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微孔杂交快速检测黄热病及乙型脑炎病毒方法的建立被引量：6: 2004年; 任瑞文方美玉洪文艳刘建伟田小东程刚锋林立辉; 关键词：乙脑病毒黄热病病毒流行性乙型脑炎病毒 PCR-ELISA

佛山市登革2型病毒流行株结构基因序列测定及分析被引量：1: 2006年; 目的对我国登革2型病毒1993年广东省佛山市流行株GD06/93结构蛋白基因进行序列测定及分析,追踪其地域来源、基因组结构与致病性的关系,为研究开发登革病毒新型疫苗奠定基础。方法根据登革2型国际标准株NGC序列,设计2对重叠引物,RT-PCR扩增,分别克隆到pMD18-T载体,转化受体菌DH5α,挑取阳性克隆进行PCR、酶切鉴定及序列测定。结果GD06/93株结构基因序列长度为2325bp,编码775个氨基酸。与其它登革2型病毒株TSV01、Taiwan-1008DHF、NGC、44、ThD2_0038_74、ThNH81/93、gd08/98、04、Cuba165/97及S1进行比较,其核酸序列同源性分别为97%、96%、95%、95%、95%、94%、94%、92%、92%、91%。结论GD06/93病毒株的结构基因序列与已发表的其它登革2型病毒株同源性很高。在比较的6株登革2型病毒株中,GD06/93株与同期在澳大利亚流行的TSV01株同源性最高。; 李建军任瑞文马安德徐晓立沈梅蒋忠军; 关键词：登革病毒结构基因

套式逆转录聚合酶链反应在黄热病毒快速检测中的应用被引量：8: 2005年; 目的建立灵敏、特异的套式逆转录聚合酶联反应(RTPCR)快速检测黄热病毒方法。方法参照黄热病毒标准株D17序列设计套式引物,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性,随后对镁离子、dNTP及引物浓度,PCR反应条件进行优化,建立稳定、特异的套式RTPCR快速检测黄热病毒方法,并以同属于黄病毒科的登革病毒1～4型、流行性乙型脑炎病毒为对照,验证其特异性。结果外引物扩增可获得404bp左右的特异性扩增片断,阴性对照毒株未见设计大小的扩增片断,但可见非特异性片断;内引物扩增可获得349bp左右片断,阴性对照无扩增条带。结论套式RTPCR可快速、灵敏、特异的检测黄热病毒。; 任瑞文郝丽方美玉程刚锋洪文艳刘建伟田小东林立辉; 关键词：黄热病毒套式RT-PCR 逆转录聚合酶联反应流行性乙型脑炎病毒病毒方法标准株

微孔杂交快速检测主要黄病毒方法的建立被引量：2: 2006年; 登革病毒1～4型（dengue virus type 1-4，DV1-4）、流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）及黄热病病毒（yellow fever virus，YFV）均为黄病毒属的重要传染病病原，其流行季节及临床症状都极为相似，且暴发日益频繁，发展特异、敏感的快速诊断及鉴别诊断方法，对这类疾病的预防及控制具有重要意义。本研究在对其基因组序列系统分析的基础上，建立了快速检测及鉴别诊断上述病毒的微孔杂交（PCR-ELISA）方法。; 徐晓立任瑞文方美玉刘建伟洪文艳; 关键词：病毒方法 ENCEPHALITIS 流行性乙型脑炎病毒黄热病病毒 FEVER

多重逆转录-聚合酶链反应快速检测登革病毒及其临床应用被引量：9: 2005年; 目的　建立登革 1～ 4型病毒的多重逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)快速检测及分型方法。方法　参照登革 1～ 4型病毒核酸序列设计多重RT PCR引物 ,并检索国际基因序列数据库初步验证其特异性 ,随后对PCR反应条件进行优化 ,以同属于黄病毒科的黄热病毒、流行性乙型脑炎病毒为对照 ,验证其特异性。并对 2 0 0 3年 30份临床疑似登革患者血清标本进行了检测 ,阳性片段克隆测序验证扩增片段特异性。结果　采用多重PCR引物对登革 1～ 4型病毒进行扩增 ,分别获得 2 95、2 37、118、347bp片段 ,与设计相符 ;而黄热病毒及流行性乙型脑炎病毒均无非特异性扩增条带 ,对引物的相关性实验结果表明引物之间不会因相互干扰而出现假阳性结果 ,30份疑似患者血标本RT PCR扩增阳性率为 83.3% (2 5 / 30 ) ,其核酸序列与登革 1型病毒柬埔寨株以及中国 1997、1999年流行株GD14 / 97、GD0 5 / 99同源性分别为 97%、97%、98%。结论　实验证明 ,所建立的多重PCR方法能够快速地检测和鉴定登革 1～ 4型病毒 ,为登革病毒的检测及分型提供了一种方便易行的方法。; 任瑞文方美玉刘建伟王军军郝丽程刚锋洪文艳田小东; 关键词：登革病毒黄热病毒 RT-PCR 扩增片段特异性多重PCR

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广东省自然科学基金(04001618)