国家自然科学基金(30000208)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：庞建新徐江平苗佩宏程希远吴曙光更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学南方医科大学复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人端粒酶反转录功能区基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化
- 2006年
- 目的表达并纯化出包含所有功能基序的端粒酶催化亚基(hTERT)融合蛋白,为深入研究端粒酶作用机制、制备抗hTERT抗体和肽库筛选以端粒酶为靶的小分子抑制剂奠定基础。方法自行设计引物,以pLPC-hTERT为模板扩增出包括端粒酶发挥反转录功能所需的全部8个基序长为1 310 bp的基因片段,将PCR扩增的此片段克隆至带有6个连续组氨酸标签的原核表达载体pET-32a中,IPTG诱导表达后,用SDS-PAGE和Western-Blot(WB)检测确定表达出端粒酶反转录酶功能区融合蛋白,以8 M尿素溶解以包涵体形式存在的目的蛋白,用金属鳌合层析柱纯化融合蛋白并对之进行复性。结果经PCR、酶切、测序、SDS-PAGE和WB鉴定证实成功构建了表达质粒pET32a-hTERT,鉴定和测序结果亦证实包含全部8个基序的基因片段,凝胶电泳和WB确认表达出特异性的目的蛋白条带。结论成功构建pET32a-hTERT表达质粒,实现在大肠杆菌中高效表达,亲和层析纯化获得特异性的hTERT重组蛋白。
- 苗佩宏刘北一郑山根庞建新徐江平
- 关键词：端粒酶端粒酶反转录酶蛋白纯化
- 含hTERT片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞功能的影响被引量：2
- 2006年
- 目的观察含人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞(DCs)功能的影响。方法 ELISA试剂盒检测DCs培养液中IL-12水平;混合白细胞(MLR)反应检测含hTERT片段的重组逆转录病毒感染的 DCs(hTERT-DCs)和未感染的DCs(N-DCs)刺激同种异体淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测DCs表面分子CD80、 CD83、CD86和HLA-DR的变化;CytoTox 96非放射性细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果 hTERT-DCs和N-DCs在分泌IL-12的水平、刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力方面无明显差异;hTERT-DCs的 CD83表达水平低于N-DCs,同时,hTERT-DCs激发的CTL对端粒酶阳性的靶细胞杀伤率明显高于端粒酶阴性的靶细胞(P<0．05)。结论 hTERT-DCs尽管有可能阻止DCs自身的成熟,但在活化淋巴细胞、刺激淋巴细胞分化增殖的能力方面并没发生明显改变,并且还能激发hTERT特异性CTL。
- 胡贵方孙莉莎金宏欧程山蒋毅萍庞建新
- 关键词：HTERT逆转录病毒树突状细胞免疫治疗
- 人端粒酶逆转录酶功能区表位的筛选与鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的筛选并鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)功能区表位。方法应用差减筛选法,以抗hTERT多克隆抗体为靶筛选噬菌体12肽库,通过夹心ELISA、抗hTERT多抗特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果经3轮筛选,从随机挑取的24个噬菌体克隆中有13个克隆特异地与抗hTERT多抗结合,而不与正常小鼠IgG结合,其中11个克隆的氨基酸序列富含组氨酸(最高达41.6%)及亲水氨基酸(最高达91.67%)。结论得到11个序列不同的hTERT表位,为研制针对hTERT的小分子抑制剂提供了实验依据。
- 苗佩宏刘北一郑山根庞建新徐江平
- 关键词：人端粒酶逆转录酶噬菌体肽库肿瘤
- 端粒酶和肿瘤的研究进展被引量：5
- 2005年
- 苗佩宏庞建新徐江平
- 关键词：端粒端粒酶肿瘤病因学
- 端粒酶反转录功能区基因的表达和纯化被引量：3
- 2002年
- 通过PCR技术扩增出hTRT的目的片段,克隆至表达载体pET28 b中并转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后在52kDa处发现有外源基因的表达,密度扫描显示表达蛋白含量为20%。目标蛋白以包含体形式存在,含8mol/L尿素和10mmol/LDTT的裂解缓冲液溶解的包含体采用金属螯合层析有效分离出目标蛋白。免疫印迹实验表明:诱导出的融合蛋白是端粒酶反转录功能区基因所编码的蛋白质。
- 程希远庞建新吴曙光兰和魁任大明
- 关键词：端粒酶纯化
- 转录因子Sp1和Sp3对JurkatT细胞端粒酶活性的调节作用被引量：9
- 2002年
- 目的探讨转录因子Sp1、p3对JurkatT细胞端粒酶活性和端粒酶逆转录酶(hTERT)的调节作用。方法用脂质体将Sp1、Sp3表达载体转入JurkatT细胞,用Westernblotting方法检测蛋白表达水平;用端粒酶PCR-ELISA法检测细胞端粒酶活性并用银染显示端粒酶活性梯度;用RT-PCR方法检测hTERTmRNA水平。结果Sp1、Sp3载体转化36h的细胞Sp1、Sp3蛋白水平分别升高59.6%(P<0.01)和36.8%(P<0.05);随着Sp1表达水平的增加,端粒酶活性和hTERTmRNA水平明显增加,增加率分别为38.5%(P<0.05)和25.4%(P<0.05)。而Sp3表达载体对端粒酶活性和hTERTmRNA水平无明显影响。结论转录因子Sp1通过调节hTERTmRNA转录水平而调节JurkatT细胞端粒酶活性,Sp3无此作用。
- 庞建新程希远吴曙光
- 关键词：转录因子SP1细胞端粒酶活性白血病
