国家科技重大专项(2012ZX10004214)
- 作品数：16 被引量：44H指数：4
- 相关作者：陈化兰姜永萍陈普成柳金雄王刚更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所甘肃农业大学石河子大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价
- 2015年
- 为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(S.suis);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型S.suis WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型S.suis攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防S.suis病的有效灭活疫苗候选株。
- 高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌灭活疫苗免疫保护
- 伪狂犬病毒中国分离株及Bartha-K61囊膜蛋白B细胞抗原表位预测及差异分析
- (目的)2011年以来,在我国多地使用伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)基因缺失疫苗株Bartha-K61免疫过的猪场发生了疑似伪狂犬病毒感染和发病现象,经调查和毒株分离鉴定,从这些猪场分离到了伪...
- 陈利红王靖飞
- 关键词：囊膜蛋白进化分析
- 编码基因完整的伪狂犬病毒细菌人工染色体的构建被引量：4
- 2016年
- 为了构建包含伪狂犬病毒(PRV)完整编码基因的细菌人工染色体(BAC),首先对PRV基因组进行了分析,确定了单一酶切位点AcclⅠ,用PCR方法扩增出上下游同源臂、EGFP表达盒并同BAC质粒一起克隆到p UC_(18)质粒,获得转移载体;将经限制性内切酶AcclⅠ处理过的病毒全基因组连同转移载体共同转染BHK21细胞,获得重组病毒;利用PCR检测、电镜观察及生长曲线测定对野毒与重组毒的基本特性进行了比较。结果表明:重组病毒可以稳定地表达绿色荧光,BAC在传代过程中能够稳定存在;重组病毒在电镜下的形态与野毒未见差异,其生长曲线也基本同野毒吻合。说明成功构建的编码基因完整的PRV细菌人工染色体可用于该病毒的结构生物学及致病机理研究。
- 陈利红王靖飞
- 关键词：EGFP
- 反向遗传学技术在流感病毒研究和防控中的应用被引量：3
- 2015年
- 流感病毒严重危害动物和人类健康.完全以质粒为基础的反向遗传系统的建立在流感病毒研究和防控领域是一个具有里程碑意义的事件.作为一个强有力的工具,反向遗传技术的应用拓宽和加深了流感病毒的基础和应用研究,在人流感和动物流感的防控中发挥了重要的作用.本文简要回顾了流感病毒反向遗传技术的发展历程,重点介绍了该技术在流感病毒致病性、跨宿主传播以及疫苗研制方面的研究进展.
- 李呈军陈化兰
- 关键词：反向遗传技术流感病毒疫苗研制
- 猪链球菌乳酸脱氢酶基因的原核表达及重组蛋白的反应原性研究
- 2015年
- 为了验证双向电泳筛选出的7型猪链球菌WH分离株免疫相关蛋白乳酸脱氢酶的反应原性,本实验采用克隆表达的方法对其进行研究。根据质谱鉴定的NCBI登录号查找乳酸脱氢酶基因序列,并设计特异性引物,对乳酸脱氢酶基因进行扩增,克隆入p ET30a载体,构建重组质粒p ET30a-LDH,测序后转化入大肠埃希氏菌中。用IPTG进行诱导重组菌,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。SDS-PAGE分析结果显示表达的重组融合蛋白相对分子量为41ku;Western blot分析结果显示该重组蛋白可与7型猪链球菌WH分离株多克隆抗体发生特异性血清学反应。这表明表达的重组LDH蛋白具有良好的反应原性,为预防和控制猪链球菌病提供有效的疫苗候选分子奠定基础。
- 高明明王淑杰王俊金家民张璐刘永刚李爱东陶冶李莉姜成刚王刚申红
- 关键词：猪链球菌乳酸脱氢酶反应原性原核表达
- SPF鸡各组织中流感病毒唾液酸受体的分布被引量：2
- 2015年
- 为了解SPF鸡体内各组织中流感病毒唾液酸受体分布状况,本研究采用凝集素免疫荧光组织染色的方法,系统检测了流感病毒唾液酸受体在SPF鸡呼吸系统、消化系统以及其它系统各组织中的分布,并进行半定量分析。结果表明,大部分组织中均同时存在唾液酸α2,3-半乳糖受体与唾液酸α2,6-半乳糖受体,只有少部分组织仅存在其中一种受体,这种受体分布的广泛性与流感病毒组织噬性相一致;但鼻甲与喉头中唾液酸受体明显低于许多其他组织,这也表明不能简单的通过唾液酸受体的有无或者密度高低来判定病毒在各组织中的实际分布与复制增殖情况,或许还有其他机制参与了病毒入侵与增殖的过程。
- 刘兵黄冬陈普成柳金雄姜永萍陈化兰
- 关键词：禽流感病毒免疫组化
- 禽2型副黏病毒分离株Suiling/53的致病性研究
- 2015年
- 为评估从暗胸朱雀中分离的一株禽2型副黏病毒APMV-2/Procarduelis nipalensis/China/Suiling/53/2013(Suiling/53)的致病性,本研究分别对该病毒的鸡胚平均致死指数(MDT)、脑内致病指数(ICPI)及对4周龄SPF鸡和4周龄BALB/c小鼠的感染能力进行测定。结果显示该病毒株的MDT为120 h;ICPI为0;将含有病毒的尿囊液点眼滴鼻接种4周龄SPF鸡后未出现明显临床症状或死亡,而分别从感染后2 d的气管组织、小肠、脑及感染4 d后的肺脏、气管、心脏中分离出该病毒;在BALB/c小鼠感染试验中,未出现明显临床症状,并且未从采集的组织中分离到该病毒。本研究结果表明病毒株Suiling/53对SPF鸡呈低致病力,而对BALB/c小鼠可能无感染性。
- 檀群松王靖飞
- 表达H7N9亚型禽流感病毒HA基因DNA疫苗对鸡免疫保护效力的研究被引量：4
- 2014年
- 防控H7N9禽流感病毒(AIV)疫苗研制是必要的技术储备,本研究根据A/Anhui/1/2013(H7N9)株的HA基因进行了密码子优化和全基因合成,克隆于pVAX1中构建真核表达重组质粒pVAH7,将其作为DNA疫苗进行SPF鸡的免疫保护效力评价。采用60μg/羽剂量的pVAH7单次或加强免疫3周龄SPF鸡;首免7周后,以106EID50的A/Chicken/Shanghai/S1053/2013(H7N9)通过鼻腔接种途径攻毒。结果显示,pVAH7单次和加强免疫均可以有效诱导血凝抑制(HI)和中和(NT)抗体的产生。而且NT抗体水平与HI抗体水平呈正相关,并在免疫初期(3周)显著高于相对应的HI抗体水平;单次免疫组攻毒后第5 d在泄殖腔部位仍可以分离到病毒,加强免疫组鸡在攻毒后5 d则检测不到病毒,而对照组在感染后3 d^7 d均可分离到较高滴度的病毒。本研究结果表明,pVAH7能够对SPF鸡提供有效的保护作用,可以作为防制H7N9亚型禽流感的后备DNA疫苗。
- 单继艳刘兵柳金雄陈普成张乾义谷春阳曾显营姜永萍陈化兰
- 关键词：DNA疫苗保护效力
- 基于随机PCR的未知病毒检测方法的建立及应用
- [目的]为解决临床上新发病毒性传染病难以快速诊断的难题。[方法]本研究利用新城疫病毒阳性尿囊液样品对核酸酶使用量进行了摸索，确定了除去宿主和游离核酸的最佳核酸酶使用量，根据临床样品的特点，确定了富集临床样品中病原微生物的...
- 于春微王靖飞
- 关键词：未知病毒进化分析
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建被引量：7
- 2014年
- 为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用Gateway LR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK+共同参与基因片段互换反应,构建重组粘粒f5354-VP2。f5354-VP2与其他4个相互重叠覆盖HVT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞,并拯救出重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,每隔5代采用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHVT-VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 李奇蒙陈普成柳金雄姜永萍王笑梅田雨胡永浩陈化兰
- 关键词：传染性法氏囊病毒火鸡疱疹病毒VP2
