国家自然科学基金(30560148)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：左丽任玮吕秉乐任丽娟朱海东更多>>
- 相关机构：贵阳医学院贵州省疾病预防控制中心商丘医学高等专科学校更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生历史地理更多>>
- 两株登革2型病毒NS1基因真核重组质粒免疫BALB／c小鼠产生特异性抗体水平的比较
- 2011年
- 目的利用登革2型病毒（denguetype2virus，DENV2）M株和NC,C株NSl基因部分别pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠，观察免疫小鼠体液免疫应答的差异。方法分别构建两株DENV2NSl基因部分序列（1—413bp）的pcDNA3．1真核重组质粒和pET28a（＋）质粒，进行原核蛋白的表达、鉴定、纯化和定量；并用pcDNA3．1重组质粒免疫BALB／c小鼠，初次免疫及第7天、14天分别加强免疫1次，共免疫3次。收集初次免疫后第7、14、28和56天外周血标本，间接ELISA法测定小鼠血清特异性IgM／IgG类抗体水平，细胞病变抑制法检测特异保护性抗体水平。结果构建了pET28a（＋）-NS1m／pET28a（＋）-NS1原核表达重组质粒，SDS-PAGE分析表明，NS1基因部分序列获得表达，其相对分子质量均约22．3×10^3；Westernblot表明该目的蛋白可与抗His标签单克隆抗体结合；经Ni柱亲和层析法得到纯度达92％的表达蛋白，对C6／36细胞有毒性，并可用于ELASA检测。不同DENV2毒株NS1基因部分序列的pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠诱导特异性IgM、IgG类和中和抗体的产生存在差异，M株重组质粒加强免疫小鼠后特异性抗体效价水平较高并持续较长时间。结论DENV2两毒株NS1基因部分序列重组质粒免疫小鼠后诱生的特异性抗体类别、水平存在差异。
- 任丽娟左丽朱海东胡方芳
- 关键词：登革2型病毒NS1基因重组质粒BALB/C小鼠体液免疫应答
- 登革病毒Ⅱ型对人脐静脉血管内皮细胞通透性的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究登革病毒Ⅱ型（DENV-2）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）通透性的影响。方法DENV一2病毒滴定，DENV-2接种HUVEC单层细胞，用间接免疫荧光法动态观察DENV-2感染HUVEC的情况（30min，1、3、6、12、24、30、36、42、48、72b），实时定量荧光PCR方法检测病毒载量，transwell法检测DENV-2对HUVEC通透性的影响，透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果DENV－2对HUVEC通透性的影响30min时作用最为明显，其次为42h时。且病毒载量与HUVEC通透性改变呈正相关。透射电镜结果显示有细胞微绒毛脱落，胞质溶解，部分核膜间隙增宽，甚至是细胞核中也存在裂隙，部分线粒体嵴消失甚至空化，线粒体髓样变，包膜不完整。结论DENV-2对HUVEC通透性有影响，为探究登革病毒的发病机制提供一定的理论依据。
- 任玮左丽吕秉乐崔冬冰
- 关键词：登革病毒人脐静脉血管内皮细胞通透性
- 登革2型病毒及其NGC株、M株E基因的原核蛋白对HUVEC通透性的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:研究登革2型病毒(DENV-2)、登革2型病毒国际参考株(NGC)E基因1-476序列原核蛋白、登革2型病毒贵州蚊虫分离株(M)E基因1-476序列原核蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)通透性的影响。方法:将DENV-2 M株和NGC株E基因1-476序列原核表达产物及DENV-2接种于HUVEC单层细胞,用transwell法检测HUVEC的通透性,透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:DENV-2、NGC株E基因的原核蛋白、M株E基因的原核蛋白分别在30 min、3 h、12 h时对HUVEC通透性的影响最为明显,透射电镜结果显示有细胞超微结构的改变。结论:DENV-2、DENV-2 NGC株E基因原核蛋白、M株E基因原核蛋白对HUVEC通透性、细胞超微结构有明显影响。
- 任玮左丽吕秉乐
- 关键词：登革热病毒E基因细胞膜通透性
- 登革2型病毒NGC株NS1基因部分序列pcDNA3.1载体的构建
- 2009年
- 目的:克隆登革2型病毒NGC株NS1基因部分序列,构建NS1基因部分序列的真核表达载体。方法:用PCR技术扩增登革2型病毒NGC株NS1基因部分序列,并定向克隆入pcDNA3.1(+)的kpnⅠ、xhoⅠ位点,构建真核重组载体pcDNA3.1(+)-NS1,转化EcoliDH5a。阳性重组质粒用PCR、酶切及序列测定等方法鉴定。电穿孔法将真核重组载体转染COS-7细胞,RT-PCR鉴定其表达情况。结果:阳性质粒经kpnⅠ及xhoⅠ双酶切及PCR获得了1个核苷酸长度为413 bp的基因,序列测定证实与NGC株NS1基因部分基因序列有99%同源,重组真核质粒转染COS-7细胞经RT-PCR鉴定证实有表达。结论:成功构建了含有登革2型病毒NGC株NS1基因部分序列基因的真核重组载体pcDNA3.1(+)-NS1。
- 任丽娟左丽朱海东
- 关键词：登革热病毒克隆细胞
- 两株登革2型病毒E基因重组质粒免疫BALB／c小鼠产生特异性抗体水平的比较
- 2009年
- 目的用含登革2型病毒（Dengue type2virus，DEN2）B株和NGC株E基因部分序列pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠，观察免疫小鼠体液免疫应答的差异。方法用两株含DEN2E基因部分序列（1～476bp）的pcDNA3．1重组质粒与含有佐剂的重组质粒共同免疫BALB／c小鼠，初次免疫后第14天、28天分别加强免疫1次，共免疫3次。收集初次免疫后第14、28、42、70和98天外周血标本，间接ELISA法测定小鼠血浆特异性IgM／IgG类抗体水平，细胞病变抑制法检测特异性抗体水平。结果不同DEN2毒株E基因部分序列的pcDNA3．1重组质粒初次和加强免疫BALB／c小鼠诱导特异性IgM、IgG类抗体的产生存在差异，B株重组质粒加强免疫小鼠后特异性抗体效价水平较高并持续较长时间。结论DEN2两毒株E基因部分序列重组质粒免疫小鼠后诱生的特异性抗体类别、水平存在差异。
- 王娇左丽王丛李学政
- 关键词：登革2型病毒E基因重组质粒BALB/C小鼠特异性抗体
