河南省重大公益性科研项目(081100910700)
- 作品数：12 被引量：27H指数：3
- 相关作者：王磊谢来峰樊晋宇邢雪琨张富春更多>>
- 相关机构：科技部河南师范大学新疆大学更多>>
- 发文基金：河南省重大公益性科研项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 液压转基因技术应用于大鼠再生肝转基因实验被引量：6
- 2009年
- 目的探讨液压转基因技术（HDT）应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法。方法以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除（PH）,于PH后不同恢复时间称量大鼠体重（g）和再生肝重（g）,计算肝系数（Lc）,并从Lc±Lc＊0%、＊5%、＊10%、＊15%、＊20%、＊25%、＊30%、＊35%等15组中找出最佳组,作为计算不同恢复时间再生肝最适注射质粒溶液量的校正系数（Trc）;取大鼠肝右叶中部组织制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数1万个细胞中的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率。结果PH后注射生理盐水和注射空质粒对肝再生的影响与对照（只进行PH）相比无显著差异。PH前液压转基因的合适时间是PH前≥12h;PH后所有时间均可进行液压转基因。PH后对肝再生大鼠进行液压转基因的转基因溶液体积为大鼠体重（g）×9%×1/3×相应的校正系数（Trc）。转入基因在体内的表达时间和丰度既受载体影响,又受插入的目的基因影响。结论液压转基因技术亦可有效地应用于大鼠再生肝转基因研究。
- 徐存拴邢雪琨杨献光朱秋实窦磊刘帅帅李幼张富春
- 关键词：肝再生基因表达
- 大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化被引量：2
- 2009年
- 为了解大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化,用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DENA)灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片和镜检.建模第1周大鼠肝脏的肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐.从第5周起肝窦扩张,肝细胞变性肿胀并有不同程度的脂肪变性,同时出现炎症细胞浸润.第8周时肝窦充血,肝细胞脂肪变性严重,并出现纤维组织增生和明显的肝细胞增生.第10周时肝小叶结构受到破坏,出现肝细胞增生性结节.第12周时门管区内有不同程度的卵圆细胞增生及结缔组织增生,伴随胆管增生.第16周时肝小叶结构消失,可见典型的假小叶结构,结节内肝细胞异常增生明显,出现"结中结",病理性核分裂相亦较多.第17周时肝肿瘤形成,且主要是肝细胞癌,癌细胞排列为索状、腺状、实片状.根据上述结果得出如下结论:用二乙基亚硝胺灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型方便有效,肝组织结构和病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用.
- 王磊李霄培徐军政高太新徐存拴
- 关键词：二乙基亚硝胺
- 大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化被引量：2
- 2009年
- 目的:系统了解大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化。方法:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片并镜检肝组织结构。结果:建模第1周大鼠肝脏中央静脉周围细胞内出现密集小脂滴,细胞有聚集和坏死现象。从第4周开始中央静脉周围脂变细胞越来越多,细胞内脂滴越来越大,细胞亦变大,同时出现炎症细胞浸润和纤维性增生。第8周时肝窦狭窄,肝叶的大部分细胞发生脂变,大脂滴居多,脂肪性肝炎和肝纤维化加重。第10周时脂变细胞达90%以上,其所含的绝大部分脂滴为大脂滴,将细胞核挤向一边。第12周时肝小叶结构完全消失,伴有假小叶形成和肝硬化早期症状。第15周时肝脏明显皱缩且与周围组织粘连严重,假小叶内出现纤维再分隔和肝细胞再生小结节,肝硬化加剧。脂变细胞内近80%的脂滴为大脂滴。第20周时肝脏颜色暗灰,肝叶完全粘连,结节明显,假小叶内的肝细胞干酪样坏死严重。结论:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型方便有效,肝组织结构和肝脏病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用。
- 谢来峰张延斌郭学强徐存拴
- 关键词：四氯化碳
- 液压转基因技术用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因实验被引量：1
- 2010年
- 目的探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠脂肪肝转基因的条件、方法。方法以不同速度将不同体积、浓度的绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1一次性注射到脂肪肝大鼠尾静脉,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞。结果在pEGFP-C1浓度为33mg/L、注射速度为2ml/s、注射液体积为大鼠体重的8.5%条件下,注射质粒后6h,各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高,其中,蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约占18%,左叶约占14%、中叶约占12.5%、右叶约占10%,尾状叶约占8%。转基因后24h绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞。结论大鼠尾静脉液压转基因技术可用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因研究,转基因的适宜条件为:质粒溶液浓度33mg/L,注射量占大鼠体重的8.5%,注射速度为2ml/s,观察转基因效果的适宜时间是转基因后6～24h。
- 徐存拴朱秋实邢雪琨郭学强白银辉
- 关键词：绿色荧光蛋白脂肪肝
- 大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：2
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌酶(lysozyme,LYZ)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT-PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白.初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.
- 丁博王磊谢来峰樊晋宇徐存拴
- 关键词：库普弗细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：4
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞,用RT-PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM.初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用.
- 张永晶谢来峰王磊樊晋宇徐存拴
- 关键词：肝星形细胞免疫磁珠标记蛋白
- 液压转基因技术应用于大鼠肝脏转基因实验被引量：6
- 2009年
- 目的探讨液压转基因技术（HDT）应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法。方法以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP—C1，于注射后不同时间取大鼠（各4只）各肝叶制备玲冻切片，在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况。结果在一次性注射浓度为30mg／L质粒、注射速度为2ml／s、注射体积为大鼠体重9％的条件下，注射pEGFP-C1质粒后6h，绿色荧光蛋白阳性细胞比例最高，占肝脏总细胞的20％以上，从24h起绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少，至72h时各肝叶均基本难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞。在上述最佳条件下，绿色荧光蛋白在各肝叶的表达情况是：蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为30％，左叶、中叶、右叶约为20％，尾状叶约为10％。结论液压转基因技术可应用于大鼠肝脏转基因，其适宜条件是：质粒溶液的浓度为30mg／L，注射量为大鼠体重的9％，注射速度为2ml／s，观察转染率的适宜时间是转基因后6～24h。
- 徐存拴邢雪琨谢来峰张明方方崔胜男王磊张富春
- 关键词：肝脏绿色荧光蛋白
- 大鼠肝纤维化及肝硬化成模过程中肝组织结构变化被引量：1
- 2009年
- 为了解大鼠肝纤维化及肝硬化成模过程中肝组织结构变化,用四氯化碳-白酒联合诱导法构建大鼠肝纤维化及肝硬化模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片和镜检.建模第1～3周,肝脏的汇管区扩大,出现纤维性增生,肝细胞发生脂肪变性.建模第4～6周,肝脏的汇管区周围形成纤维束.建模第7～9周,纤维束更明显,肝小叶结构紊乱.建模第10～12周,肝小叶结构更加紊乱,出现早期肝硬化迹象.建模第13～15周,肝小叶消失,假小叶出现,肝硬化形成.根据上述结果得出如下结论:皮下注射四氯化碳与口服白酒结合能有效诱导大鼠肝纤维化及肝硬化,肝脏组织结构与病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用.
- 张强伟邢纬王磊徐军政徐存拴
- 关键词：肝小叶
- 大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：2
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation 14,CD14)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT-PCR定量窦内皮细胞的CD14和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白.初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用.
- 王泽王磊谢来峰樊晋宇徐存拴
- 关键词：窦内皮细胞免疫磁珠标记蛋白
- 大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析被引量：1
- 2009年
- 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞(oval cell,OC).用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.
- 陆琼谢来峰王磊樊晋宇徐存拴
- 关键词：肝卵圆细胞免疫磁珠标记蛋白
