浙江省科技计划项目(2007C33002)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王晓枫陈蔚青王普吴敏陈虹更多>>
- 相关机构：浙江树人大学浙江工业大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 重组链球菌噬菌体裂解酶PlyC A链工程菌高密度发酵
- 2010年
- 噬菌体裂解酶是噬菌体产生的细胞壁水解酶,能高效且特异性地杀死细菌.链球菌噬菌体裂解酶PlyC由A链与B链组成,对致病性β-溶血性链球菌有杀灭作用.为实现重组PlyC的A链工程菌BL21(DE3)/pET-32a(+)-PlyCA高效表达与高密度发酵,在摇瓶试验基础上,用5L自控发酵罐进行补料培养实验,确定优化工艺条件.结果表明:经0.8mmol/LIPTG诱导22h,最终菌体密度达OD600nm29以上,细胞干重达32g/L,重组蛋白PlyCA的表达占菌体总蛋白的30%.为PlyCA的下游纯化和中试规模研究奠定了基础.
- 叶军史益锋王晓枫蒋岚陈蔚青
- 关键词：裂解酶大肠杆菌高密度发酵
- 噬菌体裂解酶:抗菌作用与药物开发研究被引量：5
- 2009年
- 近几十年来,抗生素的滥用导致致病菌耐药性问题日益严重,已经对人类健康造成极大威胁。噬菌体裂解酶作为一种新的治疗手段开始受到人们关注。裂解酶是噬菌体在感染宿主菌末期表达的蛋白质,它通过水解细菌细胞壁的肽聚糖使子代噬菌体释放。已有实验证明裂解酶在体外能高效且特异性地杀死细菌。文中结合作者的研究工作,综述了噬菌体裂解酶的抗菌机制、结构特征、抗菌作用以及利用基因工程手段制备重组噬菌体裂解酶等方面的研究进展,并探讨了噬菌体裂解酶作为新型抗菌药物的研究开发重点与应用前景。
- 陈蔚青王晓枫王普吴敏
- 关键词：抗菌机制抗菌作用
- 链球菌噬菌体裂解酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测被引量：3
- 2009年
- 噬菌体裂解酶是噬菌体产生的细胞壁水解酶,通过水解宿主菌细胞壁使子代噬菌体释放,在体外能高效且特异性地杀死细菌。本研究旨在克隆和表达链球菌噬菌体裂解酶PlyC,并测定其生物学活性。利用PCR方法扩增PlyC的2条肽链PlyCA和PlyCB,构建表达载体pET-32a(+)-PlyCA和pET-32a(+)-PlyCB,分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,以0.7 mmol/L IPTG在30 oC诱导7 h实现了高效表达,SDS-PAGE分析表明PlyCA和PlyCB表达量均可达菌体总蛋白的30%以上。采用Ni2+-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,其纯度大于95%。用透析复性方法得到目的产物重组链球菌噬菌体裂解酶PlyC,以浊度法和平板计数法检测其体外抗菌效果,扫描电子显微镜观察裂解酶作用前后细菌细胞形态变化。结果表明重组PlyC能特异性裂解化脓性链球菌(A组β-溶血性链球菌),以4μg/mL浓度作用于OD600为0.56的菌液60 min后杀菌率达99.6%,扫描电镜观察结果显示该酶作用于菌体后,链球菌细胞裂解,呈碎片状态。本研究为开发一种新型、高效的链球菌感染疾病治疗药物打下了基础。
- 陈蔚青王晓枫王普张德勇陈虹柯薇陆胤张建芬
- 关键词：链球菌纯化活性
