广东省兽医公共卫生公共实验室开放基金(GSKJ090201)
- 作品数：5 被引量：20H指数：2
- 相关作者：孙敏华胡奇林董嘉文吕殿红李林林更多>>
- 相关机构：广东省农业科学院广东省农业科学院动物卫生研究所华南农业大学更多>>
- 发文基金：广东省兽医公共卫生公共实验室开放基金广东省科技计划工业攻关项目广东省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立被引量：1
- 2012年
- 为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合。采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1。以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1∶10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1∶10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0。试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10%。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础。
- 孙敏华董嘉文吕殿红周秀蓉李林林胡奇林
- 关键词：单克隆抗体夹心ELISA
- 基因VIb亚型半番鸭源新城疫病毒基因组测序及分析
- 2012年
- 根据GenBank上发布的新城疫病毒基因组序列,设计了9对引物,对从福建福州地区发病半番鸭场分离的新城疫病毒FJ-SMD-03株进行了基因组cDNA扩增测序和分析.结果表明:FJ-SMD-03的基因组序列由15 192 nt组成,在NP基因非编码区比Lasota株多了6个核苷酸ACACTC;基因组由6个ORF组成,即3'-NP-P-M-F-HN-L-5'序列.BLAST结果显示:FJ-SMD-03基因组核苷酸与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008、pigeon/Italy/1166/00、AV324/96和dove/Italy/2736/00相似性最高,达94.9%～98.5%;与疫苗株Lasota、Mukteswar和B1的相似性最低,为80.7%～83.3%;与我国标准强毒株F48E8及2002年从福建番鸭中分离到的基因VIId亚型强毒株Muscovy duck/China(Fujian)/FP1/02相似性较低,分别为82.5%和87.1%.F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特征,进化树分析发现,FJ-SMD-03属于ClassⅡ类基因VIb亚型,证明鸭群中有VIb亚型NDV强毒株;FJ-SMD-03株NDV与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00亲缘关系较近,与carrier-pi-geon/Guangdong/2008形成一个小的进化分支,推测FJ-SMD-03株与carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00株来源于共同的祖代毒株,可能与鸽携带的病毒有关.
- 黄秋芳孙敏华陈少莺吕殿红董嘉文尚毅吴玄光胡奇林
- 关键词：新城疫病毒基因组
- 鹅细小病毒VP3基因的克隆及表达被引量：3
- 2013年
- 根据GenBank中的鹅细小病毒(GPV)全基因序列,设计并合成了1对特异性引物,利用PCR对GPV-Fos han-2009株的VP3基因进行了扩增。经酶切、连接、转化后,获得了pET32a-VP3重组表达载体。经BL21(DE3)原核表达显示,VP3蛋白为包涵体形式,37℃下该蛋白最佳I PTG诱导浓度为1.2 mM,最佳诱导时间为5 h。SDS-PAGE分析显示所表达的VP3融合蛋白的相对分子质量约80 kD。West ern Bl ot证实该蛋白能与番鸭抗GPV阳性血清反应,这为GPV血清学诊断方法的建立提供了物质基础。
- 孙敏华董嘉文李林林袁建丰邝瑞欢胡奇林
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因克隆
- 新城疫病毒分子流行病学研究进展被引量：15
- 2010年
- 新城疫在世界范围内已经引起了4次大流行,每次大流行都是由一种新基因型引起的。尽管新城疫病毒只有1个血清型,但其基因型众多。论文主要综述了新城疫病毒基因型的划分方法以及国内外不同时期新城疫的流行状况及其特点,分析了国内外流行毒株及流行趋势,目前在国内外三大家禽中主要流行基因Ⅶd亚型毒株,鸽群中主要流行基因Ⅵb亚型毒株,为我国新城疫的防控提供理论基础。此外,弱毒株在新城疫的传播中所起的作用也值得关注。
- 孙敏华胡奇林
- 关键词：新城疫病毒基因型分子流行病学
- 鸭瘟病毒UL35基因PCR方法的建立与初步应用被引量：1
- 2012年
- 本研究建立了检测鸭瘟病毒(Duck pl ague vi rus,DPV)的PCR方法,并运用建立的检测方法对分离毒株和人工感染样品进行临床应用检测。根据GenBank(登录号为EF643558)中的DPV UL35基因保守区域,设计合成了一对引物,以DPV疫苗株为模板,优化PCR反应条件,建立了一种快速、有效的DPVPCR方法。结果显示:该方法能从DPV中扩增到与预期大小相符,长度为354 bp的特异性片段,而对禽流感病毒(AIV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新城疫病毒(NDV)、番鸭细小病毒(MPV)、鹅细小病毒(GPV)等样品的扩增结果均为阴性;检测灵敏度达到470 ng病毒DNA。应用该方法对3株DPV分离株和6份由DPV BL8毒株人工感染鸭的肝脏和脾脏等组织进行PCR检测均为阳性。表明所建立的DPV PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于DPV的临床诊断和流行病学调查。
- 董嘉文孙敏华吕殿红胡奇林
- 关键词：鸭瘟病毒PCR
