宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目(KGX-19-10-16)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：罗红艳保莉兰晓梅张彬更多>>
- 相关机构：宁夏医科大学日照市中心医院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TFP5保护高糖诱发的胰岛β细胞损伤
- 2014年
- 目的探讨TFP5对高糖诱发的周期素依赖性蛋白激酶-5(Cdk5)过度活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6,将TFP5转染到Min6细胞,空病毒载体为对照,比较转染率,并测定Cdk5激酶活性。将细胞分为低糖组(5 mmol·L-1)、高糖组(25mmol·L-1)和高糖+TFP5组,观察3组细胞中Cdk5激酶活性,并通过检测细胞凋亡标记Bax/Bcl-2评估细胞存活情况。结果 TFP5可有效转导进入Min6细胞内;高糖可诱导Cdk5过度活性,TFP5抑制高糖诱导的Cdk5过度活性;高糖刺激下Min 6细胞的Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2升高,细胞凋亡增加,而加入TFP5后可以减低Bax/Bcl-2的比值,减少细胞的凋亡。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡,具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。
- 张霞张彬郑亚莉李博郭江涛曹旭芹
- 关键词：周期素依赖性蛋白激酶5葡萄糖胰岛素细胞凋亡
- TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶过度激活及胰岛β细胞凋亡的影响
- 2014年
- 目的：探讨TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶5（Cdk5）活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6。将TFP5转染Min6细胞，分别用免疫印迹和免疫荧光观察其表达。实验分3组：低糖（5mmol/L）组，高糖（25mmol/L）＋空病毒载体（EV）组和高糖（25mmol/L）＋TFP5组，分别用同位素标记法测定3组细胞内Cdk5激酶活性；用酶联免疫吸附法测定3组细胞胰岛素分泌水平；用免疫印迹法测定胰岛β细胞凋亡。结果（1）表明TFP5来源和它的分子序列；（2）TFP5在Min6细胞内表达良好；（3）在高糖＋TFP5组Cdk5的活性明显低于高糖＋EV组（ P＜0.01），而且在高糖＋TFP5组胰岛素分泌明显高于高糖＋EV组（P＜0.01）；（4）在高糖组Min6细胞的Bax表达增加，Bcl-2表达减少，Bax/Bcl-2比值升高，细胞凋亡增加（P＜0.01，vs 低糖组），而加入TFP5后，Bax表达减少，Bcl-2表达增加，Bax/Bcl-2的比值减低（P＜0.01，vs 高糖组），细胞的凋亡减少。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡，从而恢复胰岛素分泌，具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。
- 张霞付海霞郑亚莉
- 关键词：葡萄糖胰岛素细胞凋亡
- 以Cdk5为靶点探讨Cdk5活性抑制肽CIP在神经细胞和胰岛β细胞的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨周期性依赖性蛋白激酶5(Cdk5)的活性抑制肽(CIP)在老年退行性疾病中的治疗作用及其机制。方法体外培养大鼠E18胚胎大脑皮质神经元细胞(以下简称神经细胞)和Min6小鼠胰岛细胞(以下简称胰岛细胞)。应用基因克隆CIP质粒,转入腺病毒,转染细胞。(1)根据是否导入CIP基因分为空载体组(EV组)和CIP转染组。(2)应用双氧水(H2O2)刺激神经细胞;应用不同浓度的葡萄糖(5mmol/L和25mmol/L)刺激胰岛细胞,分为对照组、H2O2组(或高糖组)、H2O2+CIP组(或高糖+CIP组)。用免疫印迹和免疫荧光检测基因的表达和细胞凋亡情况;同位素标记测定酶的活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定胰岛素的分泌水平。结果 H2O2刺激神经细胞1h后,可诱发p25表达,引起Cdk5过度活性,导致Tau蛋白过度磷酸化从而诱发细胞凋亡增多。CIP转染组较H2O2组Cdk5的活性降低(P<0.01);Tau蛋白以及凋亡相关蛋白的表达水平也降低(P均<0.01);高糖刺激神经细胞4h,诱发p35表达增多,使Cdk5活性增高而抑制胰岛素的表达和分泌。CIP转染组较高糖组Cdk5的活性降低(P<0.01);胰岛素的表达量和胰岛素的分泌水平亦明显增高(P<0.01)。结论 (1)在神经细胞中,CIP可以降低由于p25导致的Cdk5的过度活性,减少Tau蛋白的过度磷酸化,从而保护神经细胞,减少凋亡;(2)在胰岛细胞中,CIP通过抑制高糖引起的Cdk5过度激活状态,增加胰岛素的分泌。这可能是CIP在老年退行性疾病中起到保护性作用的机制之一。因此,CIP可能成为一个非常有前景的治疗老年退行性疾病(如老年痴呆和糖尿病)的新药物。
- 郑亚莉陆晓华保莉罗红艳曹丽李博
- 蛋白激酶5过度激活诱发β细胞凋亡和调节胰岛素分泌的机制研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨高糖诱导细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)过度激活在胰岛β细胞凋亡及胰岛素分泌调节中的作用机制。方法体外培养Min6小鼠胰岛β细胞。采用不同浓度的葡萄糖(5 mmol/L组、20 mmol/L组和30mmol/L组)刺激胰岛β细胞6 h,收取和固定细胞,行免疫印迹和免疫荧光法测定p35的表达;将p35基因克隆到腺病毒载体中,将p35病毒和空载体病毒(EV)分别转染到胰岛β细胞中(p35组和EV组),测定p35蛋白表达、CDK5活性及胰岛素分泌水平;采用CDK5抑制剂(p35+Ros组)进行抑制试验;采用细胞凋亡相关抗体Cleavedcaspase 3测定胰岛β细胞凋亡。结果 20 mmol/L组和30 mmol/L组p35的表达较5 mmol/L组升高,30 mmol/L组p35的表达较20 mmol/L组升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度葡萄糖培养的胰岛β细胞CDK5的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。20 mmol/L组和30 mmol/L组胰岛β细胞CDK5活性较5 mmol/L组增高,30 mmol/L组胰岛β细胞CDK5活性较20 mmol/L组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。20 mmol/L组和30 mmol/L组在刺激6 h较2 h胰岛素分泌均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。p35组p35表达较EV组增高,p35组可见p25条带,p35组CDK5活性较EV组增高,p35组胰岛素分泌水平较EV组增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。EV组和p35+Ros组细胞凋亡相关抗体Cleaved caspase 3表达较p35组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。EV组和p35+Ros组胰岛素分泌较p35组增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度的葡萄糖可以抑制胰岛细胞正常分泌胰岛素。高糖环境下p35的表达增加进而诱发p25的表达,引起CDK5的过度激活和胰岛细胞的凋亡从而抑制胰岛素的分泌,可能是其作用机制之一。
- 郑亚莉陆晓华曹丽王慧李博鄂静保莉罗红艳兰晓梅
- 关键词：胰岛素分泌细胞胰岛素细胞凋亡
