国家自然科学基金(30672437)
- 作品数：9 被引量：13H指数：2
- 相关作者：罗以勤姚丽娟赵亮孔建新濮跃晨更多>>
- 相关机构：安徽医科大学附属省立医院安徽医科大学安徽省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省卫生厅青年科研基金安徽省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 类风湿关节炎患者血清内皮抑素、碱性成纤维细胞生长因子、抗环瓜氨酸肽抗体的联合检测与应用被引量：7
- 2010年
- 目的检测类风湿关节炎(RA)患者血清中内皮抑素(endostatin)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和抗环瓜氨酸肽(anti-CCP)抗体水平,并探讨其在RA中的临床意义。方法选取RA患者30例,健康对照30例。用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者血清中endostatin、bFGF和anti-CCP抗体水平。结果①RA患者血清中endostatin的水平(62.57±24.96)ng/ml,明显高于健康对照组(43.59±8.58)ng/ml(P<0.001),bFGF的水平(24.46±11.50)pg/ml明显高于健康对照组(16.07±4.12)pg/ml(P<0.002),RA患者血清中anti-CCP(17.44±4.35)RU/ml也明显高于健康对照组(2.32±0.97)RU/ml(P<0.001)。②相关性分析显示en-dostatin水平与bFGF呈高度正相关(r=0.934,P<0.01),endostatin水平与anti-CCP抗体呈高度正相关(r=0.836,P<0.01),bFGF与anti-CCP抗体(r=0.789,P<0.01)具有中度相关性。结论endostatin、bFGF及anti-CCP抗体对RA具有较好的敏感性和高度的特异性,联合检测endostatin、bF-GF、anti-CCP抗体可作为RA患者及RF阴性RA患者的诊断指标。
- 赵亮罗以勤孔建新聂江玲马筱玲濮跃晨姚丽娟董行
- 关键词：内皮抑素类成纤维细胞生长因子2
- 重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2009年
- 目的构建重组人肿瘤抑素分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人tumstatinc DNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin。以pGEM-T/tumstatin为模板扩增含Ⅳ型胶原信号肽sig基因的sig-tumstatin基因片段,sig-tumstatin片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tum-statin基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-tumstatin真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-tumstatin片段(822bp)序列与报道的序列完全一致。酶切鉴定的结果表明含重组人肿瘤抑素的pIRESneo3/sig-tumstatin表达载体构建成功。转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin的CHO-K1分泌表达了重组人tum-statin。另外,从生长曲线结果来看,转染了pIRESneo3/sig-tumstatin真核表达载体和空载体的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢一些。结论成功地构建了重组人tumstatin分泌型真核表达载体并获得能稳定表达tumstatin的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。
- 赵亮罗以勤孔建新聂江玲姚丽娟董行濮跃晨马筱玲
- 关键词：真核细胞
- Tumstatin-EGFP在CHO细胞中的表达和活性分析
- 2008年
- 目的分析融合蛋白tumstatin-EGFP在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中的表达及生物学活性。方法经过酶切和测序正确的真核表达载体PIRESneo3/STL-EGFP、PIRES-neo3/sig-EGFP和空载体稳定转染CHO细胞后,用Western blot从细胞上清液中检测融合蛋白的表达、倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。通过生长曲线分析外源基因的导入对CHO细胞生长的影响,MTT法和管状形成抑制试验评估tumstatin-EGFP融合蛋白的tumstatin样活性,体外靶向试验验证tumstatin能否携带融合蛋白特异性结合内皮细胞。结果获得了稳定转染的CHO细胞系。生长曲线表明转染后的较未转染的CHO细胞生长缓慢,MTT试验和管状形成抑制试验分别证实了融合蛋白tumstatin-EGFP具有抑制内皮细胞增殖,明显抑制血管管状结构的形成的作用;体外靶向试验也验证了tumstatin-EGFP能够特异性结合内皮细胞。结论重组真核表达载体在CHO细胞获得稳定表达,融合蛋白tumstatin-EGFP的表达不影响tumstatin和EGFP各自的生物学活性,并且在体外tumstatin能特异性携带EGFP靶向内皮细胞,为进一步tumstatin及其融合蛋白的研究奠定基础。
- 姚丽娟罗以勤孔建新赵亮濮跃晨马筱玲
- 关键词：绿色荧光蛋白质类
- 重组人肿瘤坏死因子α分泌型真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的构建人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并检测其在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达。方法以pGEM-T/sig-tumstatin为模板,扩增与TNF带重叠区的型胶原信号肽sig基因片段,以PBV220-TNF为模板,扩增与sig带重叠区的TNF基因片段,以上述2个扩增产物片段为模板,重叠区扩增拼接法(SOEing)扩增得到sig-TNF。sig-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切的pIRE Sneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定,对获得的sig-TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-TNF真核表达载体转染到CHO-K1,并对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-TNF片段(558bp)序列与报道的序列完全一致,酶切鉴定结果表明含人肿瘤坏死因子的重组pIRE Sneo3/sig-TNF表达载体构建成功,转染重组pIRE Sneo3/sig-TNF的CHO-K1分泌表达了人肿瘤坏死因子rhTNF-α。转染了pIRE S-neo3/sig-TNF真核表达载体和空载体的CHO-K1和未转染CHO-K1细胞的生长速度没有差别。结论成功构建了重组人肿瘤坏死因子rhTNF-α分泌型真核表达载体,并获得能稳定表达rhTNF-α的CHO-K1,为开展下一步的实验奠定了基础。
- 赵亮罗以勤姚丽娟孔建新濮跃晨孙安源张林杰
- 关键词：肿瘤坏死因子Α真核细胞中国仓鼠卵巢细胞
- 肿瘤抗血管治疗的研究进展
- 2009年
- 实体肿瘤的生成依赖于肿瘤本身新生血管的形成,肿瘤血管的再生受到众多血管刺激及抑制因子的调控。随着肿瘤血管再生理论和相应基础临床研究的快速进展,抗肿瘤血管生成治疗已成为肿瘤综合治疗中的一项重要内容。目前,已有多种血管生长抑制因子如血管抑素、肿瘤抑素等用于临床治疗研究,一些传统的抗血管生成药物也因此开辟了新的研究应用领域。现对血管生成(angiogenesis)在肿瘤发生发展中的作用、肿瘤治疗研究中的意义、抗肿瘤血管生成基因治疗研究中的进展作一综述。
- 赵亮罗以勤
- 关键词：肿瘤血管生成抑制剂
- 重组人tumstatin的原核生物表达和多克隆抗体制备
- 2010年
- 目的原核生物表达可溶性的tumstatin抗原并制备相应的多克隆抗体。方法利用原核表达载体pMAL-tumstatin在大肠埃希菌BL21中表达tumstatin,经Amylose Resin亲和层析柱和Q Sepharose Fast Flow柱纯化tumstatin,以纯化蛋白免疫新西兰兔,获得抗tumstatin多克隆抗体。利用western blot和ELISA法对多克隆抗体进行特异性和效价检测。结果tumstatin蛋白表达成功。SDS-PAGE分析表明其为可溶性表达。成功获得了tumstatin纯品及兔抗tumstatin多克隆抗体。ELISA法表明多克隆抗体效价>5 000。western blot检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论成功表达、纯化tumstatin蛋白,并获得高特异性、高效价兔抗tumstatin多克隆抗体,为其在临床免疫学检测应用奠定了基础。
- 罗以勤聂江玲赵亮姚丽娟孔建新濮跃晨
- 关键词：TUMSTATIN蛋白质纯化多克隆抗体
- 重组融合蛋白Tumstatin-TNF-α分泌型真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的构建重组融合蛋白Tumstatin-TNF-α的分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达。方法以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人tumstatin cDNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin。利用PCR从pGEM-T/tumstatin和PBV220-TNF-α载体中分别扩增出sig-tumstatin-linker和linker-TNF片段,将其克隆得到sig-tumstatin-linker-TNF片段,sig-tumstatin-linker-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tumstatin-linker-TNF基因片段及重组载体进行验证。将重组sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测。结果所获得的sig-tumstatin-linker-TNF片段(1.32kb)序列与报道的序列完全一致。酶切鉴定的结果表明含肿瘤抑素基因的重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF表达载体构建成功。转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF的CHO-K1表达了肿瘤抑素融合蛋白tumstatin-linker-TNF。从生长曲线结果来看,转染pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体和转染pIRESneo3的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢。结论成功地构建了重组人肿瘤抑素融合蛋白的真核表达载体,并获得能稳定表达人肿瘤抑素融合蛋白的CHO-K1。
- 赵亮姚丽娟孔建新濮跃晨孙安源罗以勤张林杰
- 关键词：重组融合蛋白质类真核细胞
- Tumstatin-EGFP真核表达载体构建及稳定转染CHO细胞系的建立
- 2008年
- 目的构建重组tumstatin-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的分泌型真核表达载体质粒,建立稳定转染的中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1)。方法利用重叠多聚酶链反应(PCR)技术从pGEM-T/STL质粒和pEGFP-C2质粒中扩增出STL-EGFP,用DNA重组技术将片段定向插入pIRESneo3质粒中,经酶切和序列验证正确后,用lipo-fectamine 2000转染CHO-K1细胞,通过G418筛选建立稳定转染的CHO细胞系,用逆转录-PCR、Western blot检测tumstatin-EGFP的表达,用倒置荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达。结果重组真核表达载体正确构建并在CHO细胞获得稳定表达,tumstatin-EGFP基因整合入细胞基因组DNA,培养液上清有融合蛋白tumstatin-EGFP的分泌,绿色荧光蛋白的表达高达95%以上。结论成功构建了质粒PIRESneo3-STL-EGFP,获得稳定表达tumstatin-EGFP的细胞系。
- 姚丽娟罗以勤孔建新赵亮常珍濮跃晨马筱玲
- 关键词：肿瘤抑素增强型绿色荧光蛋白
- 肿瘤抑素的研究进展被引量：3
- 2009年
- 肿瘤抑素(tumstatin)是一种内源性血管生成抑制剂,是整合素依赖性的具有抗肿瘤血管生成和抑制肿瘤血管内皮细胞增殖的活性蛋白。越来越多的研究使人们对tumstatin体内外的生物学特性、复杂的抗肿瘤信号机制和与整合素之间的联系都越来越了解;而且基因治疗方面的研究进展也让人们认识到tumstatin巨大的临床价值。现就这几方面的基础研究和临床新进展作一综述。
- 姚丽娟罗以勤
- 关键词：肿瘤血管生成抑制剂
