广州市科技支撑计划项目(2008Z1-E391)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：王萍李珍魏威董文其刘帆更多>>
- 相关机构：广州市嘉合生物技术有限公司南方医科大学更多>>
- 发文基金：广州市科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IgE低亲和力受体基因的克隆、表达及初步鉴定
- 2010年
- 目的利用基因重组的方法建立IgE低亲和力受体(FcεRⅡ)基因的原核表达系统。方法用RT-PCR方法从过敏性疾病病人外周血淋巴细胞扩增FcεRⅡcDNA基因,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,构建原核表达载体FcεRⅡ-pGEX-4T-1,将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta,诱导表达FcεRⅡ蛋白,通过割胶回收纯化,并用Western blot检测FcεRⅡ的表达。结果测序表明所扩增FcεRⅡcDNA基因,与已报道的序列一致。获得的重组蛋白经Western blot鉴定可以和人IgE特异性结合。结论成功构建了FcεRⅡ-pGEX-4T-1表达载体,获得了能和人IgE特异性结合的重组蛋白,为下一步FcεRⅡ单克隆抗体的制备及应用研究打下了基础。
- 尹晴陈白虹邱国真付琛颖董文其魏威李珍朱勇王萍
- 关键词：IGE
- 半固体培养基法制备单抗的可行性研究被引量：5
- 2010年
- 目的建立稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。方法常规细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基重悬细胞沉淀,通过优化甲基纤维素半固体培养基中甲基纤维素、血清及L-谷氨酰胺三种成分的浓度,建立稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。并进行有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞的对照实验。阳性克隆扩大培养,ELISA检测后冻存,再次复苏后ELISA检测呈阳性为稳定杂交瘤细胞株。结果甲基纤维素三种浓度中,甲基纤维素浓度1.0%和1.2%时获得的杂交瘤细胞团个数约为甲基纤维素浓度1.25%时的2倍。而甲基纤维素浓度1.2%时细胞团固定效果较甲基纤维素浓度1.0%更好。通过对梯度稀释的SP2/0细胞培养后,选择半固体培养基中使用的胎牛血清浓度(25%),在半固体培养基中含4mmol/LL-谷氨酰胺比含2mmol/LL-谷氨酰胺得到多近一倍的杂交瘤。得到的5株阳性杂交瘤在扩大培养、冻存复苏后抗体分泌稳定,得到5株稳定阳性杂交瘤细胞株。有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞对照实验显示半固体培养基法可节省一半时间。结论建立了稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。该法缩短了克隆化的时间,节省了人力和材料,不需要添加饲养细胞和细胞因子,是一种稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。
- 刘帆王萍魏威李珍朱勇董文其
- 关键词：杂交瘤克隆
