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信号肽与猪链球菌GDH融合的DNA疫苗构建及体液免疫研究被引量：4: 2008年; 目的设计、构建猪链球菌GDH真核表达载体并研究DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫。方法在猪链球菌保护性抗原GDH基因5′末端引入人IL-2信号肽序列,通过PCR进行拼接,得到的融合DNA片段经过酶切克隆入质粒pcDNA3.0,构建核酸疫苗重组质粒pcDNA3.0-gdh。通过肌肉注射途径将重组质粒pcDNA3.0-gdh免疫小鼠,经ELASA实验和Western blot进行检验。结果构建的表达载体在小鼠体内表达出正确的目的蛋白,能诱导体液免疫。结论构建的DNA疫苗能够引起体液免疫,为研究猪链球菌核酸疫苗提供分子工具。; 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军郑峰李先富唐家琪; 关键词：猪链球菌 DNA疫苗信号肽

链球菌超抗原生物学特性研究进展被引量：5: 2009年; 链球菌超抗原在多种链球菌感染导致的疾病中发挥着重要作用。随着研究的深入,对链球菌的认识也取得了新的突破。文中对当前研究证实的链球菌超抗原成员及其结构特征、致病机制、表达调控进行了综述,并展望其在肿瘤治疗中的意义。; 邵珠卿潘秀珍唐家琪; 关键词：链球菌超抗原肿瘤治疗

2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究: 目的分析猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)ZnuA基因在不同血清型S.suis菌株中的分布情况,并研究ZnuA蛋白的保护作用,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过PCR扩增,检...; 李先富潘秀珍韩明月王长军唐家琪; 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用; 文献传递

猪链球菌2型菌毛骨架蛋白编码基因SSU2101敲除突变株的构建及其生物学功能被引量：3: 2010年; 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33菌毛骨架蛋白(Backbone protein,BP)编码基因SSU2101敲除突变株。采用引物特异性PCR分析、Southern杂交及RT-PCR等方法鉴定,证实成功构建了BP基因缺失突变株。生物学特性显示,突变株的菌落形态、溶血活性以及染色特性方面与野生株之间均无明显差异。小鼠致病性试验结果显示,突变株的毒力比野生株显著减弱。研究结果提示菌毛在S.suis2感染致病过程中起重要作用,为系统研究S.suis2菌毛分子装配机制及其生物学功能奠定了基础。; 秦跃红王长军陈红娜潘秀珍唐家琪; 关键词：猪链球菌2型基因敲除

gdh基因在猪链球菌中的分布及重组GDH的抗原性研究被引量：7: 2008年; 目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备多克隆抗体,Western blot方法分析S.suis各血清型菌株与多克隆抗体的反应以及实验感染S.suis2型的猪血清与重组GDH的反应情况。结果在S.suis35个血清型标准株中,除了22、26、27、29、32及34型以外,其余包括1、2、1/2、7、9和14型在内的29个血清型、61株国内外S.suis2型分离株全部扩增出目的条带。用重组GDH免疫小鼠,在小鼠血清中均检测到抗GDH的抗体;Western blot结果显示,全部被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带,6份实验感染猪血清均能与重组GDH产生反应条带。结论重组GDH具有免疫原性和反应原性,该蛋白有可能作为建立诊断试验的候选抗原,为进一步开展相关的血清学诊断方法和疫苗研究奠定基础。; 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军李先富郑峰唐家琪; 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶抗原

2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建被引量：1: 2009年; 通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.; 史沛举郝喜娜葛俊超王长军王晶潘秀珍唐家琪; 关键词：2型猪链球菌

2型猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1: 2010年; 目的制备抗猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogen-ase,GDH)的单克隆抗体。方法分别以2型S.suis全菌细胞和重组GDH蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株并克隆化;免疫印迹(Western blot)鉴定GDH单克隆抗体的特异性;制备小鼠腹水并进行抗体效价测定。结果细胞融合后经ELISA筛选获得分泌的阳性细胞株,经过有限稀释克隆化筛选,获得4株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单抗腹水的抗体效价均在1∶102400以上。结论本研究获得了4株能稳定分泌抗体且其分泌的抗体能够与GDH蛋白进行特异性反应的单克隆抗体细胞株,所获得特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,也能够进一步用于猪链球菌感染血清学诊断方法研究。; 李先富潘秀珍赵华梅王长军唐家琪; 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体

猪链球菌反应调节因子CovR单克隆抗体的制备与鉴定被引量：9: 2010年; 目的CovR是一个全局性反应调控因子,对猪链球菌的致病性具有重要调控作用。文中制备抗2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)反应调节因子CovR蛋白单克隆抗体(mAb),以便对CovR的调控机制进行系统研究。方法以基因工程重组CovR蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选可稳定分泌抗CovR mAb的杂交瘤细胞株。通过间接ELISA法和Western blot鉴定抗CovR mAb的特异性后,制备小鼠腹水并测定单抗腹水的抗体效价。单抗分型ELISA鉴定抗CovR单克隆抗体IgG亚类。结果获得2株能稳定分泌抗CovR mAb的的杂交瘤细胞株1A4和4D7,其培养上清抗体效价分别为1∶800、1∶1600,其相应单抗腹水的抗体效价分别为1∶819200、1∶1638400。mAb 1A4和4D7IgG亚类分别为IgG2b、IgGl。结论成功制备了抗CovR mAb,为进一步研究CovR的调控机制奠定了基础。; 李先富郝喜娜韩明月王长军唐家琪潘秀珍; 关键词：猪链球菌单克隆抗体

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南京军区医学科技创新课题(07Z045)