国家自然科学基金(30800343)
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
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- 相关机构：华中科技大学华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
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- 大鼠缝隙连接蛋白Connexin 43的shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建缝隙连接蛋白connexin 43(CX43)特异性shRNA重组腺病毒载体,为应用基因沉默技术从转录后水平进行基因治疗研究奠定基础。方法:合成CX43发夹样shRNA的DNA单链一对和对照单链scramble一对,退火后将其克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因的穿梭质粒pAd shRNA/H1,得到pAd shRNA/H1-CX43和pAd shRNA/H1-scramble。分别酶切及DNA测序鉴定后,经Pme I线性化后转化入BJ5187-AD-1感受态细菌,在细菌内进行同源重组构建含目的基因的重组腺病毒质粒载体。用Pac I酶切鉴定重组菌。将Pac I酶切重组的两种腺病毒质粒载体后,经脂质体转化293细胞进行包装得到重组的腺病毒颗粒,并通过293细胞绿色荧光表达反应重组腺病毒表达情况。将重组的腺病毒Ad-Cx43 shRNA和对照病毒Ad-scramble shRNA分别感染大鼠原代培养的星形胶质细胞,并检测星形胶质细胞CX43的表达。结果:证实穿梭质粒的以及重组腺病毒质粒均构建正确,腺病毒质粒转染293细胞后48 h即可见绿色荧光蛋白表达,10 d后全部细胞表达绿色荧光,并有半数细胞飘起,收获病毒感染培养星形胶质细胞后48 h,均有绿色荧光表达,经感染Ad-Cx43 shRNA的星形胶质细胞CX43的表达明显低于感染对照病毒Ad-scramble shRNA的星形胶质细胞。结论:成功构建表达大鼠CX43特异性发夹状shRNA的重组腺病毒载体,将为应用基因沉默技术研究CX43在神经系统疾病尤其是缺血性脑损伤中的作用提供依据。
- 汪琦徐逸王伟朱舟
- 关键词：CX43腺病毒载体缺血性脑损伤
- X射线对体外培养星形胶质细胞增殖的影响及机制研究被引量：1
- 2009年
- 目的:观察X射线照射对培养星形胶质细胞(AS)增殖的影响,为X射线的广泛应用提供理论依据。方法:将体外培养80%汇合的AS,在AS无血清培养基继续培养48h后分为对照组和放疗组,对照组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,放疗组更换含10%FBS的DMEM-F12培养基,并同时给与X射线照射,利用western印迹分析各组PCNA、p53、cyclinE的表达。结果:X射线照射后能降低S期细胞比率,呈剂量依赖性,但并不增加AS的凋亡率。通过对AS无血清培养48h后,大部分细胞周期同步于G0期,对照组更换培养基后12h出现PCNA、cyclinE表达水平增高;放疗组p53表达水平较对照组显著增高,PCNA、cyclinE表达水平较对照组显著降低。结论:X射线照射可以通过调控细胞周期有效抑制AS的增生。
- 朱舟徐逸陈华先潘邓记陈晨王伟
- 关键词：星形胶质细胞细胞周期X射线增殖
- 趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在神经系统疾病中的研究进展被引量：2
- 2011年
- 大脑曾被认为是免疫豁免器官,正常情况下免疫系统的细胞和分子不能进入大脑,因此不会影响其功能。但越来越多的研究发现,神经系统和免疫系统存在一些共同的分子将这两个独立的系统联系起来,趋化因子及其受体尤其是CXCL12/CXCR4就是其中的代表。近年来的研究表明许多伴有中枢免疫功能异常的中枢神经系统疾病都伴有CXCL12/CXCR4的异常,提示CXCL12/CXCR4可能参与其病理过程。
- 汪琦朱舟王伟
- 关键词：神经系统疾病趋化因子CXCL12CXCR4
- 含CXCL12基因的重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:构建并鉴定含小鼠CXCL12基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法:利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP;酶切、PCR鉴定;利用293细胞包装pAdeno-CXCL12-EGFP,荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-CXCL12-EGFP,转染pAdeno-CXCL12-EGFP的293细胞内可见EGFP表达。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的CXCL12和EGFP基因的腺病毒载体。
- 汪琦徐逸王伟朱舟
- 关键词：CXCL12趋化因子腺病毒中枢神经系统
- X射线对体外培养星形胶质细胞增生活化和分泌的影响被引量：2
- 2010年
- 目的观察X射线照射对培养星形胶质细胞(astrocyte,AS)增殖和分泌的影响。方法建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),分为对照组、划痕组和放疗组。利用免疫荧光观察胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxy uridine,BrdU)的表达,利用RT-PCR观察细胞因子IL-6和TNF-a的表达。结果划痕损伤刺激能使培养AS反应性增生活化。损伤后6h出现IL-6、TNF-a表达水平增高,24h后损伤周围BrdU阳性细胞率明显增加。通过X射线照射能抑制AS的BrdU表达,但并不能抑制损伤后IL-6和TNF-a的表达。结论X射线照射可以通过调控细胞周期,有效抑制损伤后AS的反应性增生,但不能对活化AS的IL-6和TNF-a的表达起到抑制作用。
- 朱舟汪琦徐逸王伟
- 关键词：星形胶质细胞X射线活化
