云南省自然科学基金(2005C0062M)
- 作品数：6 被引量：13H指数：2
- 相关作者：徐维明李健峰杨旭龙海亭李智华更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 单纯疱疹病毒I型糖蛋白D在酵母中的表达被引量：2
- 2006年
- 从提取的HSV-1基因组中扩增得到编码gD蛋白胞外区1～314aa的基因gDt,将其插入毕赤酵母表达质粒pPIC9K的醇氧化酶(AOX1)启动子下游,构建携带gDt的重组载体,经电转化GS115菌株和G418筛选,得到了高效分泌表达gD蛋白的毕赤酵母菌株,表达量达到250mg/L,该目的蛋白可被gD单抗(1-I-9)特异性识别。表达产物经离子交换、金属螯合、分子筛柱层析纯化后得到纯度较高的重组蛋白。重组gD蛋白免疫BALB/c小鼠可诱生一定水平的特异性抗体,表明该蛋白具有较好的免疫原性,能够诱导小鼠产生体液免疫应答。
- 李智华徐维明姬秋彦龙海亭彭正华李健峰
- 关键词：单纯疱疹病毒毕赤酵母表达纯化
- 一种新型广谱流感病毒亚单位疫苗的表达与纯化被引量：2
- 2007年
- 通过引物设计,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)和搭桥PCR方法扩增得到A型流感病毒M2蛋白缺失跨膜区基因以及HA多表位基因,分别克隆测序后以pET28a+为表达载体构建重组质粒pET28a+-M2d-HA。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选获得了高效表达流感病毒缺失跨膜区M2蛋白和HA多表位蛋白片段重组融合蛋白的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的45%左右。表达的蛋白以包涵体形式存在,包涵体经亲和层析和阴离子交换层析纯化后复性,得到纯度在90%以上的目的蛋白。Westernblot结果显示纯化的重组蛋白具有较好的抗原性和特异性。为进一步研究广谱型流感病毒亚单位疫苗奠定了基础。
- 魏义举龙海亭杨旭李建芳毕研伟李健峰徐维明
- 关键词：流感病毒亚单位疫苗多表位表达纯化抗原性
- 人白细胞介素11的定点聚乙二醇修饰被引量：6
- 2009年
- 利用hIL-11无Cys残基这一特点,通过定点突变将一个Cys残基引入hIL-11的N末端。然后,利用与Cys巯基特异性反应的mPEG-马来酰亚胺将mPEG偶联到预先选定的位点,经层析纯化得到hIL-11的定点PEG修饰物。利用依赖型细胞株7TD1测定其生物学活性,结果表明,其体外生物学活性保持原有hIL-11活性的30%左右。定点聚乙二醇修饰方法为定向改造hIL-11,提高其药效的应用研究打下基础。
- 李智华胡满仓阎玲梅赵玉娇杨旭彭正华徐维明李健峰
- 关键词：聚乙二醇化学修饰
- 重组肿瘤坏死因子-α衍生物的制备及聚乙二醇修饰
- 2007年
- 应用搭桥PCR技术,将肿瘤坏死因子-α基因的前4位氨基酸的编码序列删除,对hTNF-α的第8/9/10/29/31/157位氨基酸的密码子进行定点突变,将突变后的cDNA插入到pBV220载体中构建重组质粒pBV220-tnf-αD4。将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,筛选获得了高效表达TNF-αD4突变体的工程菌,表达的重组蛋白约占菌体蛋白总量的45%左右,经硫酸铵沉淀和阳离子交换层析纯化得到纯度达90%以上的重组目的蛋白,比活性达到8×107。用单甲氧基聚乙二醇-丁醛(mPEG-ButyrALD)对TNF-αD4进行修饰,经阳离子交换层析纯化得到mPEG-TNF-αD4,纯度达85%以上,比活性达到8.6×107,系统毒性也有了明显的降低。通过应用PEG修饰肿瘤坏死因子-α,为降低其毒性,增加其活性进行了有益的尝试,为其进一步研究与开发奠定了基础。
- 毕研伟罗娜龙海亭杨增福杨旭李健锋徐维明
- 关键词：表达纯化生物活性
- 重组人甲状旁腺激素肽(1-34)在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化被引量：3
- 2006年
- 人工合成人甲状旁腺激素1～34肽段(PTH134)的cDNA序列,克隆到大肠杆菌蛋白表达载体pThioHis中,获得了高表达菌株。经发酵、破菌、金属螯合层析、反相层析和凝胶层析后获得了纯度大于95%的hPTH134,hPTH134肽N端测序和质谱分子量测定结果与天然PTH134一致。生物学活性研究表明,hPTH134在体外具有刺激腺苷酸环化酶的作用。
- 李健峰肖红剑姬秋彦李智华龙海亭阎玲梅罗娜徐维明
- 关键词：人甲状旁腺激素大肠杆菌
- 幽门螺杆菌napA基因的克隆表达及免疫原性研究
- 2007年
- 采用PCR方法扩增幽门螺杆菌napA基因片段并克隆至原核表达载体pET28a获得重组质粒pET28a-nap.将重组质粒转化E.coli BL21(DE3)表达菌后经IPTG诱导表达融合蛋白NAP,相对分子质量约为18ku,表达量约占菌体蛋白总量的40%.融合蛋白经纯化后获得纯度为95%以上的重组蛋白,Western blot分析其能与幽门螺杆菌抗血清特异性反应.与佐剂CpG ODN联合口服免疫小鼠后,可有效诱导免疫应答,产生高水平的IgG,与未加佐剂组相比具有显著性差异(t=7.095,P<0.01).以上结果说明融合蛋白NAP联合佐剂CpG ODN经口服免疫可有效诱导免疫应答.NAP可作为幽门螺杆菌口服疫苗候选抗原.
- 张莹丹杨旭彭正华何春艳陈阳徐维明李健峰
- 关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白
