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化学致癌物暴露后哺乳动物细胞内及培养上清中核型dUTP焦磷酸酶的表达分析: 2008年; 目的:研究不同化学致癌物暴露后核型dUTP焦磷酸酶(DUT-N)在哺乳动物细胞内及培养上清中的表达情况。方法:分别用N-亚硝胺类烷化剂N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和多环芳烃类致癌物苯并[a]芘在体内的终致癌物7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(BPDE)处理人羊膜上皮FL细胞、人肝癌HepG2细胞和人宫颈癌HeLa细胞。采用SDS-PAGE和免疫印迹法检测细胞培养上清中DUT-N蛋白的分泌及细胞内该蛋白的表达情况。结果:低浓度MNNG(0.25μmol/L)和BPDE(5nmol/L)暴露后都可引起DUT-N出现在FL细胞的培养上清中,而对HeLa细胞均无此影响;两者对HepG2细胞的影响不同,前者使DUT-N在细胞外出现,而后者却没有改变。同时,尽管MNNG与BPDE都可引起FL细胞胞外DUT-N的出现,但MNNG暴露后胞内DUT-N的表达dUTP下调,而BPDE暴露后却dUTP上调。结论:化学致癌物暴露后核型dUTP焦磷酸酶在细胞培养上清中出现的现象不具有化合物的特异性,但对特定细胞系(如FL细胞)可能存在化学致癌剂或DNA损伤剂的共性。同时,不同致癌物引起DUT-N出现的细胞反应可能是不同的。; 锁慧萍沈静吴美萍徐方余应年; 关键词：FL细胞

Eukaryotic DNA damage tolerance and translesion synthesis through covalent modifications of PCNA被引量：6: 2008年; 除了明确的脱氧核糖核酸修理小径，所有生活有机体发展了机制避免复制叉倒塌在复制由于脱氧核糖核酸的造成分裂的共有原子价修正被堵住的一个地点引起的细胞死亡。术语脱氧核糖核酸损坏忍耐(DDT ) 泛泛地被采用了包括房间由熬过堵住复制的损害与或没有联系 genomic 不稳定性的许多机制。最近的基因分析在优核质显示那 DDT，从酵母到人，与是无差错的和另外一个由二条平行小径组成高度诱变。在开始发育的酵母，有趣地，这二条小径被增殖的房间的顺序的修正调停由二 ubiquitination 建筑群 Rad6-Rad18 和 Mms2-Ubc13-Rad5 的原子抗原(PCNA ) 。由 Rad6-Rad18 的 PCNA 的导致损坏的 monoubiquitination 与增加的傻瓜发育不全支持 translesion 合成(TLS ) ，当在由 Mms2-Ubc13-Rad5 的一样的 K164 残余的 PCNA 的随后的 polyubiquitination 支持无差错的损害时绕过。从最近的研究获得的数据建议上述机制在更高的优核质被保存。特别地，哺乳动物包含多重专业化 TLS 聚合酶。在 TLS 聚合酶之一的缺点被连接了到 genomic 不稳定性和癌症。; Parker L AndersenFang XuWei Xiao; 关键词：DNA 脱氧核糖核酸分析方法

hREV3基因对细胞增殖周期的影响被引量：4: 2008年; 应用反义阻断REV3基因表达的人胚肾上皮细胞（HEK-293-M-REV3-）来研究人类REV3基因对细胞增殖周期的影响，评价该基因在哺乳类细胞突变形成中的作用，探讨其与肿瘤形成的关系。文章应用流式细胞技术分别对在自发或不同理化诱发条件[（紫外线，UVB）和（甲基甲烷磺酸酯，MMS）]下，对体外培养的HEK-293-M—REV3-细胞进行细胞增殖周期和DNA含量的影响进行检测，并计算细胞的增殖指数。结果显示：自发状态下，HEK-293-M—REV3-细胞与对照组细胞相比S期延长；而UVB和MMS不同理化因素诱导时，HEK-293-M—REV3-细胞的G2-M期或S期比例明显比对照组增加，PI值也相应增加。因此可以推测，当REV3基因低表达时，细胞无论在自发还是诱发情况下突变频率均降低，原因可能与细胞周期的改变有关，进而再引起DNA复制叉阻滞、合成减少，导致细胞死亡或凋亡。; 徐方李元杰; 关键词：流式细胞技术细胞增殖周期 DNA含量

人REV3基因与紫外线诱导突变形成原因的探讨被引量：1: 2008年; 目的利用反义阻断REV3基因表达的人胚肾上皮细胞(HEK293-M-REV3-)检测其对紫外线(UVB)的敏感性及细胞动力学的改变,评价hREV3基因在紫外线诱发突变中的作用。方法体外培养HEK293-M-REV3-细胞,利用MTT法检测hREV3缺陷细胞系对UVB的敏感性,采用流式细胞技术DNA含量分析法检测细胞周期及DNA倍体指数(D I值)的变化,计算增殖指数PI值。结果HEK293-M-REV3-细胞系对UVB的IC50为47.97m J/cm2,其敏感性明显比对照细胞高,流式细胞技术检测结果显示,自发状态下HEK293-M-REV3-细胞系的S期比例增加,UVB处理后细胞G2-M期延长,随着处理后培养时间的延长,细胞周期停滞现象更明显,细胞的PI相应的有所改变。结论阻断hREV3基因表达,细胞对紫外线等物质敏感性增加,提示REV3基因参与哺乳动物细胞易误性跨损伤修复,易引起突变形成,原因可能与细胞周期的改变有关,由于REV3基因的低表达,细胞不能跨越损伤而使细胞周期停滞于致突变物质作用敏感的S期或G2-M期,引起DNA复制叉停滞,最终引起的结果是细胞的凋亡或死亡。; 李元杰徐方; 关键词：增殖

REV3基因对结肠癌细胞遗传信息表达的影响被引量：4: 2010年; 利用RNA干扰技术降低REV3基因在人类结肠癌细胞(SW480)中的表达,以荧光实时定量PCR检测REV3表达量的降低情况,选择低表达效率具有统计学意义的细胞作为实验组细胞。运用细胞生长曲线、MTT、微核和姐妹染色单体交换等方法,对实验组和对照组细胞进行细胞生长周期、增殖变化情况和遗传信息表达等指标的检测。结果显示:REV3低表达的结肠癌实验组细胞在细胞增殖以及细胞的微核和姐妹染色单体交换等遗传信息表达均明显低于结肠癌对照组细胞,实验结果具有统计学意义(P<0.05);结肠癌的两对照组间(阴性和空白)的结果虽然有一定的差异,但没有统计学意义。研究结果提示,REV3低表达时,可能对结肠癌细胞(SW480)的生长与增殖产生影响,并对微核和姐妹染色单体交换等遗传不稳定现象的产生有一定的抑制作用。; 隋御李元杰金彩霞徐方; 关键词：RNA干扰荧光实时定量PCR

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国家自然科学基金(30560132)