂质颗粒相关蛋白的402个基因的缺失株中,我们通过荧光显微镜技术检测了融合蛋白ScRch1-GFP的细胞膜定位情况。结果发现,ScRch1在其中10个基因的缺失株细胞里不能定位于质膜。这些基因包括两个编码细胞质膜运输蛋白的基因SNQ2和HXT1,一个编码液泡膜运输蛋白的基因AVT4,一个与液泡连接/融合相关的液泡膜蛋白基因PEP3,一个与细胞分化有关的内体膜蛋白基因DFG10,两个编码脂质体蛋白的基因EHT1和LDH1,以及三个功能未知的内体膜蛋白基因YBR219c、YBR224w和YDR417c。因此,ScRch1的细胞膜定位可能受到以上多个细胞过程的影响,这些研究结果为进一步阐明ScRch1的细胞质膜定位机制奠定了基础。; 赵刚曹春蕾赵运英蒋伶活; 关键词：钙离子基因筛选膜蛋白

酿酒酵母中SSK2基因与其他镉耐受相关基因之间的双基因缺失菌株构建被引量：2: 2016年; 镉是一种严重的环境污染物,对人体具有致癌性,能蓄积在生物体内影响机体的生长、发育和生殖。有丝分裂原蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)在调节细胞存活、增殖和分化中是重要的信号分子,并能够被镉胁迫激活。酿酒酵母中2个MAPK信号传导途径,高渗透压甘油(High Osmolarity Glycerol,HOG)途径和细胞壁完整性(Cell Wall Integrity,CWI)途径都参与Cd2+胁迫下的细胞应答。为了进一步研究这两条途径在调控Cd2+胁迫方面的相互作用,以HOG途径的蛋白激酶SSK2基因为例,通过合成遗传阵列(Synthetic Genetic Array,SGA)方法,成功构建了SSK2基因与其他52个Cd2+耐受相关基因之间的双基因缺失菌株。为大规模研究Cd2+耐受基因之间在调控镉胁迫方面的遗传学相互作用奠定了基础,也为酿酒酵母的相关研究提供了一个新的遗传学手段。; 熊兵杨益蒋伶活; 关键词：酿酒酵母

白念珠菌细胞内钙离子稳态和钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径的调控机理研究进展被引量：2: 2016年; 钙离子稳态和钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径在真核细胞中高度保守。与最简单的模式真核生物(酿酒酵母菌)一样,人体病原真菌白念珠菌的细胞中存在各种钙通道、钙泵和钙交换器以及完整的钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径成员,它们在维持白念珠菌胞内钙离子稳态以及应答外界环境压力、耐药性、形态发生和致病性等方面有着至关重要的作用。对白念珠菌钙离子稳态和钙离子/钙调磷酸酯酶信号途径调控机理的认知,有助于了解其致病过程和耐药机理,同时可以为发现和开发新的抗真菌药物提供研究基础。该文结合所在实验室相关研究工作对这一领域的最新研究进展作了综述。; 徐大勇蒋伶活; 关键词：白念珠菌钙离子信号途径

白念珠菌CaGDT1基因的功能研究: 2016年; 人类跨膜蛋白TMEM165与酿酒酵母Sc Gdt1均属于阳离子/钙离子交换器家族的成员,在本研究中,通过序列比对在白念珠菌中发现了Sc GDT1的同源基因Ca GDT1,表型互补实验显示Ca GDT1基因的表达能够抑制Sc GDT1基因缺失所造成的钙离子敏感性,证明Ca GDT1是Sc GDT1的同功基因。此外,通过同源重组原理敲除了Ca GDT1的2个等位基因。表型筛选结果表明gdt1/gdt1缺失株对钙离子、细胞壁和内质网3种胁迫均不敏感,而对酮康唑和特比萘芬2种抗真菌药物具有耐受性。; 王军军王雅楠徐大勇蒋伶活; 关键词：白念珠菌基因敲除耐药性

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国家自然科学基金(81371784)